第24章 病毒感染的

检查方法及防治原则

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病毒感染的实验室诊断

检测内容

查病毒

查特异性抗体

病毒颗粒

病毒抗原

病毒核酸

病毒酶类：如逆转录酶

电镜直接观察

光镜检查包涵体

分离培养

直接依据

间接依据

病 程 病毒成分 特异抗体

潜伏期 不常检出 无

前驱症状期 可能检出 无

发病时 多可检出 偶尔检出

急性期 可以检出 多可检出

恢复期 难以检出 可以检出

痊愈期 不能检出 可以检出

病程与病毒感染标志物的检测

第一节 病毒感染的检测方法4

一、标本的采集与送检

l用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本，应采集病人急性期标本。

l标本用“双抗”或两性霉素B处理

l根据不同病毒感染采取不同部位标本(如鼻咽分泌物、脑脊液、粪便或血液)。

l由于病毒在室温中很易被灭活，应在采集和运送标本中注意冷藏,尽快送检。

l血清学诊断采双份血清

二、病毒的分离与鉴定

一般程序：

标本无菌处理

动物接种

鸡胚培养

细胞培养

指标阳性

指标阴性

病毒鉴定

盲传2～3代

指标阴性

病毒阴性

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（一）病毒的分离培养：

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p细胞培养（cell culture）

p鸡胚接种（egg inoculation）

p动物接种（animal inoculation）

1.动物接种

应用：尚无敏感细胞的病毒培养

动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

优点：结果易观察，可建立动物模型

缺点：有饲养条件要求，费用高，动物

体内常带有潜伏病毒

2、鸡胚培养

优点：易管理，不带微生物，成本较低

缺点：操作程序复杂

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鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚

绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒

绒毛尿囊膜痘病毒特异性损伤

收获尿囊液

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3.细胞培养

单层细胞培养（monolayer cell culture）

分类

悬浮细胞培养（suspended cell culture）

原代细胞（primary cell）

细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）

传代细胞系（continuous cell line）

细胞培养(1)原代和次代细胞培养

组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 剪碎 培养基

(原代细胞)

单层细胞

(次代细胞)

传代培养

蛋白酶

特点：①对多种病毒敏感

②生长能力有限, 获取成本高

③可携带潜伏病毒

(1)原代和次代细胞培养

(2)二倍体细胞培养

体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。

特点：①对多种病毒敏感

②不带异种蛋白(人源性)

③不带病毒，无致瘤潜能

④可传50代左右

(3) 传代细胞培养

特点：①对多种病毒敏感性高

②繁殖能力高，传代时间长

③有致癌危险，不能用于疫苗生产

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在普通光学显微镜下观察受染细胞出现细胞病变作用（CPE）。特别是某些病毒感染出现的包涵体对诊断有一定意义。 ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒） ②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、 呼吸道合胞病毒等）；

包涵体：某些病毒感染的细胞内，在光镜下可见在浆内或核内出现嗜酸性或嗜碱性，大小、形态、位置不等的圆形或不规则团块结构。

病毒在培养细胞中增殖的指征：

(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)

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①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落

(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)

麻疹病毒

感染细胞

呼吸道合胞病

毒感染细胞

②形成多核巨细胞或称融合细胞

(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)

(2)红细胞吸附：

某些病毒感染的宿主细胞能吸附脊椎动物的红细胞而发

生血吸现象。

(3)病毒干扰作用：

某些病毒感染细胞后不出现CPE，但能干扰在其后感染

同一细胞的另一病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。

(4)细胞代谢的改变：

如：细胞培养液的pH改变

2.病毒血清学鉴定

鉴定病毒种、型、亚型

l 血凝抑制试验—正粘病毒型与亚型鉴定

病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）

病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集（血凝抑制试验）

（二）病毒的鉴定1.病毒的形态学鉴定

3.病毒分子生物学鉴定

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PCR cycler

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（三）病毒数量与感染性的测定

3.空斑形成试验蚀斑测定 plaque forming test

1. 50%组织细胞感染量-TCID50（50% tissue culture

infective dose）：在细胞培养板孔或试管内引起半数细胞病

变（CPE）的病毒量

2. 红细胞凝集试验（血凝试验） red cell agglutination test

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ü空斑试验：在细胞培养表面覆盖一层半固体物质使

细胞病变形成空斑。

三、病毒感染的诊断（血清学部分）

1、中和试验：流行病学调查；

中和抗体＋病毒 失去感染性

2、血凝抑制试验：诊断（IFV、乙脑V）、鉴定、

流行病学调查；

3、 特异性IgM抗体检测。

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1. 中和试验（neutralizing test）

病毒＋中和抗体 病毒失去感染性

特点：特异性高，抗体维持时间长

应用：人群免疫情况的调查，临床诊断少用

2.血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）—

正粘病毒型与亚型鉴定

病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）

病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集

（血凝抑制试验）

3、特异性抗体检测

1、单份血清检测：IgM

IgG

2、双份血清检测：

IgG 恢复期/早期 4:1

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ELISA用酶标仪

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第二节 病毒感染的特异性预防

对病毒感染的治疗药物效果远不如抗生素等对

细菌感染的疗效，因而疫苗的使用在病毒感染预

防中显得尤为重要。有灭活疫苗，减毒活疫苗，

亚单位疫苗，基因工程疫苗(如今被广泛应用的乙

型肝炎重组疫苗 )，核酸疫苗 (包括DNA疫苗和

RNA疫苗)，是由载体(如质粒DNA)和编码病原体

某种抗原的cDNA或mRNA组成，较多的是DNA疫

苗。

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ü传统疫苗

1.灭活疫苗

2.减毒活疫苗

Edward Jenner vaccinating (inoculating) James Phipps with cowpox material.

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现代疫苗

1.基因工程的疫苗（rHBsAg)

2.核酸疫苗

3.其他类型的疫苗： 亚单位疫苗

重组载体疫苗

联合多价疫苗等

人工主动免疫ü灭活活疫苗：流行性乙型脑炎、流感、狂犬病疫苗等。

ü减毒活疫苗：脊灰、MMR(麻疹、腮腺炎和风疹）

ü亚单位疫苗：用化学制剂裂解病毒除去核酸和宿主蛋白，

保留保护型抗原成分的疫苗，如H3流感疫苗和HA疫苗。

ü新型活疫苗

（1）基因重组疫苗：流感、轮状病毒疫苗；

（2）基因缺失活疫苗：定向缺失某区段仍然保留免疫原性而

丧失毒性。

表25-1 我国常用的病毒疫苗

疫苗名称 疫苗种类(培养细胞种类) 毒株来源

脊髓灰质炎疫苗 减毒活疫苗(人二倍体，Vero细胞) 美国Sabin Ⅰ，Ⅱ型 中Ⅱ17，中Ⅱ2株 麻疹疫苗 减毒活疫苗(鸡胚细胞 ) 沪191，长47 株

流行性腮腺炎疫苗 减毒活疫苗(鸡胚细胞) 上海S79株

风疹疫苗 减毒活疫苗(人二倍体细胞) 北京BRDⅡ体

甲型肝炎疫苗 减毒活疫苗(人二倍体细胞) 杭州H2株，上海-长春L-A-1株

人用狂犬病疫苗 灭活疫苗(地鼠肾细胞) 北京aG株

乙型脑炎疫苗 灭活疫苗(地鼠肾细胞) 北京P3株

森林脑炎疫苗 灭活疫苗(地鼠肾细胞) 森长株 乙型肝炎疫苗 基因工程疫苗(酵母菌表达) 由美国Merck公司引进

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默克公司制备的人乳头瘤病毒（HPV）疫苗 乙型肝炎病毒疫苗

人工被动免疫

方法有人血清丙种球蛋白、胎盘球蛋白、

转移因子等。是一种紧急预防措施。如丙种球

蛋白对传染性肝炎、麻疹、脊髓灰质炎等有效。

人高效价抗HBsAg抗体有一定效果。

第二节 病毒感染的治疗

抗病毒药物或制剂设计原则/基本策略可

分别从病毒感染细胞的吸附、穿入、脱衣壳，

病毒核酸复制及装配与释放等不同环节设计不

同药物，对抑制病毒基因复制、转录及转译的

药物和制剂是开发抗病毒药物的热点。

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一、抗病毒治疗1. 抗病毒药物或制剂

核苷类药物 阻抑子代病毒结构基因的合成与表达。

病毒蛋白酶的抑制剂 阻止大分子病毒蛋白的降解。

其他：IFN、TNF、IL-2、中草药等抑制病毒复制。 抗病毒基因治疗：asON、ribozyme、siRNA 策略：作用于病毒复制周期的不同环节

2.免疫制剂

ribozyme核酶asON寡反义核苷酸

A) HIV attach to a CD4 receptor.

B) A soluble synthetic version of the receptor can prevent attachment of the virus.

吸附 拟受体制剂

拟配体制剂

中和抗体穿入

金刚烷胺

脱壳

生物合成

装配、释放

核苷类似物

干扰素

反义技术等

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1、核苷类药物：

是最早用于抗病毒治疗的药物。如用于眼疱疹

病毒感染的碘苷(IDU，商品名疱疹净)；无环鸟苷

( a c y c l o v i r ，商品名阿昔洛韦 ) 及丙氧鸟苷

(ganciclovir，DHPG)，是新一代的核苷类药物。另

一种核苷类药物(3TC)， AZT（叠氮胸苷）在临床

应用中也正成功地抑制HIV的复制。

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核苷类似物

ü无环鸟苷（ACV）及丙氧鸟苷(ganciclovir，DHPG) ：能选择作用于疱疹病毒，IFN可协同作

用

ü阿糖腺苷（Ara-A）：疱疹性脑炎，VZV感染

üAZT（叠氮胸苷）：通过阻断前病毒DNA的合成

而抑制HIV的复制，有效AIDs的发病率和致死率。

新问题；耐药毒株出现。

2、病毒蛋白酶的抑制物：

如HIV中已设计出针对逆转录酶及蛋白酶活性位点

的抑制剂，经细胞中核实确有抑制病毒蛋白酶的作用后

，已开发出药品，并已获准进行临床试验。其商品名称

分别为茚地那韦（indinavir）及利托那韦（ritonavir）。华裔美国科学家何大一用3TC加蛋白酶抑制剂联合治

疗HIV，被称为“鸡尾酒”治疗方案，可较长期抑制病

毒复制，受到普遍重视。

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奥司他韦（达菲）

ü 一种强效的高选择性

的流感病毒NA抑制

剂（NAIs），它主要

通过干扰病毒从被感

染的宿主细胞中释放

，从而减少甲型或乙

型流感病毒的传播。

3、其他：

干扰素或干扰素诱生剂以及细胞因子IL-12，

TNF和一批中草药等天然药物如黄芪、板蓝根、大

青叶等具有抑制病毒复制作用。

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金刚烷胺amantadineü阻止病毒脱壳

4、抗病毒基因治疗：

根据病毒基因组设计部分能特异地与其互补的寡核

苷酸(又称反义RNA或asON)，及反义寡核脱氧核酸

(asODN)，反义寡核苷酸(asON)、核酶(ribozyme)等不

同类型的各种制剂，可阻抑病毒DNA的复制与RNA的

转录，从而阻抑蛋白质的合成。

5、免疫制剂：

现有病毒的特异性免疫球蛋白，单克隆抗体、治疗

性疫苗(如HSV、HBV、HIV、狂犬病病毒疫苗等)。

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