5_Flavonoid

5/10/2018 5_Flavonoid - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 1/23

Click to edit Master subtitle style

20.05.11

Isolasi dan Elusidasi Flavonoid

Dr.rer.nat. Yosi B. Murti

Sumber:

Andersen, O.M. & Markam, K.R. 2006, Flavonoids: Chemistry,Biochemistry and

Applications. CRC




20.05.11



20.05.11

Ekstraksi: Pemilihan pelarut

•Flavonoid (terutama glikosida) mudah mengalami degradasi enzimatik

ketika dikoleksi dalam bentuk segar. Oleh karena itu disarankan koleksi

yang dikeringkan atau dibekukan.

•Ekstraksi menggunakan solven yang sesuai dengan tipe flavonoid yg

dikehendaki. Polaritas menjadi pertimbangan utama. Flavonoid kurang

polar (seperti isoflavones, flavanones, flavones termetilasi, dan

flavonol) terekstraksi dengan chloroform, dichloromethane, diethyl

ether, atau ethyl acetate, sedangkan flavonoid glycosides dan aglikon

yang lebih polar terekstraksi dengan alcohols atau campuran alkoholair. Glikosida meningkatkan kelarutan ke air dan alkohol-air.



20.05.11

Ekstraksi: Pemilihan metode

•Maserasi

•Soxhlet

•SFE

•Ultra sonic extraction

•Microwave extraction



20.05.11

Maserasi

•Metode ekstraksi pada umumnya secara maserasi langsung dengan

pelarut tunggal seperti metanol atau etanol.

•Metode lain yang menguntungkan adalah dengan ekstraksi pelarut

secara bertahap. Tahap pertama misalnya dengan diklorometan akan

mengekstrak aglikon flavonoid dan bahan lain yang kurang polar. Tahap

selanjutnya dengan alkohol akan mengekstraksi glikosida flavonoid dan

senyawa polar lain. Flavanon dan khalkon tertentu sulit dilarutkan

dalam metanol, etanol atau campuran alkohol air. Kelarutan flavanon

tergantung kepada pH campuran pelarut berair.•


http://slidepdf.com/reader/full/5flavonoid 7/2320.05.11

Flavan-3-ols (catechins, proanthocyanidins, dan condensed tannins)

sering dapat diektraksi secara langsung dengan air. Meski demikian

komposisi ekstrak bervariasi tergantung solven yang digunakan, sebagai

contoh dinyatakan methanol adalah pelarut terbaik untuk catechins dan

70% acetone untuk procyanidins. Anthocyanins diekstraksi denganmetanol asam-dingin. Biasanya digunakan asam asetat 7% atau

trifluoroacetic acid (TFA) sekitar 3%. Penggunaan asam mineral dapat

menyebabkan putusnya gugus asil.



Ekstraksi dengan alat Soxhlet

•Ekstraksi dengan alat Soxhlet biasanya diawali dengan

heksan untuk menghilangkan lemak, dan kemudian

etilasetat atau etanol untuk memperoleh senyawa

fenolik. Metode ini tidak cocok untuk senyawa yangsensitif terhadap panas.



Supercritical Fluid Extraction

•Supercritical fluid lebih encer dan laju difusi lebih tinggi dari pada

pelarut cair, sehingga ideal untuk ekstraksi dari jaringan tumbuhan.

•Kelebihan metode ini adalah konsumsi pelarut sedikit, selektivitas

terkendali, kecil kemungkinan degradasi akibat panas dan kimiawi.

•Meskipun demikian untuk ekstraksi senyawa polar seperti flavonoid

dibutuhkan tambahan pelarut polar (modifier) seperti metanol,

dengan konsekuensi penurunan selektivitas. Hal ini menjelaskan

mengapa hanya sedikit penggunaannya untuk ekstraksi polifenol.

Bahkan dengan tekanan hingga 689 bar dan 20% modifier,menghasilkan rendemen senyawa polifenol yang tetap rendah.



20.05.11

Ultrasonic assisted extraction

•Metode ekstraksi yang sangat cepat dan juga dapat dipakai

untuk ekstraksi dengan campuran pelarut yant tidak saling

bercampur. Contoh: hexan dengan methanol–air (9:1),

digunakan untuk ekstraksi senyawa dari tumbuhan BrazilLychnophora ericoides (Asteraceae).

•Fase heksan diperoleh fraksi kurang polar berupa

sesquiterpene lactones dan hydrocarbon, sedangkan fraksi

alkohol berair berisi flavonoid dan sesquiterpene lactonesyang lebih polar.



20.05.11

Microwave assisted extraction

•Teknik ekstraksi sederhana yang dapat diselesaikan dalam

hitungan menit.

•Energi microwave diterapkan pada sampel yang

disuspensikan dalam pelarut, baik dalam wadah tertetupataupun terbuka (memungkinkan ekstraksi dalam jumlah

besar).

•Dalam teknik ini terlibat pemanasan pada tingkat tertentu.



20.05.11

Pemisahan



20.05.11



20.05.11

Identifikasi : contoh quercitrin



20.05.11

Penjelasan gambar

Gambar didepan menunjukkan spectra UV dari no 4 (quercitrin) setelahpenambahan lima reagen geser.

pita II

Pergeseran 11 nm dengan basa lemah 0.1 M Na2HPO4 , adalah karakteristikuntuk gugus 7-OH nonsubtitusi

Pergeseran 15 nm dengan asam borat adalah tipikal ortho-dihydroxyl padacincin B

pita I

Pergeseran 42 nm akibat aluminum chloride tanpa netralisai eluat spesifik

menunjukkan subtituen a 5-hydroxyl. Penambahan aluminium chloridesetelah netralisasi memberikan pergeseran 56 nm pada pita I. Hal iniakibat kombinasi efek dari ortho-dihydroxyl group (C-3’ and C-4’) danpembentukan kompleks C-4 keto dan gugus 5-hydroxyl.



20.05.11



20.05.11

O

O

HO

OH

OH

OH

5.84

5.88

3.26

5.516.49

6.49

6.58

5.0

5.0

5.0

5.0

01234567

PPM

O

O

HO

OH

OH

OH

H5.95

5.95

6.60

6.51

6.69

5.0

5.0

5.0

5.0

6.71

01234567

PPM

O

O

HO

OH

OH

OH

OH5.95

5.95

6.60

6.51

6.69

5.0

5.0

5.0

5.0

15.0

246810121416PPM

H-NMR



20.05.11

O

O

HO

OH

OH

OH163.7

94.4

159.4102.9

161.7

93.9

197.6

49.1

73.2134.9

115.9

144.7

143.4

117.3

121.3

20406080100120140160180200

PPM

O

O

HO

OH

OH

OH165.2

97.6

160.6105.0

160.7

97.3

187.0

94.9

168.8128.9

114.8

144.4

143.7

117.0

120.2

O

O

HO

OH

OH

OH

OH

165.2

97.6

160.6105.0

160.7

97.3

187.0

122.6

133.5 128.9114.8

144.4

143.7

117.0

120.2

C-NMR



20.05.11

Isoflavon

O

O

HO

OH

OH

5.84

5.88

4.78

4.42

5.0

5.06.95

6.68

6.68

6.95

5.0

01234567

PPM

O

O

HO

OH

OH

163.7

94.4159.4

102.9

161.7

93.9

197.6

54.4

71.3

128.5

131.2

116.2

156.2

116.2

131.2

020406080100120140160180200

PPM

6 552 0



20.05.11

Subtitusi gula dan metoksi O

O

O

OH

OH

OH

O

OHHO

HO

OH

O

5.88

5.92

5.61

5.596.53

6.55

6.58

5.0

5.0

2.0

3.40

3.49

3.91

5.88

3.76

2.0

2.0

2.0

3.66

2.0

3.73

234567

PPM

O

O

O

OH

OH

OH

O

OHHO

HO

OH

O

165.2

92.9

158.6

101.9

160.9

92.4

197.692.1

78.5

134.5

114.3

149.4

141.8

116.9

121.0

69.1

73.0

73.4

104.2

75.1

65.5

56.3

6080100120140160180200

PPM



20.05.11

Latihan: Isolasi Petalopurpurenol (1)

dan petalostemumol (2)

Extraction and Isolation. The ground roots (465 g) were extracted with50% MeOH/CHCl3 under reflux. The concentrated extract was partitioned

between water and 20% MeOH/CHCl3. The organic phase was

concentrated, and the residue was suspended in 90% MeOH/H2O and partitioned with hexane. The aqueous methanol portion (8.6 g) waschromatographed on a Si gel column (500 g), eluting with a CHCl3/MeOHmixture of increasing polarity. Fractions were combined based on their TLC

pattern to give 10 pooled fractions, F1- 10. Fractions F6 and F8 were found

to be active in DNA strand-scission assay. Fraction F6 (0.169 g) was further chromatographed on a Si gel column and finally purified by preparativeTLC (toluene:EtOAc 1:1) to afford petalopurpunol (1) (22 mg). Fraction F8(0.24 g) was subjected to a series of purification steps, including LH- 20CC, Si gel CC, and finally preparative TLC (MeOH: CHCl3 1:9) to obtain

pure petalostemumol (2) (57 mg).

5_Flavonoid

Documents

Transcript of 5_Flavonoid