组织样品送样建议 A0 组织... · 2018-11-26 · 组织样品送样建议...

组织样品送样建议

文件编号： SOP-SMM-032

版本号： A3

生效日期： 2018-11-23


文件编号：SOP-SMM-032 版本号：A3 第1页共 19 页

目录

关于本指南 ............................................................................................................................................................... 3

1 组织送样量要求 ............................................................................................................................................... 5

1.1 DNA 提取组织送样量要求 ........................................................................................................................ 5

1.1.1 de novo（二代） ..................................................................................................................................... 5

1.1.2 Meta .......................................................................................................................................................... 5

1.1.3 重测序 ...................................................................................................................................................... 6

1.1.4 表观 .......................................................................................................................................................... 6

1.1.5 免疫组库测序 .......................................................................................................................................... 6

1.1.6 基因分型 .................................................................................................................................................. 7

1.2 RNA 提取组织送样量要求 ........................................................................................................................ 7

1.2.1 常规 RNA 类产品.................................................................................................................................... 7

1.2.2 环状 RNA 测序........................................................................................................................................ 7

1.2.3 免疫组库测序 .......................................................................................................................................... 8

2 组织采集保存指南 ........................................................................................................................................... 9

2.1 细胞 ............................................................................................................................................................ 9

2.1.1 细胞样品收集方法 .................................................................................................................................. 9

2.1.2 细胞样品的保存及运输要求 ................................................................................................................ 10

2.2 全血 .......................................................................................................................................................... 10

2.2.1 用于提取 DNA 的全血保存方法及运输要求 ...................................................................................... 11

2.2.2 用于提取 RNA 的全血保存方法及运输要求 ...................................................................................... 11

2.3 动物组织（不包括节肢动物） ............................................................................................................... 11

2.3.1 用于提取 DNA 的动物组织保存方法及运输要求 .............................................................................. 11

2.3.2 用于提取 RNA 的动物组织保存方法及运输要求 .............................................................................. 12

2.4 节肢动物 .................................................................................................................................................. 12

2.4.1 液氮速冻法 ............................................................................................................................................ 13

2.4.2 商业核酸保护液保存法 ........................................................................................................................ 13

2.5 植物组织 .................................................................................................................................................. 13



2.5.1 液氮速冻法 ............................................................................................................................................ 13

2.5.2 商业核酸保护液保存法 ........................................................................................................................ 14

2.6 菌体样品 .................................................................................................................................................. 14

2.6.1 液氮速冻法 ............................................................................................................................................ 14

2.7 唾液 .......................................................................................................................................................... 14

2.7.1 用于提取 DNA 的唾液保存方法及运输要求 ..................................................................................... 14

2.8 Meta .......................................................................................................................................................... 14

2.8.1 液氮速冻法 ............................................................................................................................................ 14

2.8.2 商业核酸保护液保存法 ........................................................................................................................ 16

2.9 FFPE ......................................................................................................................................................... 16

2.9.1 用于提取 DNA 的保存方法及运输要求.............................................................................................. 16

2.9.2 用于提取 RNA 的保存方法及运输要求 .............................................................................................. 16

2.10 血清/血浆 ............................................................................................................................................... 16

2.10.1 血清样本制备 ..................................................................................................................................... 16

2.10.2 血浆样本制备 ..................................................................................................................................... 17

2.11 定制化类产品 ........................................................................................................................................ 17



关于本指南

本指南详细介绍 BGI 科研服务常规项目组织样品的送样要求及制备方法。采集送样前请

详细阅读本指南。

声明

对于危害程度为第一、二类的高致病性样品，只接收提取后的核酸样品，不接收组织、

血液、菌体等样品。对于危害程度为三、四类的致病性或传染性的样品（组织、血液、菌体

等），必须先通过销售或项目管理与华大技术人员沟通，确认无高致病和传染性且能进行后续

实验后再安排样品寄送。危害程度的判定标准具体参见《人间传染的病原微生物名录》。

如有任何疑问，请联系华大基因有限公司客服邮箱 [email protected] 或客服电话

400-706-6615。

提取风险提示和注意事项：

核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及

环境等因素息息相关，故 BGI 无法完全保证提取质量，望合作伙伴知悉理解，并做好组织备

份。为保障获得相对较高质量的核酸，请合作伙伴务必按照以下指导原则准备样本，更多细

节请参照 BGI《组织送样建议》。对于难以获得的珍贵样本、微量样本，建议合作伙伴自行提

取。

a) 组织速冻时间：组织离体后，胞内核酸便开始降解，尤其是 RNA，故采集时，目的组织

离体后，需立即速冻，建议 5min 内完成，越快越好。

b) 组织送样量：建议送样量适用于 95%的物种组织，少部分组织因胞内核酸量较低，需适

当增加送样量，比如动物皮肤，植物果实、根等。请严格按照《组织送样建议》要求送样，

送样量过少或过多均不利于提取实验，下限为建议量的一半，上限为建议量的 3 倍。随着技

术发展，当前大部分产品建库起始量较低，不需要太多组织，采样量过多反而会造成速冻不

彻底、提取取样困难、冻融降解等危险。

c) 组织保存管的选择：所有组织样品务必使用下图/表的离心管或螺纹管保存，切勿直接装

入密封袋（低温冻脆易破裂，导致样品泄露，交叉污染）保存。

mailto:[email protected]



组织类型保存管选择

植物组织&大型块状菌类 5 mL 螺纹旋盖保存管

动物组织 2 mL 螺纹旋盖保存管

细胞&单细胞菌类 1.5 mL EP 管

Meta 类 2.0 mL EP 管

DNA de novo 产品组织 50 mL 螺纹旋盖离心管

d) 组织样品保存方法选择：首选液氮速冻；没有液氮条件的，可直接放入-80℃冰箱冻存；

环境条件限制的，可使用商业核酸保护液保存（这类试剂对动物组织可起到一定的效果，植

物、菌类、细胞，微量样品不建议使用），并严格按相应试剂说明操作。

e) 冻融组织：组织冻存后，一旦冻融，RNA 降解概率大于 80%，几乎不可能提取成功，

此类组织不建议送样。请合作伙伴送样前注意组织保存状态，确保组织未发生过冻融情况。

f) 长年保存的组织：保存时间超过一年的组织不建议送样。

g) 组织分离要求：合作伙伴需自行分离好绝对目的部位组织（如目的部位为叶片，就不能

含有茎），提取实验时无法精确取样，无法称重。提取 kit 只能装载一定组织量，组织量多的

不能全部取样，只随机选取适量组织提取，也无法多管合并混匀提取，有这类特殊实验设计

要求的，请合作伙伴提取核酸后送样。

h) 对于同一个组织样品需要同时提取 DNA 和 RNA 的，请务必分成两管分批次送样。



1 组织送样量要求

1.1 DNA 提取组织送样量要求

1.1.1 de novo（二代）

产品类型

组织类型

≤800bp 2~10 kb ≥20 kb ≤800bp PCR

Free

新鲜培养细胞 (细胞数) ≥5×106cell ≥1×107cell ≥5×107cell ≥1×107cell

新鲜动物组织干重 ≥50mg ≥300mg ≥800mg ≥300mg

新鲜植物组织干重 ≥200mg ≥800mg ≥1g ≥800mg

全血（哺乳动物） ≥1 mL ≥2 mL ≥3 mL ≥2 mL

全血（非哺乳动物） ≥0.5mL ≥1mL ≥1 mL ≥1mL

菌体 (细胞数或干重) ≥5×106cell

or≥200mg

≥2×107cell

or≥800mg ≥5×107cell or≥1g

≥1×107cell or

≥800mg

注：三代测序组织送样要求参见《PacBio 项目组织送样建议》

1.1.2 Meta

产品类型

组织类型宏基因组测序扩增子测序

Meta (Stool) 600mg-2g 100mg-1g

Meta (Soil) 600mg-2g 200mg-1g

其它 Meta 类型送样前咨询 ≥200mg

Meta 类样品组织类型复杂，不同样品类型，微生物丰度不一，且含一定量已经凋亡微生

物，会有一定降解，提取结果波动大。



1.1.3 重测序

产品类型

组织类型

WGS(PCR free

参考 1.1.1) WES 目标区域捕获 RAD GBS

新鲜培养细胞 (细胞数) ≥5×106cell ≥1×106cell

新鲜动物组织干重 ≥50mg ≥50mg

新鲜植物组织干重 ≥200mg ≥200mg

全血（哺乳动物） ≥1 mL ≥1 mL

全血（非哺乳动物） ≥0.5mL ≥0.5mL

菌体 (细胞数或干重) ≥5×106cell or ≥200mg —

FFPE ≥ 10 片，未染色，100 mm2，5 ~ 10μm 厚度 —

Saliva — ≥1mL (推荐 DNA

Genotek collection kit)

1.1.4 表观

产品类型

组织类型 WGBS

TBS

Nimblegen EZ Agilent

新鲜培养细胞（细胞数） ≥1×106cell ≥1×106cell ≥2×106cell

新鲜动物组织干重 ≥50mg ≥50mg ≥100mg

新鲜植物组织干重 ≥200mg ≥200mg ≥300mg

全血（哺乳动物） ≥1 mL ≥1 mL ≥2 mL

全血（非哺乳动物） ≥0.5mL ≥0.5mL ≥1mL

1.1.5 免疫组库测序

产品类型

组织类型免疫组库

新鲜培养细胞（细胞数） ≥1×106cell

新鲜动物组织干重 ≥200mg



全血（哺乳动物） ≥2 mL

1.1.6 基因分型

产品类型

组织类型基因分型



新鲜植物组织干重 ≥200mg

全血（哺乳动物） ≥1 mL

全血（非哺乳动物） ≥0.5mL

唾液 ≥1 mL(推荐 DNA Genotek 管收集)

1.2 RNA 提取组织送样量要求

1.2.1 常规 RNA 类产品

产品类型

组织类型转录组表达谱 LncRNA 真核 small RNA




全血

≥ 1 mL 全血收集的淋巴细胞 or

≥ 1 mL Paxgene Blood RNA tube / RNAprotect® Animal Blood

Tubes 收集的全血

菌体 (细胞数或干重) ≥2×105cell or ≥30mg

FFPE ≥ 5 片，未染色，100 mm2，5 ~ 10μm 厚度

1.2.2 环状 RNA 测序

产品类型 CirRNA-Seq



组织类型




全血（哺乳动物） ≥ 2.5 mL 淋巴细胞 or ≥ 2.5 mL Paxgene Blood RNA tube / RNAprotect®

Animal Blood Tubes 收集的全血

1.2.3 免疫组库测序

产品类型

组织类型免疫组库



全血（哺乳动物） ≥ 1 mL 全血收集的淋巴细胞 or ≥ 1 mL Paxgene Blood RNA tube /

RNAprotect® Animal Blood Tubes 收集的全血



2 组织采集保存指南

2.1 细胞

2.1.1 细胞样品收集方法

2.1.1.1 刮取式分离方法收集贴壁细胞：

倒掉培养基，加入 1.5mL 无菌 1×PBS 溶液，用移液枪吹打细胞，直到细胞全部脱离瓶

底为止。对于贴壁牢固的培养细胞，可以用细胞刮勺剥离细胞。将细胞连同 PBS 溶液一起

收集到无核酸酶的 2.0mL EP 管中，300-500×g （1100-1500 rpm）离心 5 分钟，弃上清，收

集沉淀细胞。

2.1.1.2 胰蛋白酶处理方法收集贴壁细胞：

a) 倒掉培养液，用无菌 1× PBS 溶液洗涤细胞，然后加入正好能盖住单层细胞的胰酶溶液：

如 150mm 培养瓶需加入 2mL 胰酶溶液，100mm 培养皿需加入 1mL 胰酶溶液。轻轻晃

动器皿使胰酶均匀分布在细胞层上，直到细胞松动（一般 1-2 分钟）；

b) 一旦细胞松动，尽快弃去胰酶溶液（倾斜平皿或培养瓶以便用枪头尽量吸去多余的溶

液），加入 1×PBS 溶液，用移液枪吹下贴壁的细胞；

c) 将细胞连同 PBS 溶液一起收集到 Nuclease-free 的螺纹旋盖的 EP 管中，300-500×g（1100-

1500rpm）离心 5 分钟，弃上清，收集沉淀细胞。

2.1.1.3 悬浮细胞的收集：

a) 将悬浮的细胞连同培养液一起倒入合适的离心管中，300-500×g （1100-1500 rpm）离心

5 分钟；

b) 使用无菌 1×PBS 溶液洗涤沉淀的细胞，转入 1.5 或 2.0 mL 离心管中，300-500×g （1100-

1500 rpm）离心 5 分钟，弃上清，收集沉淀的细胞。

2.1.1.4 ChIP-Seq 细胞样品

用于ChIP-Seq细胞样品：一次样品制备至少需要5×107 个培养的细胞，多次制备细胞总

数=样品制备次数×5×107 个（人和小鼠细胞系，1×107可以考虑建库，为增加建库成功率请

尽可能提供更多的细胞）。送样时需同时提供单独分装的一管小量的样品(正式实验样品总

量的1/10)以供BGI做前期检测；特殊类别组织需提前协商提取事宜。



A. X-ChIP 送样前处理

a) 用 PBS 缓冲液（pH7.4）新鲜配制浓度为 1%的甲醛溶液，并置于 37 ℃水浴锅预热待用；

b) 收集细胞于 15 mL 离心管中，850 g 离心 5 min 后弃除细胞培养基，加入 5 mL 预热的甲醛

溶液，重悬细胞，37 ℃放置 10 min，每隔 3-5 min 混匀一次；

c) 加入终浓度为 125 mM 的甘氨酸终止交联，混匀后室温摇匀 5 min；

d) 850 g 离心 5 -15min 后收集细胞，用预冷的 PBS 缓冲液清洗细胞 2 次，离心去掉吸去上清；

e) 滴加 1 mL 冰预冷的 PBS 完全液（PBS+1×Protein Inhibitor Cocktail）至离心管中，然后将

所有细胞转入离心管中。850 g 离心 5 min 后去除上清，收集好细胞，置于-80 ℃冰箱冻存，

或大体积干冰运输，且要保证华大在收到样品开箱检验时有足够的干冰剩余。

B. N-ChIP 送样前处理

a) 离心收集细胞于 15mL 离心管中；

b) 用预冷的 PBS 缓冲液清洗细胞 2 次；

c) 滴加 1 mL 冰预冷的 PBS 完全液（PBS+1×Protein Inhibitor Cocktail）至离心管中，然后将

所有细胞转至离心管中。850 g 离心 5 min 后去除上清，收集好细胞，置于-80 ℃冰箱冻存，

或大体积干冰运输，且要保证华大在收到样品开箱检验时有足够的干冰剩余。

2.1.2 细胞样品的保存及运输要求

2.1.2.1 DNA 提取

液氮速冻法：离心收集的细胞直接液氮速冻后，转移至-80℃低温保存，送样时选择干冰

运输寄送。

2.1.2.2 RNA 提取

液氮速冻法：离心收集的细胞直接液氮速冻后，转移至-80℃低温保存，送样时选择干冰

运输寄送。

TRIzol 裂解法：

a) 离心收集的细胞立速溶于 TRIzol 裂解，参考用量为每 1×106 个细胞加 1 mL TRIzol；

b) 细胞溶于 TRIzol 后，如出现成团，需用吸头将细胞团吹打散，或者激烈震荡混匀，使细

胞完全溶于 TRIzol 中充分裂解；

c) 之后转移至-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

2.2 全血



2.2.1 用于提取 DNA 的全血保存方法及运输要求

2.2.1.1 EDTA 管采集

要求为全血样本，使用 EDTA 抗凝的采血管采集样品（由于会影响后续建库实验，禁止

使用肝素抗凝），采集血液时，必须经过抗凝，避免出现凝结成块。新鲜采集好的抗凝血液，

用移液器转移到 2mL 离心管中，足量冰袋或干冰寄送；冷冻的血液，干冰寄送。注意：由于

EDTA 抗凝采血管大多为玻璃易碎材质，切勿使用采血管原管寄送，以防采血管在运输转移

途中破裂，造成样品污染、损失。

2.2.2 用于提取 RNA 的全血保存方法及运输要求

全血 mRNA 中含有高丰度的 globin mRNA 转录本。这些转录本可以占到全部 mRNA 组

分中的 70%。这些转录本序列保守，研究价值极为有限，因此其存在会造成数据浪费，并显

著降低对其他低丰度转录本检出的灵敏性。由于 globin mRNA 主要来自成熟红细胞，因此

BGI 强烈建议全血提取时先分离白细胞后再提取 RNA。若实在无条件分离白细胞，可以用全

血收集管送样，但务必与销售代表先行沟通。

2.2.2.1 分离白细胞或有核细胞（须在血液采集后半小时内进行，血液不能冻存）

a) 在已加入抗凝剂（推荐 EDTA，禁止使用肝素）的新鲜全血中加入等体积 PBS（1×），充

分混匀；

b) 缓慢转入另一已加入淋巴细胞分离液的离心管中，并使上述混合液处于淋巴细胞分离液

液面之上（即两种液体不要混合，保留清晰的接口），3000 g 离心 30 min；

c) 用移液器小心分离出白细胞层；用 PBS（1×）清洗白细胞，离心回收白细胞，弃去上清；

d) 按 2mL 血液分离的白细胞加入 1mL TRizol 的比例加入适量 TRIzol 试剂，用吸头将细胞

团吹打散，或者激烈震荡混匀，使细胞完全溶于 TRIzol 中充分裂解；

d) 转移至-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

2.2.2.2 使用 PAXgene™ Blood RNA Tubes (16x100 mm / 2.5mL)

a) 产品名称：Cat No. 762165 PAXgene Blood RNA Tube (16x100 mm / 2.5mL)；

b) 操作方法详见产品说明书，并按照说明书操作保存运输样品。

2.3 动物组织（不包括节肢动物）

2.3.1 用于提取 DNA 的动物组织保存方法及运输要求

2.3.1.1 液氮速冻法



a) 活体取材后立即用干净清水或 0.9％生理盐水漂洗，以去除血渍和污物，并剔除结缔组织

和脂肪组织等非研究所需的组织，吸干材料表面的液体；

b) 将组织样品分割成约 50 mg 的小块（约黄豆大小），液氮速冻后，放入干净的带螺纹旋盖

的保存管中，组织样品装入到保存管前务必要切成小块，切勿大块组织直接塞入保存管中，

会导致提取时组织难以从管中取出，加大降解风险；

c) 转移至-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

2.3.1.2 商业核酸保护液保存法

如果采用商业核酸保护液保存样本，请一定严格按照试剂说明书要求规范操作，使组织

块厚度尽量保持在 5mm 左右，以保证试剂充分渗透组织细胞内。

活体组织离体后，建议在 3min 内进行液氮速冻，速冻前操作时间越长，核酸降解的可能

性越大。

2.3.2 用于提取 RNA 的动物组织保存方法及运输要求

2.3.2.1 液氮速冻法

a) 活体取材后立即用干净清水或 0.9％生理盐水漂洗，以去除血渍和污物，并剔除结缔组织

和脂肪组织等非研究所需的组织类型，吸干材料表面的液体；

b) 将组织样品分割成约 50 mg 的小块（约黄豆大小），液氮速冻后，放入干净的带螺纹旋盖

的保存管中。组织装入到保存管前务必要切成小块，切勿大块组织直接塞入保存管中，会导

致提取时组织难以从管中取出，加大降解风险。

2.3.2.2 TRIzol 法

a) 如果使用 TRIzol 裂解液保存送样，请务必先进行液氮研磨破碎，然后溶于 TRIzol 中，参

考用量为 20-30mg/mL TRIzol，组织样品切勿过量；

b) 震荡混匀，常温裂解 5 min 后，转移至-80℃低温保存，运输时选择干冰寄送。


如果使用 RNAlater 之类的商业核酸保护液保存组织样品，请严格按照相应的产品使用说

明操作。尽量使组织块尺寸保持在 5mm 左右，过小不利于样本收集，过大则保护液不能均匀

的渗透到组织细胞内。

2.4 节肢动物



2.4.1 液氮速冻法

2.4.1.1 昆虫组织

a) 个体小的，如蚊子、蚂蚁，直接放入干净带螺纹旋盖的保存管中，液氮速冻；

b) 个体大的，如毛毛虫，取得活体组织后，用清水清洗，以去除污物，吸干表面液体。将

组织样品分割成约 50 mg 的小块（约黄豆大小），液氮速冻后，放入干净的带螺纹旋盖保存管

中；


2.4.1.2 甲壳类节肢动物（虾蟹等）

a) 取得活体组织后，用清水清洗，以去除污物，吸干表面液体；

b) 解剖活体组织，只取软肉组织，将组织样品割成约 50 mg 的小块（约黄豆大小），液氮速

冻后，放入干净的带螺纹旋盖保存管中；


2.4.2 商业核酸保护液保存法

2.4.2.1 昆虫组织

取得活体组织后，用清水清洗，以去除污物，吸干表面液体。将样品分割成 5mm 左右的

小块（组织块越小，保存效果越好），放入装有商业核酸保护液的螺纹旋盖管中。

2.4.2.2 甲壳类的节肢动物（虾蟹等）

a) 取得活体组织后，用清水清洗，以去除污物，吸干表面液体；

b) 解剖活体组织，只取软肉组织，并将组织分割成 5mm 左右的小块（组织块越小，保存效

果越好），放入装有商业核酸保护液的螺纹旋盖管中，组织切割处理时应尽量在冰上进行，防

止样品降解。

2.5 植物组织


a) 植物材料取材后用清水将材料表面的灰尘及泥土冲洗干净，吸干材料表面的液体；

b) 将样品分割成 50~100 mg 左右的小块，放入干净的带螺纹旋盖的保存管中，立即使用液

氮速冻。





由于植物含细胞壁，从已有经验看来，RNAlater 之类的核酸保护液难以充分渗透，对于

植物样品提取效果较差，不建议使用；

若条件有限，只能使用核酸保护液，请严格按照相应的产品使用说明操作。尽量使组织

块尺寸保持在 5mm 左右，过小不利于样本收集，过大则保护液不能均匀渗透到组织细胞内。

对于多糖多酚丰富的植物样本（特别是木本类植物），需暗处理 24-48 小时后再取样。

2.6 菌体样品

注意：所有菌类样品必须分离好菌体或菌丝送样，切勿连带培养基一起寄送，带培养基

的菌体无法提取。


a) 收集适量菌液至离心管中，通过低速离心(3000-5000g/10min)收集菌体尽可能把培养基/

培养液去除干净；

b) 加入 5mL 无菌水或 PBS 溶液清洗 1~3 次，然后转移到 1.5mL 或 2.0mL 的离心管，1500rpm

4℃离心 10min 去除上清，保留沉淀菌体，立即液氮速冻；


2.7 唾液

2.7.1 用于提取 DNA 的唾液保存方法及运输要求


a) 用于提取 DNA 的唾液样品，推荐使用 DNA Genotek 公司的 Oragene•DISCOVER

(OGR-500) (For Research) 或 Oragene•Dx (OGD-500) (For Diagnostics) collection kit；

b) 操作方法详见产品说明书，严格按照说明书操作保存运输样品。

2.8 Meta

对于 Meta 类样品提取效果，取决于样品中的微生物丰度，丰度低的样品类型，极有可能

无法提取到核酸。


2.8.1.1 人和大型动物粪便样品的采集



a) 准备好便盆和粪便容器，洗手，带上手套收集新鲜的粪便样本；

b) 在实验室将装好受试者粪便样本，立即进行分装并标记；

c) 用无菌牙签或粪便取样器截取样品中段里部（粪便表层含有肠粘膜脱落细胞；

外部容易污染，且接触空气后，部分细菌 DNA 开始降解），取约 50~100mg （约花生米大

小，装入 2.0mL 离心管不超过 1/3 体积）到无菌的 2.0mL 离心管中，每个样本取 3-5 管备份

d) 分装好后，立即液氮速冻或直接放入-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

如粪便样品量较多或不能马上冻存，最迟要在 2 小时之内全部收集完。

2.8.1.2 小型动物（如鼠）颗粒粪便样品采集

动物颗粒粪便样品，动物排便后立即装入 2.0mL离心管中（小鼠粪便 3粒每管），放入-80℃

低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

2.8.1.3 肠道内容物样品采集

a) 用无菌解剖刀，在无菌状态下取出整个肠道，切取所需肠段的内容物（条件允许的话，

可在无菌操作台进行）；

b) 用无菌手术刀挖取内容物，装入无菌 2.0mL 离心管中，每管取约 50~100mg （约花生米

大小，装入 2.0mL 离心管不超过 1/3 体积）到无菌的 2.0mL 离心管中，每个样本取 3-5 管备

份；

c) 分装好后，立即放入 -80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

2.8.1.4 肠道组织样本采集

a) 组织样本用无菌磷酸盐缓冲液轻轻清洗，直到没有内容物流出；

b) 用无菌的显微镜玻片刮取附着在表面的组织细菌，转移到无菌的 2.0mL 离心管中；

c) 立即转入-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

2.8.1.5 土壤 meta 样品采集

a) 根据研究目的确定采样范围，取样器具要事先消毒灭菌处理，开始采样；

b) 去除表面浮土，使用乙醇火烧的铲子挖取地下 5~20cm 的土层；

c) 去除可见杂质后，土壤过 2mm 筛网，建议每个样品从 3 个及以上采样点采集并混合而成，

把土样装入无菌 2.0mL 离心管中，每管取约 50~100mg （约花生米大小，装入 2.0mL 离心管

不超过 1/3 体积）到无菌的 2.0mL 离心管中，每个样本取 3-5 管备份；

d) 分装好后，立即转入-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

2.8.1.6 水体样本采集



请务必富集后送样，直接送水体样品的无法提取。

a) 根据研究目的确定采样深度和范围；

b) 采集好的水样需要通过滤膜进行过滤，可以根据水样的浑浊程度选择相应孔径的滤膜；

c) 将滤膜转移到 2.0mL 离心管中，立即转移至-80℃低温保存，送样时选择干冰运输寄送。

清亮水样：可选择小孔径的滤膜，一般选 0.22μm 或 0.45μm 的滤膜，过滤水样体积大于

10L；

浑浊水样：过滤前静置分离悬浮颗粒，也可以用大孔径的滤膜预过滤一遍，再用小孔径

的滤膜进行过滤。


人粪便样品推荐使用 DNA Genotek 公司的 OMNIgene•GUT (OMR-200) collection kit.操作

方法详见产品说明书，按照说明书操作保存运输样品。

人粪便样品采集，我们推荐使用 DNA Genotek 公司的 OMNIgene•GUT (OMR-200)

collection kit

2.9 FFPE

2.9.1 用于提取 DNA 的保存方法及运输要求

10 张以上未经染色，面积大于 100mm2，厚度为 5~10μm 的切片，其中有核细胞数量 80%

以上，肿瘤细胞组织区域含量 70%以上，常温保存寄送。

2.9.2 用于提取 RNA 的保存方法及运输要求

5 张以上未经染色，面积大于 100mm2，厚度为 5~10μm 的切片，其中有核细胞的数量 80%

以上，肿瘤细胞组织区域含量在 70%以上，常温保存寄送。

2.10 血清/血浆

血清/血浆类液体样本由于基本不含细胞，游离核酸量极不稳定，提取得率低，波动大，

此类样品建议客户提取核酸后送样。

2.10.1 血清样本制备

a) 新鲜血液收集后，室温放置 20-60min，待血液完全凝结后，4℃1600g 低速离心 10min；

b) 将上清小心转移至新的 EP 管中，16000g 离心 10min；

c) 将上清小心转移至新的 EP 管中，建议直接进入提取环节；

d) 若非当即提取，将 c)上清转移至新的无酶螺纹管中，-80℃保存。



2.10.2 血浆样本制备

a) EDTA 抗凝管收集全血后，上下颠倒 8-10 次充分混匀；

b) 4℃1600g 离心 10min，样品分层：上层血浆，中层白细胞，下层红细胞；

c) 将上层血浆小心转移至新的离心管后，4℃16000g 离心 10min；

d) 将上清小心转移至新的 EP 管中，建议直接进入提取环节；

e) 若非当即提取，将 d)上清转移至新的无酶螺纹管中，-80℃保存。

血清/血浆制备量需≥3mL（需要约 6-8mL 全血）

为提高提取质量，血清/血浆建议分离后直接提取

血液发生溶血现象后不可使用

2.11 定制化类产品

2.11.1 ATAC-Seq （染色体开放区域）

样本要求：所送样本为状态良好的细胞系冻存样本、动物新鲜冰冻组织，或活性高植物

原生质体（非冻存样本）；

2.11.1.1 细胞系样本冻存

收集活性高，生长状态良好的贴壁细胞，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹

打使细胞均匀并计数，调节冻存液中细胞的最终密度为 1×106/mL～1×107/mL，送样体积 1mL

及以上，细胞转移至冻存管后置于程序降温盒内，程序降温盒随后置于-80℃的冰箱内，盒内

温度会成线性下降，最大程度保持细胞活性。

关于冻存培养液和冻存盒，我们推荐如下：

序号种类推荐产品

1 冻存培养液

推荐产品一：

CTS™ Synth-a-Freeze™ Medium, 货号： A1371301；

品牌：Thermo Fisher

推荐产品二：

10%DMSO+90%FBS；

2 冻存盒推荐产品一：

Corning CoolCell 程序降温盒；是一种不需要乙醇的细



胞程序降温盒。

推荐产品二：

依赖异丙醇(IPA)类的程序降温盒；用之前在盒夹层内

装入 100%异丙醇；

2.11.1.2 动物组织样本制备

以肝脏、肌肉为例，取新鲜组织浸在1╳PBS（pH7.4）或HBSS缓冲液中，移至超净台，

清洗一下组织表面，去除表面的血迹；将组织置于60mm培养皿中（或1.5mL离心管中），加

入适量1╳PBS（pH7.4）或HBSS缓冲液，用无菌手术剪去除掉脂肪或结缔组织，去除所有液

体后转移组织至离心管，确保组织重量大于100mg，盖紧管盖后放入液氮中速冻，最终置于

液氮或-80℃冰箱冷冻保存。特殊类型的组织（包括但不限于软骨，皮肤，脂肪等）不在此方

法内。

2.11.1.3 植物样本制备及建库（仅限武汉地区）

植物样本含有细胞壁，需客户自行进行原生质体的制备提纯实验。因植物原生质体提纯



后不能长时间保存及有效运输，目前只针对武汉地区原生质体进行实验（植物样本数据存在

大量的叶绿体 DNA 数据，需通过提高测序量解决）。

备注：ATAC-Seq建库一般细胞起始数量范围为：5000-50000个细胞，细胞活性越好、数目越

多，建库成功率越高、数据表现越好。

组织样品送样建议 A0 组织... · 2018-11-26 · 组织样品送样建议...

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