UVOD U

ELEKTROFORETSKE

SEPARACIJE

hello!

Ja sam Željko DebeljakJa sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama.

Možete me kontaktirati na zeljko.debeljak@gmail.com

Ako nije drugačije navedeno

Slike su, uz ljubazno dopuštenje, preuzete iz:

High Performance Capillary Electrophoresis: A Primer, H.H. Lauer, G. Rozing, 2nd edition, Agilent Technologies, USA, 2014.

1.

Kome još trebaju foreze?

Kad imamo imunokemijske autoanalizatore

Pregled najčešćih kliničkih primjena foreza

Stanični lizati

Hemoglobinopatije: Hb

Nasljedne bolesti:

fragmenti nukleinskih kiselina

Likvor

Multipla skleroza: oligoklonalne vrpce

Likvoreja: CDT

Urin

Bubrežne bolesti: tipizacija proteinurije, citrati/oksalati

Nasljedne bolesti: metaboliti

Serum

Mišićne bolesti: CK

Monoklonske gamapatije: SPE

Alkoholizam: CDT

Intoksikacije: ksenobiotici

Kontrolni uzorak

Uzorak bolesnika

Diluirani uzorak

bolesnika

Diluirani uzorak

bolesnika

HbA0

HbS i Lepore

HbA2

PRIMJER HEMOGLOBINOPATIJE

2.

POVIJEST FOREZA

“Sećanje je smešna lupa koja sitne stvari uveličava” Đ.B.

Kako je sve krenulo?

Arne Tiselius

Dalo bi se o njemu svašta reći ali …

https://todayinsci.com/T/Tiselius_Arne/TiseliusArne-Quotations.htm

Kuda to ide?

Mikropostroji

( za nas jugonostalgičare “čipovi”)

https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Microfluidics.aspx

3.

Sad malo deskriptivne

fizikalne kemije

Otvaranje crne kutije

Separacija srodnih spojeva GCSF-a

4.

A sad to isto ali bez

sličica

Za one koji stvarno žele razumjeti što rade

Rocket science?

𝑣 = 𝜇𝑒 𝐸

Nije ono što mislite!

𝜇𝑒 = 𝑞

6 𝜋 𝜂 𝑟

Zato se bavimo

separacijama

𝑅 = 2 (𝑡2 − 𝑡1)

𝑊2 + 𝑊1

Hmm ….

𝑅 =∆𝜇𝑎

4 2

𝑉

𝐷 ( 𝜇 𝑎 + 𝜇𝐸𝑂𝐹 )

Vrag je u detaljima

𝑄 = 𝑉2 𝑡

𝑅𝐼

5.

KAKO TO PRIMIJENITI?

Da odahnemo

Instrumentalna analiza

Predanalitika Interpretacija

Predanalitika

✘ Ili je jednostavna ili je uopće nema!

✘ Najčešće samo dilucija uzoraka (nekad i sa organskim otapalom)

✘ Deproteinizacija (kod analize malih analita)

✘ Ekstrakcija, dijaliza, ultrafiltracija …

✘ Ali, reagense često pripremamo sami (puferi, diluenti …)

Instrumentalna analiza

Instrumentalna analiza:

Pregled elektroforetskih načela

Nosač

Gel: PAGE, agaroza

Kapilara:

Ne-presvučena, presvučena

Mikropostroj

Višedimenzionalne

separacije

2D: proteini

Elektrokromatografija

Aditivi

Amini: inaktivacija Si-OH

Ciklodekstrini: kirali

Deterdženti: MEKC

Amfoliti: IEF

Prosijvajući polimeri: gel filtracija

Puferi

Velik kapacitet: niska ionska jakost

Transparentni: fosfat, borat, glicil-glicin

Niska mobilnost: TRIS , CHAPS

Interpretacija: nativna detekcija

DETEKTOR Način rada Osjetljivost (mol/L)

Identifikacija sastavnica

Kvantifikacija sastavncia

UV/VIS On-line 10-5 – 10-7 NE DA

LIF On-line 10-9 – 10-12 NE DA

qqq, qTOF MS On-line 10-8 – 10-9 DA DA

MALDI TOF MS Off-line 10-8 – 10-9 DA NE

Interpretacija: derivatizacija i kvalifikacija

Nativna detekcija

Visokozastupljene sastavnice: citrati u urinu

Selektivni detektori

Derivatizacija

Prije separacije: kromogene skupine (danziliranje AK)

Tijekom separacije: keliranje, indirektna detekcija

Nakon separacije: enzimi, ostali proteini, nukleinske kiseline

Zahvale

E, da je više takvih ljudi

Siniša Stipaničić, AlphaChrom

Place your screenshot here

Silvana Malčić, PLIVA d.d.

Place your screenshot here

Ivana Leščić Ašler, IRB

Place your screenshot here

thanks!

Pitanja?

Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com