EL PERFIL DEL ADN Dr. José Antonio Nastasi Catanese PhD en Genética Humana Director (E) Centro de...

EL PERFIL DEL ADN

Dr. José Antonio Nastasi Catanese PhD en Genética HumanaDirector (E) Centro de Microscopía ElectrónicaProfesor AgregadoUDO-Núcleo Bolívar

¨ ADN: Acido Desoxirribonicleico. Molécula de de la Vida. Se encuentra en todas las células nucleadas.

PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDAD

Tipos de ADN


Tipos de Proporción CaracterísticasADN del Genoma

De copia 75 Incluye la mayor parte de losUNICA genes. Se localiza a lo largo de

todo el genoma.

Disperso o Está mezclado en los genes yRepetitivo 10 otros tipos de ADN de copia

simple. Se localiza a lo largo de todo el genoma.

Satélite 15 Secuencias muy repetidas. Muy localizadas en lugares específicos

(centrómeros y telómeros).

Tipos de ADN


Tipos Unidades de Repetición

ADN satélite > 100

ADN minisatélite 7 – 100 (VNTR) *

ADN microsatélite 3 - 7 (STR) *

* Con gran variabilidad alélica que los hace marcadores

genéticos ideales.

POLIMORFISMO¨ Dícese de los cuerpos que se presentan bajo diversas formas, sin

cambiar la naturaleza del mismo.¨ En otras palabras, son las cosas que pueden tener formas

alternativas sin modificar la función para la cual fueron diseñados. Grupo sanguíneo ABO.

POLIMORFISMO GENETICO¨ Cuando en un locus el alelo más frecuente no alcanza el 99% de

frecuencia. Estos polimorfismo son empleados como herramientas genéticas moleculares en la identificación de individuos.

¨ Fenotipo, Genotipo, Diploides, Locus, Alelo.


HISTORIA

¨ Grupos sanguíneos (1910-1960)¨ Proteínas séricas (1960-1975)¨ HLA 1970-¨ ADN RFLP 1975- (Jeffreys)

– Sondas multilocus Vs sondas unilocus¨ ADN VNTR 1985- (Nakamura)

– Minisatélites.¨ ADN STR 1989- (PCR Mullis)

– Microsatélites.



PERFIL GENÉTICO

¨ Grupo de marcadores polimórficos (STR, SNP, u otro) que combinados dan una unitariedad tan buena como las huellas dactilares.

PERFIL GENETICO DE UN INDIVIDUO

¨ Combinación de genotipos de un individuo en un grupo de marcadores polimórficos donde la ocurrencia de esa combinación de genotipos pueda ser casi única o única.

Características de un marcador:Polimórficos.Estables. Tasa de mutación muy baja.Validez.Fácil aplicación e interpretación objetivaPolimorfismos estudiados y reconocidos mundialmente.Reproducibles mundialmente..


El ADN puede aislarse a partir de casi todas las células delorganismo; se obtiene de cualquier tejidos del cuerpo: Sangre.Semen.Cabello.Saliva , etc...


Sangre: es la más sencilla y útil. Se conserva congelada. puede ser extraída de superficies lisas (vidrio, metal,plastico). Cuando se extrae de alfombras y otras fibras densas, requiere pasos adicionales, por contener sustancias que inhiben el proceso.

Semen: Es la evidencia más común. Las células espermáticaspueden ser lavadas y guardadas en forma de coágulos y conservadas durante años. Se evidencian almicroscopio mediante tinción.

Tejidos: Se obtienen de visceras, múculos, huesos , píezas dentarias, estas últimas presentan mejor estado de

conservación.

Raíz del Cabello: contiene sólo un trazo de ADN Y por logeneral no son suceptibles a pruebas de rutina forense.


Saliva: Se extrae de cualquier superficie donde se encuentra depositada (vasos, colillas de cigarro)

Orina: Son menos comunes ya que los individuos sanos no expulsan células nucleados.

Producto de la Concepción: Generalmente usados paraalegación de paternidad criminal.

CADENA DE CUSTODIAProcedimiento a través del cual se establece una relación directa de la muestra con la escena de los hechos, cuyo procedimiento debe asegurar que la muestra tomada salió del sitio del origen.


Requisitos de la Cadena de Custodia :

Identificación de la persona que realiza la extracción. Método de conservación de la muestra hasta su envío. Identificación de la persona que presenta el paquete con las muestras y su firma. Medio de envío y su identificación

PRUEBAS PARA EL ANALISIS DEL ADN :

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Secuenciación del ADN.


+Taq. PolimerasaDNTPsPrimers

ADN Molde

1er Paso: Desnaturalización. 2do. Paso: Alineación.

3er. Paso: Extensión.

PCR

PCR

Al cabo de 1 ciclo


¨ REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR):– Es precisa– Se pude realizar con muy poca cantidad de ADN.– Puede ser visualizada a simple vista, no necesita de sondas ni

pasos adicionales.– Se puede realizar en pocas horas.– Es específica.


A T C A G C G T C A A T A C C

Se colocan en el termociclador, luego se separan con una electroforesis de

ácidos nucleicos.

Más grande

Más pequeño

G A T C

Secuencia

TAGTCGCAGTT

MÉTODO DE SANGER

A T G G

1ddGTP

ADN Polimerasa4 dNTP(dTTP, dCTP, dATP, dGTP

2ddATP

3ddTTP

4ddCTP


DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO¨ Extracción de ADN:¨ Elección de locus a estudiar:

– TH01,vWA, F13A01, FESFPS, TPOX, CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317, LPL, F13B, HPRTB.

¨ Realizar PCR según protocolo.¨ Electroforesis y revelado.¨ Análisis.


ESTUDIO DE LOCUS STR.


Regiones constantes

30pb 4pb por unidad 60pb

98

102

106

110 Alelo 5

Alelo 4

Alelo 3

Alelo 2

Interpretación de la prueba

23

20

18

15

Madre Padre Hijo

Exclusión

23

20

18

Madre Padre Hijo

Inclusión



13

16

21

23

Víctima Semen Sangre Piel Victimario

Inclusión

13

16

21

23

Víctima Semen Sangre Piel Victimario

Exclusión28

ANALISIS PATRILINEAL¨ Cromosoma Y

– Regiones pseudoautosomicas– Regiones hipervariables. Se heredan en bloque.– Se transmiten de padres a hijos varones.– Yq13 a Yqter.


Región pseudoautosómica

Región pseudoautosómica

Región heterocromática polimorfica

ANALISIS MATRILINEAL¨ ADN Mitocondrial.

– Tiene 16596 pb. Región Dloop.– Se compara con la secuencia de Anderson– Se hereda de madres a hijos, lo cual indica que:


1

Región Dloop


Componente del loci

Rango de tamaño de las escaleras alélicas

Alelos de la escalera alélica

Otros alelos conocidos

CTT CSF1PO 295-327 7-15 6

TPOX 224-252 6-15 No

TH01 179-203 5-11 9.3

FFv F13A01 283-331 4-9 y 11-16 3.2 y 10

FESFPS 222-250 7-14 No

vWA 139-167 13-20 11-21

SilverSTR III D15S539 264-304 5 y 8-15 No

D7S820 215-247 6-14 No

D13S317 165-197 7-15 No

¨ INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA:


UNIVERSIDAD DE ORIENTE ESCUELA DE MEDICINA

CENTRO DE MICROSCOPIA ELECTRONICA UNIDAD DE GENETICA

INFORME DE PATERNIDAD

21/03/2001 PADRE ALEGADO : MADRE : HIJA : LOCI ESTUDIADOS: LOCUS ALELOS

MADRE ALELOS HIJO ALELOS

PADRE COINCIDENCIA

PADRE/HIJO INDICE DE

PATERNIDAD

F13A01 3.2/7 3.2/6 6/7 Si 3,0487804 F13B 6/9 6/10 6/10 Si 1,1494252 FESFPS 10/12 10/12 12/12 Si 2,4448877 LPL 10/10 10/11 11/11 Si 4,4642857 CSF1PO 11/12 12/12 12/13 Si 1,3966480 TH01 6/7 7/7 7/9.3 Si 1,6181229 TPOX 8/12 8/11 9/11 Si 2,0161290 vWA 17/17 17/17 16/17 Si 1,8450184 D16S539 9/13 11/13 11/11 Si 3,3333333 D7S820 10/12 9/12 9/12 Si 6,6666666 D13S317 8/14 8/9 8/9 Si 2,7173913 Se estudiaron 11 loci polimorficos aceptados internacionalmente como informativos para estudios de paternidad, encontrando que, en todos hubo coincidencia de alelos del hijo con el padre; por tanto: La probabilidad de paternidad, asumiendo un 50% de chance inicial, es de 99,99485%. XXXXXXXXXXXXX es 19.417 veces más probable que sea el padre de XXXXXXXXXXXXX a que lo sea cualquier otro hombre de la población tomado al azar. Con un 99,99485%, un hombre falsamente acusado sería excluido como el padre de XXXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXXXXX no puede ser excluido como el padre de XXXXXXXXXXXXX.

UNIVERSIDAD DE ORIENTE ESCUELA DE MEDICINA

CENTRO DE MISCROSCOPIA ELECTRONICA UNIDAD DE GENETICA

INFORME DE PATERNIDAD

05/06/2001 PADRE ALEGADO : MADRE : HIJA : LOCI ESTUDIADOS: LOCUS ALELOS

MADRE ALELOS HIJA ALELOS

PADRE COINCIDENCIA

PADRE/HIJA INDICE DE

PATERNIDAD

F13A01 4/5 4/7 3.2/4 No 0 F13B 9/10 9/10 8/9 Si FESFPS 11/11 10/11 11/11 No 0 LPL 10/12 12/12 10/10 No 0 HPRTB 13/14 13/13 13 No 0 CSF1PO 10/10 10/10 12/12 No 0 TH01 6/9 6/7 6/9 No 0 TPOX 11/11 8/11 8/8 Si vWA 15/18 15/17 17/17 Si D16S539 12/13 9/13 11/12 No 0 D7S820 10/10 10/10 10/11 Si 0 D13S317 8/11 8/9 9/12 Si Se estudiaron 12 loci polimórficos aceptados internacionalmente como informativos para estudios de paternidad, encontrando que en 7 loci no hubo coincidencia de alelos de la hija con el padre; por tanto: La probabilidad de paternidad realizada a la niñaXXXXXXXXXXX, junto con el Sr.XXXXXXXXXXXXX, asumiendo un 50% de chance inicial, es de 0%. XXXXXXXXXXXX es excluido como el padre de XXXXXXXXXXXXXX.

¨ Se realiza en forma pública en sólo 3 ciudades de Venezuela– Maracaibo, Caracas y Ciudad Bolívar.

¨ En Ciudad Bolívar se realiza desde finales del año 1999.¨ Se han realizado más de 200 pruebas de ADN.


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