Controlling Promoter Strength andRegulation

in Saccharomyces cerevisiae Using Synthetic Hybrid Promoters

报告人：陈思时 间： 2012.12.15

准备知识 杂合启动子由两个模块化元件组成：增强

元件（串联重复或结合的上游活化序列 , Upstream Promoter Sequence ,UAS ）和核心启动子元件(core promoter) 。

准备知识—— core promoterPGPD 3- 磷酸甘油醛脱氢酶组成启动子，是酵母中表

达最强的启动子PGAL 半乳糖诱导启动子，是一种广泛使用的诱导

启动子，半乳糖诱导和葡萄糖抑制表达的比例为1000 ，通过基因敲除可以使 PGAL 受半乳糖独立诱导

PTEF 翻译延伸因子的启动子PCYC 细胞色素 C 相对弱的启动子区域

准备知识—— UAS

基本思路 结合核心启动子元件和上游活化序列元件构建可控的

合成型启动子，认为 UAS 元件能够作为合成的转录放大器，并能调控任意启动子的表达

三个工作通过使用串联 UAS 元件，构建了一系列组成型启动子，

从而使 PGPD 的转录水平提高了 2.5 倍使用 UASGAL 元件调控内源启动子的表达，再通过结合

其他的 UAS 元件降低了天然 PGAL 的抑制能力构建了一系列诱导启动子，调控半乳糖基因的表达，如

使用 PGAL 使得表达能力的范围扩大了 50 倍，同时转录能力增强了 15%

质粒的构建 所有包含表达盒的质粒在

转化进入大肠前都进行过测序

p416-TEF-yECitrine 被改造为 p416-MCS-yECitrine ， 在yECitrine reporter 的5’ 端插入多克隆位点，使得构造和检测杂合启动子成为可能

实验方式使用 PmeI and XbaI 将核心启动子

PGPD 、 PGAL 、 PTEF 、 PCYC 、 PLEUM 、 PCYC158 插入yECitrine reporter 的 5’ 端 ,UASGAL 、 UASCLB 、UASCIT 、 UASTEF 以单独、串联或组合的方式插入，从而构造成杂合启动子

在进行半乳糖诱导实验时， yECitrine 被 lac Z 替换

检测方式使用黄色荧光燃料，在一定条件下过流式细胞仪，测

定荧光强度，从而反应表达强度β- 半乳糖苷酶检测qRT-PCR

结论 1

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结论 2

结论 2

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结论 3

结论

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