Prošla nedelja

Sistem komplementa (C’)

Putevi aktivacijeBiološke posledice aktivacije

Regulacija aktivacije

ANTIGEN-ANTITELOREAKCIJE

ImunoaglutinacijaImunoprecipitacija

Antigen-antitelo (Ag-At) reakcije čine osnovu mnogih in vitro metoda koje se obavljaju u laboratorijskim uslovima u dijagnostičke ili istraživačke svrhe.

Tradicionalno se zovu i serološke reakcije

Ispituje se prisustvo antigena ili antitela u odgovarajućem uzorku (serumu, likvoru, ćelijskoj kulturi...).

- drugi molekuli (npr. citokini, hormoni, komponente C’, tumor markeri, proteini akutne faze , Ig...)

- infektivni agens ili njegov deo (npr. HbsAg, p24 HIV...)

- ukupni Ig (pojedine klase) ili specifična At za određeni Ag

Ag-At reakcije (opšte osobine)

1. Kvalitativne

2. Kvantitativne

TITAR je mera količine specifičnih antitela i predstavlja vrednost (recipročnu) najvećeg razblaženja uzorka koji daje pozitivnu reakciju

POZITIVAN

NEGATIVAN

Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml ili IU)

Specifična At - TITAR (npr. 1/64 ili 64)

Mogu da budu:

Rezultat:

Ag-At reakcije (opšte osobine)

Ukupna At - KONCENTRACIJA (npr. IgG 13,5 mg/ml)

Kontrole - pozitivna

- negativnaBez validnih kontrola test nema

značaj

Vreme (nedelje)

Količ

ina a

nti

tela

u s

eru

mu

Prvi susret sa patogenom

Ponovni susretsa patogenom

Primarni i sekundarni humoralni odgovor

eventualno IgA i IgEviši aviditet

IIgM

IIgM, IgGIIgG

IViše IgG

eventualno IgM

IMUNOAGLUTINACIJA

IMUNOAGLUTINACIJA je reakcija između korpuskularnog

(nerastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih

antitela

Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala

aglutinacijom (slepljivanjem, zgomilavanjem) čestica

Vidljivi aglutinat se javlja ako je odnos antitela i antigena

približno

jednak (optimalan odnosno ekvivalentni odnos)

Najčešće se koristi za identifikaciju bakterija i krvnih

grupa

VIŠAK ANTIGENAVIŠAK ANTITELA

EKVIVALENTAN(OPTIMALAN)

ODNOS

Ag-At KOMPLEKSI:

AGLUTINACIJA:

REZULTAT:

MALI

NE POSTOJI

NEPOUZDAN(LAŽNO NEGATIVAN)FENOMEN PROZONE

VELIKI

POSTOJI

POUZDAN(POZITIVAN)

MALI

NE POSTOJI

NEPOUZDAN(LAŽNO NEGATIVAN)

IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)

DIREKTNA(Ag je deo čestice)

IMUNOAGLUTINACIJA

DIREKTNA(Ag je deo čestice)

Detekcija AgIdentifikacija

bakterija(enterobakterije)

Primena (Primer)

Direktna aglutinacija(identifikacija bakterija)

IMUNOAGLUTINACIJA

DIREKTNA(Ag je deo čestice)

Detekcija At BAB test(At na brucelu)

Primena (Primer)

IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag ili At je pasivno vezano za česticu-nosač)

Detekcija At (Ag vezan za nosač)

Lateks RF test(reumatoidni

faktor)

Primena (Primer)

Indirektna aglutinacija

Detekcija At (Ag vezan za nosač)

IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag ili At je pasivno vezano

za česticu-nosač) Detekcija Ag (At vezano za

nosač)

HBsAg test(hepatitis B virus)

Primena (Primer)

Indirektna aglutinacija

Detekcija Ag (At vezano za

nosač)

IMUNOAGLUTINACIJA

INDIREKTNApasivna

(Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)

DIREKTNA(Ag je deo čestice)

Detekcija Ag

Detekcija At

Identifikacijabakterija

(enterobakterije)

Primena (Primer)

Detekcija At (Ag vezan za nosač)

BAB test(At na brucelu)

Lateks RF test(reumatoidni

faktor)

Detekcija Ag (At vezano za

nosač)

HBsAg test(hepatitis B virus)

IMUNOPRECIPITACIJA

IMUNOPRECIPITACIJA je reakcija između solubilnog

(rastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela

Najčešće se koristi za merenje količine proteina plazme i drugih

telesnih tečnosti (imunoglobulina, komponenti komplementa

itd.)

Rezultat reakcije je precipitat (talog), tj. dolazi do izdvajanja

antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga

Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog

(optimalnog) odnosa koncentracija antitela i antigena.

Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u:

tečnoj sredini

polučvrstoj sredini (gelu)

slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta)

slobodnom difuzijom (talog se formira posle više dana)pomoću električne struje (talog se formira posle nekoliko sati)

IMUNOPRECIPITACIJA

U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

U TEČNOJ SREDINI

RING test(Kvalitativna)

Askolijeva reakcija(antraks)

PRIMER

Interfacijalni (interfazni) test prstena – RING test(princip)

IMUNOPRECIPITACIJA

U TEČNOJ SREDINI

Nefelometrija(Kvantitativna)

Određivanje koncentracije

proteina u serumu(Ig, komponente C‛)

PRIMER

Nefelometrija(princip)

IMUNOPRECIPITACIJA

U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

Dvostruka imunodifuzija(Kvalitativna)

Elekova proba(difterija)

PRIMER

Dvostruka imunodifuzija u gelu – Elekova proba (princip)

IMUNOPRECIPITACIJA

U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

RID test(Kvantitativna)

PRIMER

Određivanje koncentracije

proteina u serumu(Ig, komponente C‛)

RID

IgG

1

2

3

4 5

Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test(princip)

1 standard poznate koncentracije

2 standard poznate koncentracije

3 standard poznate koncentracije

4 uzorak pacijenta

5 uzorak pacijenta

At u gelu

Ag u rupice:

Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test(princip)

Ag – koncentracija (mg/ml)

D2 (mm2)

1

2

3

4 5

Standardna (kalibraciona) kriva

IMUNOPRECIPITACIJA

U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

U TEČNOJ SREDINI

RING test(Kvalitativna)

Nefelometrija(Kvantitativna)

Dvostruka imunodifuzija(Kvalitativna)

RID test(Kvantitativna)

Askolijeva reakcija(antraks)

određivanje koncentracije

proteina u serumu(Ig, komponente C‛)

Elekova proba(difterija)

PRIMER

Određivanje koncentracije

proteina u serumu(Ig, komponente C‛)

10.____9.____8.____7.____5._____4._____3._____2._____

imunoprecipitacije u gelu j.C3 komponenta komplementa u krvi može da se meri

10.

indirektna aglutinacija i.Elekova proba je primer 9.

kvantitativna tehnika h.Nefelometrija je 8.

direktnom aglutinacijom g.Ring test je primer imunoprecipitacije7.

u tečnom medijumu f.Imunoprecipitacija može da se odigra u6.

kvalitativna tehnika e.Solubilan antigen ne može da se meri 5.

tečnoj sredini ili gelu d.Lateks aglutinacija je4.

lažno negativna aglutinacija u prisustvu viška antitela

c.Za krajnju identifikaciju nekih bakterija iz familije Entrobacteriaceae se koristi

3.

direktna aglutinacija b.Fenomen prozone je2.

nefelometrijski i RID testom a.Aglutinacija je1.

1._____ 6.____c b i g d f h je a

Sledeća nedelja

Predavanje:Odbrana od virusnih, gljivičnih i parazitskih infekcija

Seminar:Enzimski imunotest - ELISA (praktična primena)

Imunofluorescencija (praktična primena)