PESQUISA DE PATÓGENOSPESQUISA DE PATÓGENOS

Controle Microbiológico Controle Microbiológico de Produtos não estéreisde Produtos não estéreis

Pesquisa de PatógenosPesquisa de Patógenos

Microrganismos a serem pesquisados devido à sua Microrganismos a serem pesquisados devido à sua presença indesejável nas formulações farmacêuticas, presença indesejável nas formulações farmacêuticas, segundo Resolução 481/99segundo Resolução 481/99:

- Staphylococcus aureus - nas preparações tópicas em Geral. - Pseudomonas aeruginosa - preparações tópicas, principalmente para áea dos olhos. - Escherichia coli - nas preparações orais. -Salmonella sp - Nas preparações orais.

-Obs. Pode ser tb interessante a pesquisa de outras cepas ou grupos microorganismos, tais como coliformes.

Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus

• Staphylococcus aureus– Familia Staphylococcaceae– Coco Gram (+) cacho de uva– Anaeróbios facultativos

• Doenças– Infecções cutâneas– Infecções oportunistas– Das vias urinárias– Sistêmicas potencialmente fatais

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

• Pseudomonas aeruginosa– Bacilo Gram (-)– Anaeróbios facultativos

• Infecta– Aparelho pulmonar– Aparelho urinário– Queimaduras– Infecções Sanguíneas

Escherichia coliEscherichia coli

• Escherichia coli– Familia Enterobacteriaceae– Bacilo Gram (-) flagelado– Anaeróbios facultativos– Fermentadores de açúcares- Lactose (+)

• Doenças– Gastroenterites

Salmonella spSalmonella sp

• Salmonella– Familia Enterobacteriaceae– Bastonetes Gram (-) flagelado– Anaeróbios facultativos– Fermentadores de açúcares

• Sintomas da Salmonelose– Febre– Náuseas– Vômito– Diarréia

Procedimentos:Procedimentos:

-Sofrem pequenas distinções entre os vários compêndios oficiais, entretanto os aspectos básicos são mantidos.

- Segue- se apenas com a citação dos diferentes meios de cultura recomendados.

Sequência para execução das etapas para realizar pesquisa de patógenos em amostras de produtos não

estéreis:

- Amostragem matéria-prima, medicamentos ou cosméticos não estéreis;

- Determinação tomada de ensaio da amostra a ser analisada;

- Enriquecimento não seletivo da amostra;

- Isolamento seletivo utilizando meios cultura seletivos;

- Realização coloração de gram e provas bioquímicas pertinentes.

Meios de EnriquecimentoMeios de Enriquecimento

Tomada de ensaio: 10 g(mL). Enriquecimento não seletivo (100 mL): - Caldo lactose (CL): Escherichia coli e Salmonella sp - Caldo caseína-soja (TSB): Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa.

Ambos incuba: 35 – 37ºC - 24 a 48 horas

Enriquecimento seletivo para Salmonella sp: - 10 mL da suspensão resultante do caldo não seletivo para os caldos tetrationato (100mL) e selenito-cistina (100mL) por 24 horas a 36±1ºC.

Meios de DiferenciaçãoMeios de Diferenciação

- Após enriquecimento seletivo e não-seletivo (Salmonella sp), alíquotas são transferidas, por repique (estria), para meios de cultura para isolamento e diferenciação visando a identificação do microorganismo.

Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus

• Ágar Baird Parker

– colônias pretas, halo transparente.

Ágar Vogel-Johnson• colônias pretas, halo amarelo

Ágar Manitol• colônias amarelas, halo amarelo

Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus

Ágar Vogel-Johnson

Ágar ManitolMeio de cultura sem inoculação

• Ágar Pseudomonas Base– colônias amareladas a douradas

Placa inoculadaPseudomonas aeruginosa

Placa não-inoculada

• Ágar Cetrimida– colônias esverdeadas com fluorescência

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

• Ágar Pseudomonas para Fluoresceína (A e C)– colônias claras e amarelas, com fluorescência amarela.

• Ágar Pseudomonas para Piocianina (B e D)– colônias esverdeadas, com fluorescência azul.

• Ágar Mac Conkey– colônias vermelho-tijolo a púrpura – com halo de precipitação de bile

Escherichia coliEscherichia coli

• Ágar Eosina-Azul de metileno (EMB)– colônias vermelho-escuras, brilho metálico

Escherichia coliEscherichia coli

• Ágar Endo– colônias rosadas a vermelho, brilho metálico.

Salmonella spSalmonella sp

• Enriquecimento seletivo– caldo selenito-cistina e tetrationato

• Meio de isolamento

• Ágar Verde Brilhante– colônias transparentes

• Ágar sulfito de bismuto– colônias pretas ou esverdeadas

Teste de promoção de crescimento dos meiosTeste de promoção de crescimento dos meios

• Verificar a capacidade de promoção de crescimento do meio de cultura.

• São utilizados microrganismos testes:

– Para TSB (tryptone soya broth) , TSA (tryptone soya agar) : S.aureus e P. aeruginosa– Para CL (caldo lactose): E.coli e Salmonella– Para Sabouraud: C.albicans

Conforme Portaria 348/97 que determina a todos estabelecimentos produtores de Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes, o cumprimento das Diretrizes estabelecidas no Regulamento Técnico - Manual de Boas Práticas de Fabricação para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.

TSA (Tryptone Soya Ágar) como meio de crescimento para bactérias, incubação a 35 a 37º C, durante 48h.

SDA (Sabouraud Dextrose Ágar) como meio de crescimento para fungos, incubação a 20-25º C, durante 7 dias.

MÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREISMÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREIS

Inativante + diluente9 mLPote de

creme

10g

TSB CL

10g

SAB TSA CETR

MAN. Mac SALM

10-1

Inativante + diluente90 mL

0,1mL

Inativante + diluente9 mL0,1mL

0,1mL

10g1mL 1mL

10-2 10-3

E. coli Salmonella

Pseudomonas

StaphyloStaphylococcuscoccus

fungos bactérias