微生物检验

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微生物检验. 1 .标本直接检查 ( 1 )抗原检查 利用免疫荧光技术和 ELlSA 法检测发病初期患者血液 及脑脊液中乙脑病毒抗原,结 果阳性有早期诊断意义。. ( 2 )核酸检查 近年来临床上已广泛 采用逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) 检测病毒核酸片段,有较高 的特异性和敏感性,特别适用于 抗体尚未阳转病人的早期快速诊 断。. 2. 分离培养. 从血液、脑脊液和脑组织中均可分离 到乙脑病毒。培养乙脑病毒可用 C6 / - PowerPoint PPT Presentation

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第二十七章 黄病毒

共同特点(1)直径20~60nm。单股RNA。20面体立

体对称。有包膜,表面有血凝素。(2)在细胞浆内增殖。宿主范围广。对温

度、乙醚、酸等都敏感。(3)节肢动物体内增殖,即是储存宿主又

是传染媒介,疾病有季节性及地区性,为野生动物间传播的自然疫源性疾病。

第二十七章 黄病毒

共同特点(1)直径20~60nm。单股RNA。20面体立

体对称。有包膜,表面有血凝素。(2)在细胞浆内增殖。宿主范围广。对温

度、乙醚、酸等都敏感。(3)节肢动物体内增殖,即是储存宿主又

是传染媒介,疾病有季节性及地区性,为野生动物间传播的自然疫源性疾病。

第一节流行性乙型脑炎病毒B encephalitis virus

一、生物学性状1.包膜上E糖蛋白,能凝集雏鸡和鹅红细胞,相应抗体能抑制血凝并有中和病毒作用。

2.敏感动物是鼠。鼠龄越小,易感性越高。3.抵抗力弱,对热、乙醚、丙酮敏感。低温能长时间保存。抗原性稳定,抗原性单一,因此疫苗预防效果较好。

第一节流行性乙型脑炎病毒B encephalitis virus

一、生物学性状1.包膜上E糖蛋白,能凝集雏鸡和鹅红细胞,相应抗体能抑制血凝并有中和病毒作用。

2.敏感动物是鼠。鼠龄越小,易感性越高。3.抵抗力弱,对热、乙醚、丙酮敏感。低温能长时间保存。抗原性稳定,抗原性单一,因此疫苗预防效果较好。

二、致病性和免疫性1.传播媒介是三节吻库蚊,也是长期储存宿主。蚊虫叮咬猪等动物,产生病毒血症,可成为传染源。幼猪是最重要的中间宿主或扩散宿主。

2.人群多数为隐性感染,少数(0.1%)引起中枢神经系统症状,发生乙型脑炎。

3.感染后可获得持久免疫,以中和抗体为主。

二、致病性和免疫性1.传播媒介是三节吻库蚊,也是长期储存宿主。蚊虫叮咬猪等动物,产生病毒血症,可成为传染源。幼猪是最重要的中间宿主或扩散宿主。

2.人群多数为隐性感染,少数(0.1%)引起中枢神经系统症状,发生乙型脑炎。

3.感染后可获得持久免疫,以中和抗体为主。

三、防治

防蚊、灭蚊、易感人群接种地鼠肾灭活疫苗。

三、防治

防蚊、灭蚊、易感人群接种地鼠肾灭活疫苗。

微生物检验

1 .标本直接检查 ( 1 )抗原检查 利用免疫荧光技术和 ELlSA 法检测发病初期患者血液 及脑脊液中乙脑病毒抗原,结 果阳性有早期诊断意义。

( 2 )核酸检查 近年来临床上已广泛 采用逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) 检测病毒核酸片段,有较高 的特异性和敏感性,特别适用于 抗体尚未阳转病人的早期快速诊 断。

2.分离培养从血液、脑脊液和脑组织中均可分离到乙脑病毒。培养乙脑病毒可用 C6 /36 、 BHK-21 、等细胞,以 C6 / 36 最常用。常用鹅血红细胞吸附试验、乙脑病毒单克隆抗体免疫荧光试验等方法检测培养结果。病毒分离培养还可以采用乳鼠脑内接种的方法,但敏感性低于细胞分离法。

3. 抗体检测

人感染乙脑病毒后 5-7d 即出现 IgM ,随后产生 lgG 血凝抑制抗体和中和抗体,感染后 2 周 lgM 抗体达高峰。补体结合抗体在第 3-4 周时才出现,半年后逐渐消失,这种抗体无保护作用。

患者血清及脑脊液中的特异性 IgM 抗体。感染后第 4 天出现, 2 ~ 3 周达高峰,阳性率可达 90 %以上。与血凝抑制试验同时测定,符合率可达95 %。双份血清血凝抑制抗体效价增高 4 倍可以确诊;单份血清效价在 1 : 320 以上有诊断意义。

补体结合抗体出现较晚,故不能作为早期诊断指标。可用于近期感染的诊断。单份抗体效价 1 : 16 有诊断价值;双份抗体效价升高 4 倍可以确诊。应用乙脑 MoAb 致敏羊血细胞反向被动血凝抑制试验,阳性率为 83 %。方法简便快速,已有商品供应。

第二节登革热病毒Dengue vi rus

1. 有4个血清型,型间有抗原性交叉。2. →传播媒介是埃及伊蚊和白纹伊蚊。病毒在蚊

→人 蚊间循环传播,多为隐性传染,临床表现有普通型登革热和登革热休克综合征两种类型。

3. 感染后产生中和抗体不仅可以造成病理损伤,还能促进病毒复制。

4. 主要依靠病毒分离和血清学诊断,尚无有效疫苗预防。

第二节登革热病毒Dengue vi rus

1. 有4个血清型,型间有抗原性交叉。2. →传播媒介是埃及伊蚊和白纹伊蚊。病毒在蚊

→人 蚊间循环传播,多为隐性传染,临床表现有普通型登革热和登革热休克综合征两种类型。

3. 感染后产生中和抗体不仅可以造成病理损伤,还能促进病毒复制。

4. 主要依靠病毒分离和血清学诊断,尚无有效疫苗预防。

培养特性该病毒易在蚊体中增殖,蚊体胸内接种增殖良好。乳鼠脑内接种登革病毒,经 4-7 日后,乳鼠可表现以迟缓性麻痹为主的脑炎症状,并最终导致死亡。灵长类动物如猴、猩猩、狒狒经皮内、皮下及静脉接种病毒后引起隐性感染,但可产生免疫力。细胞培养以白纹伊蚊的传代细胞 ( 如 C6 / 36)或地鼠肾细胞等敏感。

微生物检验

标本直接检查1 .抗原检查 应用 ELISA 法、免疫荧光 法、放射免疫法等检测标本中的病毒 抗原。2 .核酸检查 应用逆转录多聚酶链式反 应 (RT-PCR) 检测病毒核酸,并可检测 登革病型别。

1. 发病 l-3 天,常有病毒血症,病毒 滴度较高,故采集血清、白细胞 等标本可用于病毒分离培养。2. 细胞培养 常使用白纹伊蚊 C6 / 36 等细胞株培养病毒,接种 5—7 天, 直接进行病毒检测。

2 .动物接种 选用 1—3 日龄的小白 鼠,脑内和腹腔联合接种观察 21 天。如出现行动迟缓耸毛、共济 失调、抽搐或瘫痪等表现时,提 示可能有病毒增殖。

3 .蚊虫胸腔接种 用白纹伊蚊和 埃及伊蚊做胸腔接种,将接种 蚊在 28℃~ 30℃培养 10 天,取 蚊脑及唾液腺压碎涂片,用免 疫荧光技术检测病毒。

抗体检测常用的方法有补体结合试验、红细胞凝集抑制试验及中和试验等。单份血清补体结合抗体效价超过 l : 32 ,红细胞凝集抑制试验抗体效价超过 1 : 1280者有诊断意义。双份血清效价增高 4 倍以上,则可确诊。中和试验特异性较高,中和指数超过 50 者为阳性。还可用抗体捕获的 ELISA 法检测特异性 lgM抗体,有助于登革早期诊断。

第三节 森林脑炎病毒森林脑炎是经蜱传播的自然疫源性疾病,森林硬蜱为其主要传播媒介。蜱也是储存宿主。本病亦可经胃肠道传播。出现高热头痛、脑膜刺激症、昏迷等症状。病死率约 20 %— 30 %。病后可获持久免疫力。

微生物特性

呈球形,直径 20 ~ 30nm,立体对称,单正链 RNA ,有包膜,动物感染范围较广,以小鼠最为敏感,任何途径接种均能感染。能在原代鸡胚细胞、地鼠肾细胞中生长并引起细胞病变。毒力差异较大,但抗原性较稳定。

微生物检验森林脑炎病毒检测方法与乙型脑炎病毒相似。病毒分离仅用作死亡病例的确诊。血清学检查可取病人早期和恢复期双份血清做补体结合试验、中和试验及酶联免疫吸附试验,观察抗体效价增长情况,恢复期抗体效价增长 4 倍或 4 倍以上可确诊。