Prošla nedelja

Prošla nedelja

Sistem komplementa (C’)

Putevi aktivacijeBiološke posledice aktivacije

Regulacija aktivacije

ANTIGEN-ANTITELOREAKCIJE

ImunoaglutinacijaImunoprecipitacija

Antigen-antitelo (Ag-At) reakcije čine osnovu mnogih in vitro metoda koje se obavljaju u laboratorijskim uslovima u dijagnostičke ili istraživačke svrhe.

Tradicionalno se zovu i serološke reakcije

Ispituje se prisustvo antigena ili antitela u odgovarajućem uzorku (serumu, likvoru, ćelijskoj kulturi...).

- drugi molekuli (npr. citokini, hormoni, komponente C’, tumor markeri, proteini akutne faze , Ig...)

- infektivni agens ili njegov deo (npr. HbsAg, p24 HIV...)

- ukupni Ig (pojedine klase) ili specifična At za određeni Ag

Ag-At reakcije (opšte osobine)

1. Kvalitativne

2. Kvantitativne

TITAR je mera količine specifičnih antitela i predstavlja vrednost (recipročnu) najvećeg razblaženja uzorka koji daje pozitivnu reakciju

POZITIVAN

NEGATIVAN

Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml ili IU)

Specifična At - TITAR (npr. 1/64 ili 64)

Mogu da budu:

Rezultat:

Ag-At reakcije (opšte osobine)

Ukupna At - KONCENTRACIJA (npr. IgG 13,5 mg/ml)

Kontrole - pozitivna

- negativnaBez validnih kontrola test nema

značaj

Vreme (nedelje)

Količ

ina a

nti

tela

u s

eru

mu

Prvi susret sa patogenom

Ponovni susretsa patogenom

Primarni i sekundarni humoralni odgovor

eventualno IgA i IgEviši aviditet

IIgM

IIgM, IgGIIgG

IViše IgG

eventualno IgM

IMUNOAGLUTINACIJA

IMUNOAGLUTINACIJA je reakcija između korpuskularnog

(nerastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih

antitela

Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala

aglutinacijom (slepljivanjem, zgomilavanjem) čestica

Vidljivi aglutinat se javlja ako je odnos antitela i antigena

približno

jednak (optimalan odnosno ekvivalentni odnos)

Najčešće se koristi za identifikaciju bakterija i krvnih

grupa

VIŠAK ANTIGENAVIŠAK ANTITELA

EKVIVALENTAN(OPTIMALAN)

ODNOS

Ag-At KOMPLEKSI:

AGLUTINACIJA:

REZULTAT:

MALI

NE POSTOJI

NEPOUZDAN(LAŽNO NEGATIVAN)FENOMEN PROZONE

VELIKI

POSTOJI

POUZDAN(POZITIVAN)

MALI

NE POSTOJI

NEPOUZDAN(LAŽNO NEGATIVAN)

IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)

DIREKTNA(Ag je deo čestice)

IMUNOAGLUTINACIJA


Detekcija AgIdentifikacija

bakterija(enterobakterije)

Primena (Primer)

Direktna aglutinacija(identifikacija bakterija)

IMUNOAGLUTINACIJA


Detekcija At BAB test(At na brucelu)

Primena (Primer)

IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag ili At je pasivno vezano za česticu-nosač)

Detekcija At (Ag vezan za nosač)

Lateks RF test(reumatoidni

faktor)

Primena (Primer)

Indirektna aglutinacija


IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag ili At je pasivno vezano

za česticu-nosač) Detekcija Ag (At vezano za

nosač)

HBsAg test(hepatitis B virus)

Primena (Primer)

Indirektna aglutinacija

Detekcija Ag (At vezano za

nosač)

IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)


Detekcija Ag

Detekcija At

Identifikacijabakterija

(enterobakterije)

Primena (Primer)


BAB test(At na brucelu)

Lateks RF test(reumatoidni

faktor)

Detekcija Ag (At vezano za

nosač)

HBsAg test(hepatitis B virus)

IMUNOPRECIPITACIJA

IMUNOPRECIPITACIJA je reakcija između solubilnog

(rastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela

Najčešće se koristi za merenje količine proteina plazme i drugih

telesnih tečnosti (imunoglobulina, komponenti komplementa

itd.)

Rezultat reakcije je precipitat (talog), tj. dolazi do izdvajanja

antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga

Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog

(optimalnog) odnosa koncentracija antitela i antigena.

Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u:

tečnoj sredini

polučvrstoj sredini (gelu)

slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta)

slobodnom difuzijom (talog se formira posle više dana)pomoću električne struje (talog se formira posle nekoliko sati)

IMUNOPRECIPITACIJA

U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

U TEČNOJ SREDINI

RING test(Kvalitativna)

Askolijeva reakcija(antraks)

PRIMER

Interfacijalni (interfazni) test prstena – RING test(princip)

IMUNOPRECIPITACIJA

U TEČNOJ SREDINI

Nefelometrija(Kvantitativna)

Određivanje koncentracije

proteina u serumu(Ig, komponente C‛)

PRIMER

Nefelometrija(princip)

IMUNOPRECIPITACIJA


Dvostruka imunodifuzija(Kvalitativna)

Elekova proba(difterija)

PRIMER

Dvostruka imunodifuzija u gelu – Elekova proba (princip)

IMUNOPRECIPITACIJA


RID test(Kvantitativna)

PRIMER



RID

IgG

1

2

3

4 5

Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test(princip)

1 standard poznate koncentracije



4 uzorak pacijenta

5 uzorak pacijenta

At u gelu

Ag u rupice:

Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test(princip)

Ag – koncentracija (mg/ml)

D2 (mm2)

1

2

3

4 5

Standardna (kalibraciona) kriva

IMUNOPRECIPITACIJA


U TEČNOJ SREDINI

RING test(Kvalitativna)

Nefelometrija(Kvantitativna)

Dvostruka imunodifuzija(Kvalitativna)

RID test(Kvantitativna)

Askolijeva reakcija(antraks)

određivanje koncentracije


Elekova proba(difterija)

PRIMER



10.____9.____8.____7.____5._____4._____3._____2._____

imunoprecipitacije u gelu j.C3 komponenta komplementa u krvi može da se meri

10.

indirektna aglutinacija i.Elekova proba je primer 9.

kvantitativna tehnika h.Nefelometrija je 8.

direktnom aglutinacijom g.Ring test je primer imunoprecipitacije7.

u tečnom medijumu f.Imunoprecipitacija može da se odigra u6.

kvalitativna tehnika e.Solubilan antigen ne može da se meri 5.

tečnoj sredini ili gelu d.Lateks aglutinacija je4.

lažno negativna aglutinacija u prisustvu viška antitela

c.Za krajnju identifikaciju nekih bakterija iz familije Entrobacteriaceae se koristi

3.

direktna aglutinacija b.Fenomen prozone je2.

nefelometrijski i RID testom a.Aglutinacija je1.

1._____ 6.____c b i g d f h je a

Sledeća nedelja

Predavanje:Odbrana od virusnih, gljivičnih i parazitskih infekcija

Seminar:Enzimski imunotest - ELISA (praktična primena)

Imunofluorescencija (praktična primena)

Prošla nedelja

Documents

Transcript of Prošla nedelja