Prošla nedelja
-
Upload
leah-buckley -
Category
Documents
-
view
88 -
download
0
description
Transcript of Prošla nedelja
Prošla nedelja
Sistem komplementa (C’)
Putevi aktivacijeBiološke posledice aktivacije
Regulacija aktivacije
ANTIGEN-ANTITELOREAKCIJE
ImunoaglutinacijaImunoprecipitacija
Antigen-antitelo (Ag-At) reakcije čine osnovu mnogih in vitro metoda koje se obavljaju u laboratorijskim uslovima u dijagnostičke ili istraživačke svrhe.
Tradicionalno se zovu i serološke reakcije
Ispituje se prisustvo antigena ili antitela u odgovarajućem uzorku (serumu, likvoru, ćelijskoj kulturi...).
- drugi molekuli (npr. citokini, hormoni, komponente C’, tumor markeri, proteini akutne faze , Ig...)
- infektivni agens ili njegov deo (npr. HbsAg, p24 HIV...)
- ukupni Ig (pojedine klase) ili specifična At za određeni Ag
Ag-At reakcije (opšte osobine)
1. Kvalitativne
2. Kvantitativne
TITAR je mera količine specifičnih antitela i predstavlja vrednost (recipročnu) najvećeg razblaženja uzorka koji daje pozitivnu reakciju
POZITIVANNEGATIVAN
Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml ili IU)
Specifična At - TITAR (npr. 1/64 ili 64)
Mogu da budu:
Rezultat:
Ag-At reakcije (opšte osobine)
Ukupna At - KONCENTRACIJA (npr. IgG 13,5 mg/ml)
Kontrole - pozitivna- negativna Bez validnih kontrola test nema
značaj
Vreme (nedelje)
Količ
ina
antit
ela
u se
rum
uPrvi susret sa patogenom
Ponovni susretsa patogenom
Primarni i sekundarni humoralni odgovor
eventualno IgA i IgEviši aviditet
IIgM
IIgM, IgGIIgG
IViše IgG
eventualno IgM
IMUNOAGLUTINACIJA
IMUNOAGLUTINACIJA je reakcija između korpuskularnog (nerastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela
Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala aglutinacijom (slepljivanjem, zgomilavanjem) čestica
Vidljivi aglutinat se javlja ako je odnos antitela i antigena približno
jednak (optimalan odnosno ekvivalentni odnos)
Najčešće se koristi za identifikaciju bakterija i krvnih grupa
VIŠAK ANTIGENAVIŠAK ANTITELA
EKVIVALENTAN(OPTIMALAN)
ODNOS
Ag-At KOMPLEKSI:
AGLUTINACIJA:
REZULTAT:
MALI
NE POSTOJI
NEPOUZDAN(LAŽNO NEGATIVAN)FENOMEN PROZONE
VELIKI
POSTOJI
POUZDAN(POZITIVAN)
MALI
NE POSTOJI
NEPOUZDAN(LAŽNO NEGATIVAN)
IMUNOAGLUTINACIJA
INDIREKTNApasivna
(Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)
DIREKTNA(Ag je deo čestice)
IMUNOAGLUTINACIJA
DIREKTNA(Ag je deo čestice)
Detekcija AgIdentifikacija
bakterija(enterobakterije)
Primena (Primer)
Direktna aglutinacija(identifikacija bakterija)
IMUNOAGLUTINACIJA
DIREKTNA(Ag je deo čestice)
Detekcija At BAB test(At na brucelu)
Primena (Primer)
IMUNOAGLUTINACIJA
INDIREKTNApasivna
(Ag ili At je pasivno vezano za česticu-nosač)
Detekcija At (Ag vezan za nosač)
Lateks RF test(reumatoidni
faktor)
Primena (Primer)
Indirektna aglutinacija
Detekcija At (Ag vezan za nosač)
IMUNOAGLUTINACIJA
INDIREKTNApasivna
(Ag ili At je pasivno vezano
za česticu-nosač) Detekcija Ag (At vezano za
nosač)
HBsAg test(hepatitis B virus)
Primena (Primer)
Indirektna aglutinacija
Detekcija Ag (At vezano za
nosač)
IMUNOAGLUTINACIJA
INDIREKTNApasivna
(Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)
DIREKTNA(Ag je deo čestice)
Detekcija Ag
Detekcija At
Identifikacijabakterija
(enterobakterije)
Primena (Primer)
Detekcija At (Ag vezan za nosač)
BAB test(At na brucelu)
Lateks RF test(reumatoidni
faktor)
Detekcija Ag (At vezano za
nosač)
HBsAg test(hepatitis B virus)
IMUNOPRECIPITACIJA
IMUNOPRECIPITACIJA je reakcija između solubilnog (rastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela
Najčešće se koristi za merenje količine proteina plazme i drugih telesnih tečnosti (imunoglobulina, komponenti komplementa itd.)
Rezultat reakcije je precipitat (talog), tj. dolazi do izdvajanja antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga
Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog (optimalnog) odnosa koncentracija antitela i antigena.
Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u:
tečnoj sredini
polučvrstoj sredini (gelu)
slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta)
slobodnom difuzijom (talog se formira posle više dana)pomoću električne struje (talog se formira posle nekoliko sati)
IMUNOPRECIPITACIJA
U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)
U TEČNOJ SREDINI
RING test(Kvalitativna)
Askolijeva reakcija(antraks)
PRIMER
Interfacijalni (interfazni) test prstena – RING test(princip)
IMUNOPRECIPITACIJA
U TEČNOJ SREDINI
Nefelometrija(Kvantitativna)
Određivanje koncentracije
proteina u serumu(Ig, komponente C‛)
PRIMER
Nefelometrija(princip)
IMUNOPRECIPITACIJA
U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)
Dvostruka imunodifuzija(Kvalitativna)
Elekova proba(difterija)
PRIMER
Dvostruka imunodifuzija u gelu – Elekova proba (princip)
IMUNOPRECIPITACIJA
U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)
RID test(Kvantitativna)
PRIMER
Određivanje koncentracije
proteina u serumu(Ig, komponente C‛)
RIDIgG
1
23
4 5
Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test(princip)
1 standard poznate koncentracije
2 standard poznate koncentracije
3 standard poznate koncentracije
4 uzorak pacijenta
5 uzorak pacijenta
At u gelu
Ag u rupice:
Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test(princip)
Ag – koncentracija (mg/ml)
D2 (mm2)
1
2
3
4 5
Standardna (kalibraciona) kriva
IMUNOPRECIPITACIJA
U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)
U TEČNOJ SREDINI
RING test(Kvalitativna)
Nefelometrija(Kvantitativna)
Dvostruka imunodifuzija(Kvalitativna)
RID test(Kvantitativna)
Askolijeva reakcija(antraks)
određivanje koncentracije
proteina u serumu(Ig, komponente C‛)
Elekova proba(difterija)
PRIMER
Određivanje koncentracije
proteina u serumu(Ig, komponente C‛)
10.____9.____8.____7.____5._____4._____3._____2._____
imunoprecipitacije u gelu j.C3 komponenta komplementa u krvi može da se meri
10.
indirektna aglutinacija i.Elekova proba je primer 9.
kvantitativna tehnika h.Nefelometrija je 8.
direktnom aglutinacijom g.Ring test je primer imunoprecipitacije7.
u tečnom medijumu f.Imunoprecipitacija može da se odigra u6.
kvalitativna tehnika e.Solubilan antigen ne može da se meri 5.
tečnoj sredini ili gelu d.Lateks aglutinacija je4.
lažno negativna aglutinacija u prisustvu viška antitela
c.Za krajnju identifikaciju nekih bakterija iz familije Entrobacteriaceae se koristi
3.
direktna aglutinacija b.Fenomen prozone je2.
nefelometrijski i RID testom a.Aglutinacija je1.
1._____ 6.____c b i g d f h je a
Sledeća nedelja
Predavanje:Odbrana od virusnih, gljivičnih i parazitskih infekcija
Seminar:Enzimski imunotest - ELISA (praktična primena)
Imunofluorescencija (praktična primena)