Gnmanipulci ecetmuslicban: P elem technikk A P elem technikk: enhanszerek s szupresszorok azonostsa

Klasszikus mutagenezis ksrletek korltaiEgy adott biolgiai folyamatban rszt vev, vagy azt szablyoz gnek kzl nem mindegyiket lehet azonostani klasszikus mutagenezis ksrletekbennyilvnval fenotpus hinyaanyai hats

Tbb biolgiai folyamatban is szerepet jtsz gnek esetben csak az els eszencilis funkci tanulmnyozhat

Az egyik lehetsges mdszer a klasszikus mutagenezisben nem tallhat gnek azonostsra az enhanszerek s szupreszorok izollsa.

Msik alkalmazott mdszer erre amutcik fenotpusnak analzise szomatikus, vagy mittikus klnokban.

Enhanszerek s szupresszorok azonostsaP promterHsp70 termintor szekvenciaGal4mini-whiteori ampEBeyeless5xUASvizsglt gngnGal4

Gnmanipulci ecetmuslicban: P elem technikk A P elem technikk: helyspecifikus rekombinci

Szomatikus klnok ellltsa Flp rekombinzzalFRTFlp rekombinzlenykromatdkG2MHomozigta mutns klnVad tpus iker klnmmmmmmFlp rekombinz helyspecifikus rekombincit indukl FRT szekvencik kztt

lesztkben a 2 plazmid replikcijban vesz rszt

Kivlan mkdik Drosophilban

FRT helyeket hordoz transzgnikus legyekben mittikus klnokat lehet ltrehozni Flp-fgg rekombincival

Centromer kzeli FRT helyeket hordoz transzgnikus trzseket lltottak el minden kromoszmra

Elnyei:F1 szrsltfontossg gnek szvetspecifikus fenotpusa tanulmnyozhat

mP(ovoD)balanszerbalanszerXP(ovoD)mFRTFlp rekombinzmmFRTP(ovoD)Homozigta mutns ivarsejt klniker kln elpusztulmmP(ovoD)mNem rekombinns elpusztulm/m+FlpDominns nstnysteril technika sszefoglalsa

FRTmFlpmmmmIkerfoltstt pirosHomozigtaklnfehrNem rekombinnspirosFRTmFlpmMMmmmIkerfoltelpusztulHomozigtaklnfehrNem rekombinnspirosMMMSzem-specifikus FLP/FRT technika sszefoglalsaSzem-specifikusFLP expressziSzem-specifikusFLP expresszi

ACDEPldk mittikus klnok analzisre13452Flp expresszi lrvkban1. az imgkorongok nvekedst s diferencildst nnrint mutcik azonostsatumoros nvekedst okoz mutcik azonostsatumorszupresszorok azonostsa2. Integrin adhzis komplex azonostsa

Flp szvetspecifikus expresszija 3-4. Axon nvekedsi mintzat kialakulst szablyoz gnek azonostsa5. Mret szablyozsban szerepet jtsz gnek azonostsa

Gnmanipulci ecetmuslicban: P elem technikk A P elem technikk: irnytott gnszupresszi

RNS interferenciaRNS interferencia (RNAi) egy evolcisan konzervldott vdekezsi mechanizmus

Poszt-transzkripcis szinten hat

Kettsszl RNS szupresszlja a gnexpresszit mRNS-ek szekvencia specifikus degradcijn keresztl

Egy reverz genetikai mdszerr fejldtt a gnfunkci tanulmnyozsra

Gygyszati felhasznlsa risi lehetsgeket rejt magban s most van kibontakozban

Az RNS interferencia mechanizmusa Kettsszl RNS induklja a folyamatot

Egy Rnz III enzim (Dicer) kis, 21-23 nukleotid hossz RNS duplexeket (siRNA) hoz ltre

A kis RNS-ek fehrjkkel endonuklez aktivitssal rendelkez ribonukleoprotein komplexeket alkotnak (RISC).

A RISC komplex a kis RNS-sel komplementer mRNS-hez ktdik

A RISC komplex endonukleza (Slicer) elhastja a mRNS molekult

A mRNS ltal kdolt fehrje nem termeldik

A pWIZ RNS interferencia vektor felptse

Irnytott gnexpresszi a Gal4 modulris rendszerben - 1Gal4mini-whiteori ampEBenhanszer5xUASgnGal4Duplaszl hairpin RNS molekulk

white dsRNS-t expresszl transzgnikus egyedek fenotpusavad tpuswhite transzgn egy kpibanwhite- white transzgn kt kpibanT1T2T3T3T4