UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o...
Transcript of UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o...
![Page 1: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/1.jpg)
UVOD U
ELEKTROFORETSKE
SEPARACIJE
![Page 2: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/2.jpg)
hello!
Ja sam Željko DebeljakJa sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama.
Možete me kontaktirati na [email protected]
![Page 3: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/3.jpg)
Ako nije drugačije navedeno
Slike su, uz ljubazno dopuštenje, preuzete iz:
High Performance Capillary Electrophoresis: A Primer, H.H. Lauer, G. Rozing, 2nd edition, Agilent Technologies, USA, 2014.
![Page 4: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/4.jpg)
1.
Kome još trebaju foreze?
Kad imamo imunokemijske autoanalizatore
![Page 5: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/5.jpg)
Pregled najčešćih kliničkih primjena foreza
Stanični lizati
Hemoglobinopatije: Hb
Nasljedne bolesti:
fragmenti nukleinskih kiselina
Likvor
Multipla skleroza: oligoklonalne vrpce
Likvoreja: CDT
Urin
Bubrežne bolesti: tipizacija proteinurije, citrati/oksalati
Nasljedne bolesti: metaboliti
Serum
Mišićne bolesti: CK
Monoklonske gamapatije: SPE
Alkoholizam: CDT
Intoksikacije: ksenobiotici
![Page 6: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/6.jpg)
Kontrolni uzorak
Uzorak bolesnika
Diluirani uzorak
bolesnika
Diluirani uzorak
bolesnika
HbA0
HbS i Lepore
HbA2
PRIMJER HEMOGLOBINOPATIJE
![Page 7: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/7.jpg)
2.
POVIJEST FOREZA
“Sećanje je smešna lupa koja sitne stvari uveličava” Đ.B.
![Page 8: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/8.jpg)
Kako je sve krenulo?
Arne Tiselius
Dalo bi se o njemu svašta reći ali …
https://todayinsci.com/T/Tiselius_Arne/TiseliusArne-Quotations.htm
![Page 9: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/9.jpg)
Kuda to ide?
Mikropostroji
( za nas jugonostalgičare “čipovi”)
https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Microfluidics.aspx
![Page 10: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/10.jpg)
3.
Sad malo deskriptivne
fizikalne kemije
Otvaranje crne kutije
![Page 11: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/11.jpg)
![Page 12: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/13.jpg)
![Page 14: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/14.jpg)
Separacija srodnih spojeva GCSF-a
![Page 15: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/15.jpg)
4.
A sad to isto ali bez
sličica
Za one koji stvarno žele razumjeti što rade
![Page 16: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/16.jpg)
Rocket science?
𝑣 = 𝜇𝑒 𝐸
![Page 17: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/17.jpg)
Nije ono što mislite!
𝜇𝑒 = 𝑞
6 𝜋 𝜂 𝑟
![Page 18: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/18.jpg)
Zato se bavimo
separacijama
𝑅 = 2 (𝑡2 − 𝑡1)
𝑊2 + 𝑊1
![Page 19: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/19.jpg)
Hmm ….
𝑅 =∆𝜇𝑎
4 2
𝑉
𝐷 ( 𝜇 𝑎 + 𝜇𝐸𝑂𝐹 )
![Page 20: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/20.jpg)
Vrag je u detaljima
𝑄 = 𝑉2 𝑡
𝑅𝐼
![Page 21: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/21.jpg)
5.
KAKO TO PRIMIJENITI?
Da odahnemo
![Page 22: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/22.jpg)
Instrumentalna analiza
Predanalitika Interpretacija
![Page 23: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/23.jpg)
Predanalitika
✘ Ili je jednostavna ili je uopće nema!
✘ Najčešće samo dilucija uzoraka (nekad i sa organskim otapalom)
✘ Deproteinizacija (kod analize malih analita)
✘ Ekstrakcija, dijaliza, ultrafiltracija …
✘ Ali, reagense često pripremamo sami (puferi, diluenti …)
![Page 24: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/24.jpg)
Instrumentalna analiza
![Page 25: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/25.jpg)
Instrumentalna analiza:
Pregled elektroforetskih načela
Nosač
Gel: PAGE, agaroza
Kapilara:
Ne-presvučena, presvučena
Mikropostroj
Višedimenzionalne
separacije
2D: proteini
Elektrokromatografija
Aditivi
Amini: inaktivacija Si-OH
Ciklodekstrini: kirali
Deterdženti: MEKC
Amfoliti: IEF
Prosijvajući polimeri: gel filtracija
Puferi
Velik kapacitet: niska ionska jakost
Transparentni: fosfat, borat, glicil-glicin
Niska mobilnost: TRIS , CHAPS
![Page 26: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/26.jpg)
Interpretacija: nativna detekcija
DETEKTOR Način rada Osjetljivost (mol/L)
Identifikacija sastavnica
Kvantifikacija sastavncia
UV/VIS On-line 10-5 – 10-7 NE DA
LIF On-line 10-9 – 10-12 NE DA
qqq, qTOF MS On-line 10-8 – 10-9 DA DA
MALDI TOF MS Off-line 10-8 – 10-9 DA NE
![Page 27: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/27.jpg)
Interpretacija: derivatizacija i kvalifikacija
Nativna detekcija
Visokozastupljene sastavnice: citrati u urinu
Selektivni detektori
Derivatizacija
Prije separacije: kromogene skupine (danziliranje AK)
Tijekom separacije: keliranje, indirektna detekcija
Nakon separacije: enzimi, ostali proteini, nukleinske kiseline
![Page 28: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/28.jpg)
Zahvale
E, da je više takvih ljudi
![Page 29: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/29.jpg)
Siniša Stipaničić, AlphaChrom
Place your screenshot here
![Page 30: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/30.jpg)
Silvana Malčić, PLIVA d.d.
Place your screenshot here
![Page 31: UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama. Možete me kontaktirati nazeljko.debeljak@gmail.com](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041604/5e333c623240a918a14aedd1/html5/thumbnails/31.jpg)
Ivana Leščić Ašler, IRB
Place your screenshot here