DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE CU COCI G ( + )

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE CU COCI G ( + )

Coci G ( + ):

1. Staphylococcus:

- aureus (patogen , responsabil de cele mai multe infectii stafilococice ale omului)

epidermidis (comensal, ocazional produce infectii)

saprophyticus ( poate produce cistite la femei)

2. Streptococcus: unele specii fac parte din flora indigena a orofaringelui, tractului gastrointestinal, pielii, altele sunt specii patogene, care produc boala la om:

pyogenes

faecalis

agalctiae

viridans

pneumoniae ( pneumococul )

Pt studenti - dg de laborator in cazul infectiilor cu coci G + :

streptococcus pyogenes, stafilococcus aureus si pneumococul

Diagnosticul de laborator in infectiile cu STAFILOCOCI

I. Dg. Direct ( bacteriologic ):

1.Recoltare si transport : se tine cont de patologia produsa de stafilococi prin mecanism de invazivitate si toxinogeneza

- secretii purulente ( foliculite, abcese, celulita, cosuri)

- secretii lichidiene ( punctie sinusala, otica, pleurala, peritoneala)

- exsudat nazo-faringian ( angine, sinuzite)

- sange, urina,secretii vaginale, sputa ( pneumonii,cistite, vaginite,bronho-pneumonii)

Se transporta in maxim 2 h .

2.Examen microscopic : se efectueaza un frotiu direct din prod. patologic, se coloreaza AM si GRAM si se examineaza la MO:

- coci violeti, sferici, asezati in gramezi ( ciorchine ) sau izolati, necapsulati (exista totusi si unele tulpini de S. Aureus capsulate),imobili, nesporulati, intra/extracel.

- cel. eucariote

3.Insamantarea + izolarea:

Stafilococii nu sunt pretentiosi, cresc pe medii de cultura obisnuite:

geloza simpla

geloza sange

bulion

In cazul p.p pluribacteriene folosim mediul selectiv CHAPMAN : m. Hiperclorurat

( NaCl 7-10%), inhiba cresterea celorlalte bacterii si stimuleaza cresterea stafilococilor.

4.Identificarea pe baza caracterelor:

a) morfotinctoriale: - coci violeti, sferici, asezati in gramezi ( ciorchine ) sau izolati, necapsulati,imobili, nesporulati

b) de cultura:

pe medii cu sange pot prezenta zone de hemoliza sau nu in jurul coloniilor

colonii de tip S, mari, opace,pigmentate ( auriu S. Aureus; alb S. Epidermidis; galben citrin S. Saprophyticus )

c) biochimice:

fermenteaza zaharuri

catalazo +

oxidazo -

elaboreaza hemolizine ( alfa si beta)

elaboreaza pigmenti ( alb, auriu, galben )

coagulazo +

fibrinolizino +

d) antigenice: nu sunt f. Importante

e) de patogenitate: ne intereseaza sa vedem daca tulpina este patogena sau nu;

teste ce pun in evidenta f. de invazivitate ai stafilococului ( t. coagulazei, fibrinolizinei, se repeta testele de la pctul c. )

cand stafilococul este lizogenizat elaboreaza exotoxine responsabile de:

T.I.A de tip toxic, sdr. de piele oparita.

5. Antibiograma:obligatorie

Stafilococul este rezistent la penicilina( sintetizeaza beta lactamaza care inhiba penicilina), de aceea se administreaza peniciline de sinteza rezistente la beta lactamaza

AMOXICILINA

AMPICILINA

AUGMENTIN

II. Dg indirect( serologic ): nu se face

Stafilococii stau prea putin in organism sau produc infectii inchistate si de aceea cantitatea de Ac sintetizata este nesemnificativa.

Diagnosticul de laborator in infectiile cu STREPTOCOCI

I. Dg. Direct ( bacteriologic ):

1.Recoltare si transport : asemeni stafilococilor pot produce o patologie variata: infectii cutanate ( erizipel, abcese, colectii purulente ), meningite, pneumonii, infectii ORL, endocardita, scarlatina,etc., iar produsul patologic recoltat difera in functie de boala.

- ne referim strict la Streptococcus pyogenes = streptococul beta hemolitic de gr. A, responsabil de angina streptococica.

- recoltam secretia purulenta de la nivelul faringelui ( exsudat ),dimineata la prima ora si inainte ca pacientul sa fi primit antibioterapie.

Se transporta in maxim 2 3 h . Daca se depaseste timpul se poate folosi mediul de transport STUART (tineti minte soricelul din film!!!! ()

2.Examen microscopic : se efectueaza un frotiu direct din prod. patologic, se coloreaza AM si GRAM si se examineaza la MO:

- coci violeti, ovalari, asezati in lanturi de marimi diferite, necapsulati ( uneori pot prezenta o capsula, ce exprima o mare virulenta ),imobili, nesporulati, intra/extracel.

- cel eucariote

3.Insamantarea + izolarea:

Spre deosebire de stafilococi, streptococii sunt f. pretentiosi.

- in cazul p.p. monobacteriene se folosesc:

a) mediile agarizate + supliment 5% sg. berbec ( m. solid ) (pt cultura generala : de ce sg de berbec si nu de epur??? : hematiile de berbec contin o enzima, care inhiba cresterea speciilor hemolitice de Haemophilus, ale carui colonii pot fi confundate cu cele ale streptococilor).

b) bulioane nutritive + supliment de glucoza ( m. lichid )

- in cazul p.p pluribacteriene folosim : m. geloza-sg + azida de sodiu + cristal violet, inhiba cresterea stafilor,strep.viridans, bacili G - si stimuleaza cresterea S. Pyogenes

4.Identificarea pe baza caracterelor:

a) morfotinctoriale: - coci violeti, ovalari, asezati in lanturi de marimi diferite, necapsulati, imobili, nesporulati.

b) de cultura:

pe m. geloza - sange pot prezenta zone de hemoliza sau nu in jurul coloniilor

colonii de tip S, punctiforme, transparente sau opace pt S pyogenes

coloniile sunt usor mai mari pt celelalte specii de streptococi

pot prezenta colonii de tip M, mucoide, filante ( cei cu capsula)

in medii lichide cresc sub forma de flocoane, care se depun pe pereti sub forma de fulgi i lasa un sediment pe fundul eprubetei.

c) biochimice:

fermenteaza cateva zaharuri

catalazo -

oxidazo -

elaboreaza hemolizine ( alfa, beta gama): hemoliza partiala, totala, fara hemoliza

testul la BACITRACINA: este un test screening de identificare a S. beta hemolitic gr. A. Se insamanteaza cu colonia ce urmeaza a fi identificata o placa Petri. Asezam un disc cu bacitracina pe placa, lasam la temostat, iar a doua zi se face citirea. Daca in jurul discului se formeaza o zona de inhibitie > 10 mm sigur avem o colonie de S. beta hemolitic gr. A.

d) antigenice: cu ajutorul unor R. de pp in tuburi, de aglutinare pe lama se pot determina : Ag de grup Lancefield ( carbohidratul C ), Ag M ( se gaseste la suprafata peretelui bacterian, pe baza lui streptococii sunt impartiti in 65 de tipuri- deci pot exista 65 de tipuri de Ac anti M), Ag O.

e) de patogenitate: ne intereseaza sa vedem daca tulpina este patogena sau nu;

teste ce pun in evidenta f. de invazivitate ai stafilococului ( se repeta testele de la pctul c. )

cand streptococul este lizogenizat elaboreaza o eritrotoxina responsabila de aparitia scarlatinei

5. Antibiograma: nu este obligatorie in cazul S. pyogenes, acesta este 90% sensibil la PENICILINA

- se face doar in cazul recidivelor, care indica instalarea unei rezistente.

II. Dg indirect( serologic ):

1. R. ASLO: pt identificarea titrului Ac antistreptolizina O ( cititi LP-ul cu reactii antigen- anticorp)

V.N = 200 U.I

- daca dupa 3 saptamani nu scade val ASLO se repeta tratamentul =>

a) daca tot nu a scazut valoarea ASLO => s-a instalat o r. de hipersensibilitate

b) daca a scazut => vindecare

2. R. de determinare a Ac anti M: nu se det uzual pt ca ei indica doar o protectie de 3-6 luni a pacientului in fata unei infectii cu streptococ de acelasi tip

Diagnosticul de laborator in infectiile cu PNEUMOCOCI

I. Dg direct (dg indirect nu se face)

1. Recoltare si transport:

Streptococcus pneumoniae: produce pneumonie pneumococica sau pn. franca lobara

-se recolteaza : sputa

2. Exm. macro si microscopic:

Macro: sputa ruginie

Micro: se efectueaza frotiu din produs patologic, se coloreaza AM, Gram, ZN si se examineaza la MO:

-coci G(+), asezati in diplo, inconjurati de o capsula comuna (cps apare doar in produsul patologic)

-se pot dispune in lanturi sau gramezi

3.Insamantarea + izolarea:

-pretentiosi, cresc pe m. geloza sange cu azida de sodiu si cristal violet + CO2 10%

4. Identificarea pe baza :

a) caracterelor morfotinctoriale:

- coci G(+), asezati in diplo, necapsulati in frotiurile din cultura

-se pot dispune in lanturi sau gramezi

b) caracterelor de cultura:

- cresc sub forma de colonii mici de tip S , de culoare verzuie ( se confunda usor cu Streptococul Viridans) tulpinile necapsulate

- colonii de tip M tulpinile capsulate

- apare in jurul coloniilor o hemoliza de tip alfa

c) caracterelor biochimice si de patogenitate:

1. testul oxidazei (-)

2. testul catalazei(-)

3. autoliza: dat. elib unor enzime proteolitice lizeaza mediul din jur , dar si pe ei;

4. testul de umflare a capsulei:

- pe o lama: 1pic. ser fiziologic + 1 pic. de Ac anti capsula de pneumococ + 1 pic. albastru de metilen / la MO se observa capsula mult marita;

Exista trei teste pe care le utilizam pt diferentierea S. Pneumoniae de S. Viridans

5. reactia cu bila: pneumococii se lizeaza in prezenta sarurilor biliare, s.viridans rezista;

6. reactia cu inulina: pneumococul fermenteaza inulina, iar ph-ul solutiei vireaza spre acid, dar s. Viridans nu fermenteaza inulina;

7. reactia cu optochinul: pneumococul este sensibil la optochin, iar s.viridans nu este sensibil;

- aceeasi poveste ca si la testul cu bacitracina, doar ca diametrul zonei de inhibitie trebuie sa fie > 20mm pt a pune dg de S. Pneumoniae

5. Antibiograma: se recomanda deoarece au aparut tulpini rezistente la penicilina

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE CU COCI G ( - )

I. Dg direct

Coci G - : Neisseria meningitides meningococul (M)

Neisseria gonorrhoeae gonococul (G)

1. Recoltare si transport:

M: produce : meningita meningococica sau meningita cerebrospinala epidemica

( transmitere aerogena..localizare in faringeangina..trece in sangemeningita)

se recolteaza: LCR ( punctie lombara)

G: produce: gonoree(blenoragie) ; la barbati: uretrita gonococica; la femei vaginita gonococica; la nn: conjunctivita gonococica;

- se recolteaza : secretie uretrala/ vaginala/conjunctivala

Gonococul nu suporta transportul de aceea se recomanda efectuarea frotiului imediat dupa recoltare!!!

2. Exm. macro si microscopic:

Macro: LCR tulbure (in mod normal lichidul este limpede)

Secretia : galben-verzui

Micro: se efectueaza frotiu din produs patologic, se coloreaza AM, Gram, ZN si se examineaza la MO:

-coci reniformi dispusi in diplo(fata in fata), G (rosii)

-capsulati/ dispusi intra si extracelular

Exam microscopic are valoare diagnostica pt G (dg se poate opri aici deoarece la MO se observa PMN ne si coci G( - )dispusi intracelular). Este greu de facut o diferentiere intre M si G la MO (arata la fel).

3.Insamantarea + izolarea:

M si G sunt pretentiosi, nu cresc pe medii simple si medii lichide.

Se insamanteaza pe m. bogate : m. MULLER-HINTON (m. bogat care sustine cresterea majoritatii bacteriilor) + sange oparit (tratat la 80-90 grd) +antibiotice (pt selectivitate distrug ceilalti coci), exp: VANCOMICINA + CO2 10%

4. Identificarea pe baza :

a) caracterelor morfotinctoriale

-coci G -, reniformi, dispusi in diplo,fata in fata (frotiu din cultura)

b)caracterelor de cultura:

- colonii mici, rourate,de tip: S

c) caracterelor biochimice:

- testul oxidazei (+): este valabil pt intregul gen Neisseria si nu se poate face diferenta intre M si G

- testul de fermentare al zaharurilor: M este glucozo (+) si maltozo(+)

G este doar glucozo (+)

- testul catalazei (-)

5. Antibiograma:

- se recomanda inainte de a incepe tratamentul cu antibiotice

- M: gentamicina/ penicilina

- G: ampicilina/ qinolone/ cefalosporine

II. Dg. Indirect:

-pt M: se face in cazul infectiilor cronice : RFC

- pt G: nu se face ( deoarece G produce o infectie la poarta de intrare si nu determina un raspuns imun din partea organismului).