Dalam penelitian ini, phosphatidylethanol dibentuk oleh fosfolipase D katalis transphosphatidylation dari phosphatidyl-kolin dipekerjakan sebagai komponen untuk persiapan pembawa liposomal untuk pengiriman oral insulin. Thermotropicperilaku liposom dari campuran dipalmitoil fosfatidilkolin dan dipalmitoil phosphatidylethanol, danresistensi mereka untuk fosfolipase A2 pankreas dikatalisis hidrolisis dipelajari. Tiga jenis liposom denganinsulin siap untuk memeriksa ketersediaan farmakologis liposom dengan phosphatidylethanol: (i)dipalmitoil fosfatidilkolin: dipalmitoil phosphatidylethanol (1: 1 w: w) liposom; (Ii) dipalmitoil phosphatidyl-kolin: dipalmitoil phosphatidylethanol: palmitoil-stearoil sukrosa (1: 1: 0,2) liposom; dan (iii) liposom terdirifosfatidilkolin alam dan phosphatidylinositol (1: 1). Liposom yang dihasilkan yang secara lisan diadministrasikan ketikus dengan konsentrasi glukosa darah 270 mg: 100 ml dalam dosis 12 IU: kg berat badan. Sampel darah yangdikumpulkan 0,5, 1,5, 3, 5, dan 24 jam setelah pengobatan. Pemberian oral dari semua spesies liposomal menghasilkanhiperinsulinemia. Hiperinsulinemia disebabkan oleh liposom yang mengandung dipalmitoil phosphatidylethanol dihadiridengan penurunan konsentrasi glukosa darah. Tidak ada korelasi antara tingkat insulin dan konsentrasi glukosa dalamtikus darah setelah pemberian oral phosphatidylinositol mengandung liposom diamati. 2001 ElsevierIlmu B.V. All rights reserved

1. PerkenalanPeningkatan kasus diabetes merangsangmencari metode baru terapi insulin.Saat ini, pengobatan diabetes adalah penyembuhanterutama dengan cara perbaikan teknisinjeksi insulin. Namun, prosedur-klasikdure injeksi insulin dalam konflik dengan alamsistem untuk pemeliharaan homeosta- glukosasys seperti pada subkutan suntikan hormontidak tiba segera di hati. Apalebih, prosedur ini menyebabkan stres psikologis* Penulis yang sesuai. Tel .: 375-17-2637131?; fax:?375-17-2637274.Alamat E-mail: kisel@ns.iboch.ac.by (MA Kisel).0378-5173: 01: $ - melihat hal depan 2001 Elsevier Science BV All rights reserved.PII: S0378-5173 (01) 00579-8M.A. Kisel et al. : International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 106memprovokasi emisi contrainsulin hormonalMones, yang memperburuk saja patologismetabolisme.Cara fisiologis sebagian administratif insulintrasi adalah modus lisan karena pada adsorpsi diinsulin usus jelas mendarat di Portalsistem. Namun, modus oral admin- insulinistration adalah sulit untuk menyadari dari kenyataan bahwamolekul protein hormon yang dirusak olehprotease dari saluran pencernaan. Sebelumnya seripercobaan telah dilakukan untuk melindungiinsulin terhadap aksi proteolitik protease.Kemungkinan pengobatan oral oleh incor- insulinporated ke emulsi minyak (Engel et al, 1968;. Chodan Flynn, 1989; Matsuzawa et al., 1995), poli-kapsul mer (Saffran et al, 1986;.. damge et al,1988; Saffran, 1991) dan deterjen misel con-taining protease inhibitor (Kidron et al., 1989)telah dipelajari.Dalam dua dekade terakhir potensi kegunaanliposom sebagai pembawa obat telah menarik pertimbangan-bunga rable (Gregoriadis, 1980; Woodley, 1985;Gregoriadis, 1988; Rogers dan Anderson, 1998).Ini vesikel fosfolipid mampu encap-sulating obat baik hidrofobik dan hidrofilik,mereka biodegradable dan tidak beracun in vivo.Obat dikemas dalam liposom yang suf fisien dilindungi dari serangan enzimatik dan im-Pengakuan mune. Berbagai upaya untuk menerapkanliposom dengan persiapan insulin lisan memilikidilaporkan (Dapergolas dan Gregoriadis, 1976;Patel dan Ryman, 1976; Arrieta-Molero et al.,1982; Axt et al, 1983.; Spangler, 1990; Choudhariet al., 1994; Muramatsu et al., 1996; Iwanaga etal., 1999). Efek hipoglikemik liposomalinsulin telah ditemukan tergantung pada lipidkomposisi, muatan permukaan dan keadaan fisikbilayer fosfolipid (Dapergolas et al, 1976.;Dapergolas dan Gregoriadis, 1976; Axt et al.,1983; Choudhari et al., 1994). Sebuah penurunan tajamdalam darah konsentrasi glukosa telah diamatisetelah pemberian intragastrik liposomdibentuk dengan tinggi leleh dipalmitoil fosfatphatidylcholine (Dapergolas dan Gregoriadis,1976) atau bermuatan negatif phosphatidylinositol(Dapergolas et al., 1976). The-komunikasi inikasi menyangkut pengembangan liposomal di-Sulin persiapan menggunakan kedua tinggi mencair dandipalmitoil phosphatidyl- bermuatan negatifetanol sebagai komponen lipid. Liposom-en-insulin terjebak disuntikkan ke intragastriktikus dengan aloksan diabetes dan kedua con glukosacentration dan insulin immunoreactive tingkat yangdievaluasi dalam darah binatang dalam jarak 0,5, 1,5, 3, 5 dan24 jam setelah pemberian.

2. Bahan dan metode2.1. BahanInsulin babi kristal (27 U: mg) adalah pur-dikejar dari Belmedpreparaty (Minsk, Belarus);fosfolipase A2 pankreas adalah dari Sigma.Tris, EDTA, dan palmitoil-stearoil sukrosa yangdari Serva (Jerman). Fosfatidilkolin danphosphatidylinositol diisolasi dari kuning telurdan Sacharamyces cere6isia, masing-masing, danpuri fi ed dengan metode diterbitkan (Bergelson, 1980).Dipalmitoil fosfatidilkolin disintesisdengan prosedur Hermetter dan Paltauf (1981).Phosphatidylethanol diperoleh dari fosfatphatidylcholine menggunakan pertukaran headgroupReaksi dikatalisis oleh fosfolipase D (Omodeo-Sale et al., 1989). Setiap fosfolipid hanya memberikansatu tempat pada silika gel lapis tipis kromatogramdengan sistem pelarut kloroform: metanol: water (65: 25: 4 v: v: v) dan kloroform-metanol-7NNH4OH (13: 5: 1 v: v: v). Puri fi kasi fosfolipiddilarutkan dalam kloroform dan disimpan di?18 C sampai digunakan. Semua bahan kimia lainnya adalah dari analyt-kelas ical dan tersedia secara komersial.2.2. Persiapan liposomLiposom disiapkan dengan mencampur fosfatphatidylcholine dan phosphatidylinositol ('cairan',1: 1 w: w) atau dipalmitoil fosfatidilkolin dandipalmitoil phosphatidylethanol ('padat', 1: 1 w: w)atau yang terakhir dilengkapi dengan palmitoyl-sukrosa stearoil (1: 1: 0,2 w: w: w) dalam kloroform.Kemudian, pelarut diuapkan di bawah sungaiargon sehingga fi lm tipis lipid akandibentuk pada sisi bagian dalam fl bertanya. Insulin (2,0mg: ml) dilarutkan dalam 10 mM Tris-HCl penyangga (pHM.A. Kisel et al. International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 1078.0) yang mengandung 1 mM EDTA ditambahkan kelipid kering, maka campuran tersebut tersebar denganpengocok bawah suasana argon pada 50 C (di25 C untuk 'cairan' liposom), menghasilkan multilamelarliposom. (Sebanyak 4 mg insulin digunakan untukmasing-masing 50 mg lipid.) Setelah pembengkakan 15-minperiode, ini liposom multilamelar yang soni-berdedikasi 3 kali selama 1 menit dengan interval 2-min di bawahaliran argon pada 50 C (pada 4 C untuk 'cairan'liposom) menggunakan titanium microtip dalam UZDNsonikator (22 kHz, 20 mA). Tidak ada partikel titaniumdiamati setelah sentrifugasi pada 3000 rpmselama 10 menit. Non-insulin terperangkap adalah yang dipisahkandinilai dari liposom-dikemas obat dengan gelinfiltrasi pada Sephadex G-150. Liposom yangdielusi segera setelah volume kosong. Untukstudi tentang efek kekuatan ion, liposomdisiapkan juga di hadapan NaCl. Untukpercobaan kontrol, liposom tidak mengandung di-Sulin disiapkan dengan tidak adanya hormondan persiapan ini dicampur dengan insulin hanyasebelum menggunakan.2.3. Differential scanning microcalorimetrySampel untuk pemindaian termogramdisusun oleh pengenceran liposom terdiridari dipalmitoil fosfatidilkolin dan dipalmi-toyl phosphatidylethanol ke konsentrasi lemak totaltrasi 0,2 mg: ml. Percobaan dilakukandengan sensitivitas tinggi scan- adiabatik diferensialning microcalorimeter DASM-1M (Privalov danPotekhin, 1986) pada tingkat pemanasan 1 C: min.2.4. Phospholipase A2 katalis hidrolisisliposom insulin yang mengandungHidrolisis dilakukan dalam 0,05 M Tris-HCl(PH 8,0) pada konsentrasi lipid dari 15 mM dalamvolume 1,0 ml. CaCl2 ditambahkan ke fi nalkonsentrasi 2,0 mM. Setelah preincubation di37 C reaksi dimulai dengan penambahanfosfolipase (26 mg). Reaksi itu terminasiditunjuk oleh penambahan EDTA ke fi nal konsentrasition dari 15 mM dan volume ganda darikloroform: metanol (2: 1 v: v). Setelah ekstraksisampel disentrifugasi, lapisan bawah adalahmenguap, dan produk-produk reaksi yangdianalisis dengan kromatografi lapis tipis di piringdengan silika gel (Merck) dalam sistem chlo- pelarutroform: metanol: 28% amonia (13: 5: 1 v: v: v).Setelah fosfolipid telah divisualisasikan denganreagen dari Vaskovsky et al. (1975), tempatsesuai dengan substrat fosfolipid dan yanglyso-turunan yang dipotong dan dianalisis untuk fosfatphorus konten (Vaskovsky et al., 1975). De- Thegree hidrolisis dinyatakan dalam persen sebagairasio lyso-produk dibentuk untuk totaljumlah fosfolipid.2.5. Hewan dan model diabetes eksperimentalPria tikus Wistar (berat badan, 180-250 g)yang digunakan dalam percobaan ini. Diabetes adalahdiinduksi oleh injeksi intraperitoneal tunggalaloksan (150 mg: kg). Tikus-tikus yang digunakan dalam 2minggu setelah injeksi aloksan penyakit ketika akutfase selesai.2.6. Eksperimen terapiTikus dipuasakan selama 24 jam sebelumeksperimen. Insulin liposom-terjebak itudiadministrasikan intragastrik menggunakan beronggamenyelidiki. Dosis insulin ditetapkan sebesar 12 U: kgberat badan. Untuk percobaan kontrol, baiklarutan penyangga atau campuran liposom kosongdengan insulin gratis itu sama diadministrasikan.Sampel darah dikumpulkan dari ekor sebelumdan pada 0,5, 1,5, 3, 5 dan 24 jam setelah pemberian dosis.Heparin digunakan untuk penindasan coagu- darahlation. Serum dipisahkan dengan sentrifugasi pada3000 rpm selama 10 menit dan terus beku sampaianalisis.2.7. Metode analisisKonsentrasi insulin dan fosfolipiddalam liposom ditentukan oleh metodeLowry et al. (1951) dan Vaskovsky et al.(1975), masing-masing. Radioimmunoassays dari di-Sulin dilakukan menggunakan RIA kit komersial ac-cording dengan protokol yang disediakan. Glukosa plasmakonsentrasi yang diukur dengan glukosa ox-idase method.M.A. Kisel et al. : International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 1083. Hasil3.1. Pembuatan dan karakterisasiinsulin liposom-terperangkapInsulin liposom-terjebak disiapkan olehsonikasi lembut dispersi fosfolipid disolusi insulin berair. Setelah sonikasi, yangliposom yang difraksinasi dengan gel- infiltrasi padaKolom Sepharose 4B, pemisahan menjadi dipan-tored oleh protein dan fosfor lipid analisisis. Menurut data dari mikroskop elektron yangfraksi insulin yang mengandung liposom adalah hetero-vesikel geneous dan berisi 50 sampai 250 nmdalam ukuran.Gambar. 1 menunjukkan jebakan insulin oleh lipoproteinsomes terdiri dari fosfatidilkolin yang berbeda:campuran phosphatidylethanol. Seperti yang bisa dilihat diGambar. 1, dengan munculnya proporsi negatifdibebankan phosphatidylethanol dalam campuran tersebutjumlah insulin liposom-terperangkap adalah in-berkerut. Gambar yang sama untuk liposom melibatkanphosphatidylinositol ragi di tempat fosfatphatidylethanol diamati.Ketika digunakan semisintetik fosfolipid mixer yangmembangun struktur, tingkat enkapsulasi adalah sedikit di bawah.Gambar. 2 menggambarkan elusi pro fi les liposomterdiri dari dipalmitoil fosfatidilkolin,dipalmitoil phosphatidylethanol dan insulin. Sebagaidapat dilihat dari Gambar. 2, lebih dari 70% dari insulin adalahdielusi bersama dengan liposom. Rechromatogra-

Gambar. 2. kromatografi pemisahan liposom-terperangkapinsulin (0,75 ml) pada Sepharose 4B kolom (18? 350 mm2).Insulin liposom-terjebak dibuat dari 25 mgdipalmitoil fosfatidilkolin, 25 mg dipalmitoil fosfatphatidylethanol dan 4 mg insulin dalam 2 ml 10 mMTris-HCl buffer (pH 8,0): (1) pro fi le dari fosfolipidelusi; (2) pro fi le elusi insulin. Pro fi les diperolehdari densitas optik dari kolorimetrik dari fosfatpholipid dan protein (Bagian 2).phy insulin liposom-terperangkap tidak menyebabkanperubahan ditandai dalam hormon: fosfolipidrasio. Liposom yang mengandung fosfat dipalmitoilphatidylcholine saja terperangkap tidak lebih dari10% dari insulin (data tidak ditampilkan). Dalam liposomFraksi dielusi dari kolom maksimal di-konten Sulin diimbangi dengan benar tentang lipidfosfor maksimum (Gbr. 2). Pergeseran akanmuncul sebagai penggabungan insulin menjadi lebih kecil diukuran liposom. Di sisi lain, hal itu akan datangdari desorpsi insulin terikat liposompermukaan melalui interaksi elektrostatik saatliposom bergerak sepanjang kolom. Jika begitu,tingkat jebakan harus bergantung pada ionkekuatan solusi.Gambar. 3 menunjukkan efek NaCl dalam buffer larutantion pada konsentrasi insulin liposom-terperangkaption. Pada penambahan NaCl untuk liposom disiapkandi 0,01 solusi M Tris-buffered (pH 8,0), yangproporsi insulin dikemas cenderung de-lipatan dengan peningkatan konsentrasi garam. Kapanliposom dibentuk dalam larutan penyangga yang mengandunging NaCl, efek hampir sama pada tingkatinsulin liposom-terperangkap diamati. IniHasil penelitian menunjukkan bahwa elektrostatik mekanisme conUpeti secara signifikan dalam pengikatan insulin denganliposom.Gambar. 1. penjebakan insulin oleh liposom terdiri dari fosfatphatidylcholine dan phosphatidylethanol: pengaruh fosfatproporsi phatidylethanol (w: w). Dua puluh lima miligramfosfolipid yang tersebar dalam larutan insulin (2 mg: ml) dandisonikasi seperti yang dijelaskan dalam Bagian 2. Non-terjebak insulin adalahdipisahkan oleh gel- infiltrasi pada Sepharose 4B column.MA Kisel et al. : International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 1093.2. Beha6iour thermotropic liposomterdiri dari campuran dipalmitoilfosfatidilkolin dan dipalmitoilphosphatidylethanolDapergolas dan Gregoriadis (1976) telah menunjukkanbahwa efek hipoglikemik insulin terperangkap dalamdipalmitoil fosfatidilkolin: kolesterol lipoproteinsomes lebih unggul insulin liposomal berdasarkankuning telur fosfatidilkolin. Hal ini juga diketahui(Chapman, 1975) bahwa struktur bilayerdipalmitoil semisintetik fosfatidilkolin mantanHibit fase transisi utama (gel cair crys-talline) pada 41,7 C, sedangkan vesikel bilayerfosfolipid alami ada di-kristal cairnegara dan tidak mengalami apapun transisi endotermiktion di atas 0 C. Pada 37 C liposom ini diberbeda negara fase. Hal ini tidak mungkin bahwa gelkeadaan dipalmitoil fosfatidilkolin lipoproteinsomes dapat menjelaskan efek hipoglikemik.Perilaku thermotropic persiapan kamiterdiri dari campuran dipalmitoil phosphatidyl-kolin dan dipalmitoil phosphatidylethanol (1: 1w: w) telah dipelajari dengan menggunakan dari diferensialMetode microcalorimetry pemindaian. Pemanasanscan campuran lipid ditunjukkan pada Gambar. 4.transisi endotermik utama liposom kosongterjadi pada 41 C. Hanya puncak tunggal yang sama ataulebar sedikit lebih besar sebagai dipalmitoil phosphatidyl-Gambar. 4. Diferensial pemindaian kalorimetri pemanasan scanliposom terdiri dari: (a) fosfatidilkolin dipalmitoil;(B) dipalmitoil fosfatidilkolin dan dipalmitoil fosfatphatidylethanol (1: 1 w: w): (c) dipalmitoil phosphatidyl-kolin, dipalmitoil phosphatidylethanol dan insulin (25: 25: 4w: w: w). Liposom disusun 10 mM Tris-HCl penyanggalarutan yang mengandung 1 mM EDTA (pH 8,0). Fosfolipidkonsentrasi 0,2 mg: ml. Tingkat pemanasan adalah 1 C: min.kolin saja diamati. Ini mungkin menunjukkan bahwadua lipid baik larut. Ketika insulin adalahdikemas kurva pemanasan sampelmenunjukkan transisi endotermik utama denganbahu di sisi suhu tinggi. En- Thethalpy berkurang agak dan transponder utamasition menurunkan suhu 41-40 C.Hasil ini mari kita menunjukkan bahwa sebagianinsulin berinteraksi dengan lipid bilayer melalui keduahidrofobik dan elektrostatik mekanisme. Sepertiberlangsung, bilayer lipid persiapan liposomaldalam keadaan gel pada suhu di bawah 40 C.3.3. Phospholipase A2 katalis hidrolisisfosfolipid di liposom yang mengandung insulinFosfolipid liposomal dicerna oleh fosfatpholipase A2 saat mereka memasuki saluran pencernaan.Phospholipase A2 mengkatalisis hidrolisissn-2 lemak asil obligasi fosfolipid untuk membebaskanasam lemak bebas dan lysophospholipids (Dennis,1994). Tingkat hidrolisis tergantung pada phospho-Komposisi lipid (Akhrem et al., 1989) dan mungkindimodulasi oleh protein larut (Naubatova etal., 1992). Untuk membuat perkiraan tingkat enzy-gangguan matic liposom, kita mempelajarihidrolisis fosfolipid di kedua kristal cairGambar. 3. Pengaruh NaCl pada konsentrasi en- insulinterjebak dalam liposom terdiri dari fosfatidilkolin danphosphatidylethanol (1: 1 w: w). Liposom disusun 10mM Tris-HCl larutan buffer dan kemudian NaCl ditambahkan (cahayabar); liposom disusun 10 mM Tris-HCl penyanggasolusi (pH 8,0) yang mengandung berbagai konsentrasi NaCl(Gelap bar). Data merupakan rata-rata rangkap tiga pengalaman-ments.M.A. Kisel et al. : International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 110dan liposom gel insulin yang mengandung oleh pancre-ATIC fosfolipase A2. Hasilnya, disajikan dalamGambar. 5, menunjukkan bahwa tingkat hidrolisis'Cairan' phosphatidylethanol (diperoleh dari telurkuning fosfatidilkolin) dan 'padat' dipalmitoilphosphatidylethanol hampir sama. Menujuphosphatidylcholines fosfolipase yang menampilkanperilaku yang berbeda. Dipalmitoil phosphatidyl-kolin terdegradasi oleh fosfolipase pankreaske tingkat substansial, berbeda dengan fosfat telurphatidylcholine. Sebuah hidrolisis lebih tinggi dari dipalmi-toyl fosfatidilkolin dapat berasalpenyimpangan struktural dalam kemasan 'padat'substrat (Wilschut et al., 1978). Irregulari- sepertiikatan yang hadir dalam bilayers sangat melengkung dan dibilayers mengandung cacat struktural. Yang terakhirdapat disebabkan oleh salah satu kondisi drastispersiapan 'padat' liposom (sonikasi di50 C) atau interaksi aneh insulin dengan 'padat'permukaan liposom.3.4. Efek terapi dari liposom-terperangkapinsulinEfektivitas insulin liposom-terperangkapdipelajari pada tikus, yang dibuat oleh diabetessatu suntikan aloksan. Dalam waktu 2 minggu setelahGambar. 6. Pengaruh prosedur darah-membiarkan pada plasmakadar glukosa (lingkaran) dan konsentrasi insulin plasma (trisudut) di diabetes (simbol tertutup) atau sehat (simbol terbuka)tikus. Kadar glukosa dan konsentrasi insulin sebelum darah-suratting diambil sebagai 100%. Setiap nilai merupakan rata-rata untuktujuh hewan.administrasi aloksan tikus dengan glukosa darahtingkat 250 mg: 100 ml darah dan lebih yangyang dipilih. Kami tidak menggunakan tikus pada penyakit akutfase karena di bawah homeostasis disrup- komplekstion tindakan insulin mungkin terdistorsi olehindependen proses patologis diabetes.Seperti pada uji coba sampel darah diambil darivena ekor 5 kali pada interval pendek, streskeadaan tikus mungkin mengakibatkan perubahan biokimiaIndeks darah. Karena dalam kita tahap awalmencoba untuk menjelaskan efek-prosedur darah-membiarkandure pada kadar glukosa plasma dan plasmayang insulin pada tikus diabetes dan sehat. Sebagaidapat dilihat pada Gambar. 6, stres dalam menanggapi darah-membiarkan prosedur dan kehilangan darah mengakibatkan keduaPenurunan sederhana konsentrasi glukosa (sekitar10%) dan insigni peningkatan fi kan insulin (15-20%) dalam plasma. Seperti terjadi, tanggapantikus diabetes dan sehat sejalan.Pemberian oral insulin terperangkap dalamliposom komposisi dipalmitoil fosfatphatidylcholine dan dipalmitoil fosfatphatidylethanol (1: 1) ke tikus diabetes menghasilkannaik immunoreactive insulin plasma yangmencapai puncaknya pada 1,5 jam. Sebuah konsentrasi insulin tinggition dipertahankan dalam waktu 3,5 jam. Penurunan darahkadar glukosa dari 270 mg: 100 ml hingga 140 mg: 100ml diikuti kenaikan immunoreactive plasmainsulin diamati (Gbr. 7). Oraluntuk tikus diabetes dari dosis yang sama insulin gratisdengan liposom kosong diproduksi perubahan baik dalamGambar. 5. Hidrolisis 'padat' liposom terdiri dari dipalmi-toyl fosfatidilkolin, dipalmitoil phosphatidylethanol daninsulin (simbol tertutup) dan 'cairan' liposom terdiri dari telurfosfatidilkolin, telur phosphatidylethanol dan insulin(Simbol terbuka) oleh pankreas fosfolipase A2: segitiga -hidrolisis fosfolipid kolin; kotak - hidrolisisfosfolipid etanol. Fosfatidilkolin:phospatidylethanol: rasio insulin adalah 25: 25: 4 w: w: w. Persentasehidrolisis dan kondisi eksperimental yang dijelaskan dalamBagian 2.M.A. Kisel et al. : International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 111Gambar. 7. Pengaruh lisan diadministrasikan insulin yang mengandungliposom terdiri dari dipalmitoil fosfatidilkolin dandipalmitoil phosphatidylethanol (1: 1 w: w) pada glu- plasmatingkat cose (lingkaran terbuka) dan konsentrasi insulin plasma(Lingkaran tertutup) pada tikus diabetes. Kadar glukosa (270 mg: 100 ml)dan konsentrasi insulin sebelum pemberian diambil sebagai100%. Garis putus-putus berarti kadar glukosa pada tikus sehat (115mg: 100 ml). Setiap nilai merupakan rata-rata selama tujuh hewan.Gambar. 9. Pengaruh lisan diadministrasikan insulin yang mengandungliposom terdiri dari fosfatidilkolin dan fosfatphatidylinositol (1: 1 w: w) pada kadar glukosa plasma (terbukalingkaran) dan konsentrasi insulin plasma (lingkaran tertutup) ditikus diabetes (n? 6). Garis adalah sama dengan Gambar. 7.glukosa plasma terdeteksi. Sebaliknya,persiapan liposomal ini, ketika diberikan secara oral dalamtikus peningkatan kadar glukosa darah lebih dari100% dalam 1,5 jam. Konsentrasi glukosa sedikitdikurangi dengan 3 jam setelah administrasi insulin liposomaltion (ketika tingkat insulin darah memiliki maksimum)dan setelah itu naik kembali. Dalam waktu 24 jam glu- darahtingkat cose adalah jauh di atas nilai awal.4. DiskusiHasil yang diperoleh menunjukkan bahwa setelah en-capsulation di liposom dari de fi nite jenis, insulinmenjadi agen terapi aktif saat administratiftrated secara lisan. Dengan ini tidak berarti bahwa insulinfi nds jalan ke reseptor dan berinteraksi dengan merekaunik dalam bentuk liposomal. Manifestasiefek hipoglikemik dalam darah tikus ketika lisandosis besar diadministrasikan insulin (12 IU: kgberat) adalah bukti bahwa di bawah keraskondisi saluran pencernaan dan darah-situasiculation liposom insulin yang mengandung melaluiserangkaian transformasi dan bagian dari hormonadalah tidak aktif. Sebuah fraksi insulin non-aktifmungkin berisi molekul protein transformatedatau fragmen mereka terdeteksi oleh radioimmunoassay.Hormon aktif tampaknya akan dikirimkan ke reseptortor oleh spesifik kolam liposom atau dalam bentukkompleks lipid-protein. Hal ini tidak praktis untukmenilai kolam renang tersebut secara kuantitatif dan untuk mengukurkadar glukosa darah maupun dalam di- immunoreactivetingkat Sulin. Penggabungan lipid sintetis,palmitoil-stearoil sukrosa, dalam liposom com-berpose dari dipalmitoil fosfatidilkolin dandipalmitoil phosphatidylethanol mengurangi hidrokarbon yangEfek poglycaemic insulin liposom-terperangkap(Gbr. 8).Hiperinsulinemia juga diamati ketika di-Sulin terperangkap dalam liposom terdiri dari campuranfosfatidilkolin dan fosfatidilinositolitu diadministrasikan (Gbr. 9). Tapi dalam kasus ini tidak ada jatuhGambar. 8. Pengaruh secara lisan diadministrasikan insulin yang mengandungliposom terdiri dari dipalmitoil fosfatidilkolin,dipalmitoil phosphatidylethanol dan palmitoil-stearoil sucrose (1: 1: 0,2 w: w: w) pada kadar glukosa plasma (terbukalingkaran) dan konsentrasi insulin plasma (lingkaran tertutup) ditikus diabetes (n? 7). Garis adalah sama dengan Gambar. 7.M.A. Kisel et al. : International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 112proporsi insulin di dalamnya. Faktor mengendalikanproses untuk penetrasi sebagian lisanliposom diadministrasikan ke dalam aliran darah darisaluran pencernaan masih belum sepenuhnya dipahami.Dari data kami berikut bahwa liposom yang mengandunging phosphatidylethanol menunjukkan ef- hipoglikemifect oleh oral karena mereka sensitif terhadapkonsentrasi garam dan fosfolipase pankreasTindakan A2.Komposisi lipid dan keadaan fisik lipoproteinsomes adalah penentu penting dari terapiefek. Insulin yang mengandung liposom terdiri daridipalmitoil fosfatidilkolin dan dipalmitoilphosphatidylethanol secara signifikan menurunkankadar glukosa plasma pada tikus oleh administrasi lisantion. Menurut data microcalorimetric,liposom ini 'padat' pada 37 C (tubuh temperamendatang). Keunikan lain dari jenis lipoproteinsomes adalah bahwa mereka menanggung muatan permukaan negatifkarena phosphatidylethanol asam.Phosphatidylethanol ditemukan di jaringan darietanol-diperlakukan tikus (Alling et al., 1984). IniMerintis memungkinkan kita fi t phosphatidylethanol ke fam- sebuahily fosfolipid endogen. Dengan demikian, fosfatphatidylethanol akan diharapkan menjadikimia beracun karena melibatkan dalam umumjalur metabolisme. Memang, di- subkutanjection dari phosphatidylethanol: phosphatidyl-liposom kolin untuk tikus tidak menghasilkan apapunkerusakan terlihat pada hewan. Menggunakan ELISA-piringuji kami memperoleh bukti eksperimental bahwa fosfatphatidylethanol liposom-terperangkap in insulindiproyeksikan intraperitoneal pada tikus tidak menginduksiproduksi antibodi terhadap insulin sebagai lawangratis atau glutharic aldehide silang insulin inmenolaknya di adjuvant Freund. Hal ini menunjukkan bahwabilayer lipid berdasarkan bermuatan negatifphosphatidylethanol mencegah imuntanggapan terhadap insulin. Imunologi awalStudi insulin liposom-terperangkap sangatmenggembirakan dalam konteks penggunaan fosfatphatidylethanol untuk administrasi proteindalam organisme hidup. Selain itu, keuntungandari phosphatidylethanol lebih lainnya negatiffosfolipid bermuatan adalah persiapan yang lebih mudahdan kapasitas tinggi untuk insulin.Liposom terdiri dari fosfatidilkolindan bermuatan negatif phosphatidylinositol jugamemiliki sifat-sifat penjebakan jumlah tinggiinsulin dan memberikan dalam aliran darah dari gas-saluran trointestinal. Berbeda dengan liposom berdasarkanpada phosphatidylethanol, pemberian oralliposom phosphatidylinositol untuk tikus diabetesmenyebabkan konsentrasi glukosa darah untuk di-lipatan. Efek ini dapat dijelaskan demikian. Pertama,'Cairan' liposom berdasarkan phosphatidylinositoldapat dirusak oleh enzim lipolitik ketingkat yang lebih besar daripada liposom dengan fosfatphatidylethanol. Dalam kondisi insulin inimenjadi diakses protease tindakan denganhasil bahwa ia akan kehilangan aktivitas, tetapi dengan demikian akanterus kemampuan untuk berinteraksi dengan reseptor.Penulis lain melaporkan bahwa pencernaan tryptic dariinsulin dipercepat oleh bermuatan negatif lipoproteinsomes mengandung phosphatidylinositol (Kato etal., 1993). Jika insulin seperti memasuki aliran darah,itu akan kompetitif di reseptor mengikat denganmolekul hormon yang diproduksi oleh pancre- unkilledsel islet ATIC. Kedua, residu inositol di fosfatliposom phatidylinositol dapat menggangguinsulin mengikat reseptor dan antar berikutnyanalisation hormon oleh endo receptor-mediatedcytosis. Hal ini diketahui bahwa hubungan liposomdengan suspensi sel islet penurunan tekanan yangence dari glikolipid (Welsh et al., 1988) yang sepertiphosphatidylinositol mengandung gugus hidroksildi bagian kutub molekul. Akhirnya, fosfatphatidylinositol mungkin berbeda dari fosfatphatidylethanol mengaktifkan insulin kinase reseptorfungsi, yang sangat penting untuk tindakan selulerinsulin (Kahn dan Putih, 1988).Data kami di hidrolisis insulin yang mengandungliposom oleh fosfolipase A2 pankreas acarabahwa fosfolipid dari 'padat' liposom yang prefer-substrat sajalah untuk enzim ini. Hal ini tidak improba-ble bahwa efek hipoglikemik dari liposome-insulin terperangkap diatur oleh tingkatkemajuan fosfolipase A2-dependentlisis liposom. Ini akan SUF kantor untuk menganggap bahwarealisasi aksi hormon dimungkinkanketika insulin dibebaskan dari fosfolipid, yangmengganggu interaksi hormon dengan reseptortor. Peningkatan ditandai konsentrasi glukosalebih dari 24 jam setelah pemberian oral inM.A. insulin Kisel et al. : International Journal of Pharmaceutics 216 (2001) 105-114 113liposom phosphatidylinositol serta mantancess tingkat mulai dari hiperglikemia dalam waktu 24jam setelah liposom berbasis phosphatidylethanolpengobatan mungkin menjadi konsekuensi dari salingreseptor dengan sangat tahan lipid-insulinkompleks.Ketika palmitoil-stearoil sukrosa di com- lipidPosisi 'padat' liposom yang tergabung, yangefek hipoglikemik dari liposom-terperangkap inSulin menurun. Oleh karena itu hasil dari mantan iniperiments saksi peran penting darisifat permukaan liposom di efek terapiinsulin liposom-terperangkap. Sifat sepertisebagian besar diberikan oleh phosphatidylethanol sebagai lipidkomponen insulin liposome-terperangkap....