ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS

Jacques

Jenny

Jacques

Jenny

Jacques

Jenny

Jacques

Jenny

Mag…………………………. hematoxylin

Citoplazma “kontraszt” festése: Orange G,/ EA.

Orange G

Savanyu protein festék, mely egyéb festékekkel competitiv reakciót ad a cytoplazmában

Kis méret ű, könnyen festi a vvt-ket, vastag kenetrészeket

Savanyításra került a fest ősorba, eosinnal van csak versenyben, de csupán pH 6,5 – 3,0 körül. ( Optimálisan pH1-nél fest, pH 3 körül már csak fele intenzitással. )

EA: Eosin, Fényzöld, ( PTA )

Eosin:Nagyobb mint az Orange G, kisebb mint a fényzöld (Light Green) .... mindkett ővel „vetélkedik”

Magvacska vörös színe, amit a Hematoxylin fém komponense er ősít!

Light Green ( Fényzöld ) :amphoterikus festék, festési csúcsa pH 2 körül van.intermedier, metaplastikus ill. endocervikális sejteket festi

PTA

A kompetitiv festés eredménye:

Orange G és Eosin:• elszarusodó sejtek színe: narancs – sárga

Fényzöld és Eosin:

• ” ál - „ versenyben a monomer forma: keveredés nincsen , a szín vagy vörös, vagy zöld ( sakktábla minta egy sejten belül szabálytalan elszarusodás mellett, pl. HPV infekcióban )

• Valós kompetició az intermedier sejtekben van

• Szélek zölden fest ődnek ha vastag a kenet ( nagy molekula ), fixálatla n sejtek Eosin fest ődése kifejezett ( fényzöld helyett ).

PTA szerepe:

• nem láthatóan köt ődik az eosinnal versenyezve a cytoplazma fehérjékhez. Ha ez a hatás er ős, a cytoplazma kék lesz ( nem látható PTA + hematoxy lin ! ).

Vastag centrum: vörös

Vvt.-k vörös színe

A citoplazma kék színeIntermedier sejtek

zöld színe

A CITOPLAZMA KÉK SZÍNE

INTERMEDIER SEJTEK ZÖLD SZÍNE

TRANSPARENCIA

(Orange-G nélkül)

NARANCS SZÍN: PARAKERATOZIS

NARANCS SZÍN: LAPHÁMCC. NYAKI ÁTTÉTE

MIKROSZKÓP

Mechanikai alkotókl. állvány

2. tárgyasztal

3. tubus (cső)

Az állítószerkezet részei

4. makrométer csavar

5. mikrométer csavar

Az optikai rész alkotóiA megvilágító rendszer részei

6. fényforrás

7. diafragma (fényrekesz)

8. kondenzor

9. színszűrő

Az optikai nagyító rendszer részei

A. okulár

(B. objektívrevolver)

C. objektív (tárgylencse)

STATISZTIKAI ÉRTÉKELÉS ALAPELEMEI

A = VALÓDI POZITIV ( VP )

B = ál - POZITIV ( áP )

C = ál - Negativ ( áN )D = VALÓDI Negativ ( VN )

+ a b- c d

TESZT VÉGEREDMÉNY+ -

Szenzitivitás:

VP

VP+aN (összes pozitív)

Mennyit ismerek fel betegségnekazok

közül, akik valóban betegek

Specificitás:

VN

VN+aP (összes negatív)

Mennyit ismerek fel egészségesnekazok közül, akik valóban

egészségesek

X 100

Pozitiv prediktiv érték:

VP

VP+aP

Mennyire helyesen itéltem meg előre

betegségnekazt, ami valóban betegség

Negatív prediktiv érték :

VN

VN+aN

X 100Mennyire helyesen itéltem meg előre

betegség hiányának azt, ami valóban nem

betegség

SEJT TIPUSOK

V v t

Leukocita

lymphocita

plazmasejt

histiocita

Érett felszines laphámsejt

Parabazális sejt

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

SEJT TIPUSOK

POST PARTUM KENET

BAKTÉRIUMOK

• egysejt űek

• karyoplazma (membrán nélkül) és citoplazma (membránnal); tokjuk is lehet

• táplálékuk és túlélésük környezetük függvénye

PATOGÉN FAKULTATIV PATOGÉN

mindig betegséget okoz meghatározott

körülmények

között okoz betegséget

mennyisége sok; gazdaszervezet gyenge; környezet kedvez ővé válik; védelmet nyújtó hámréteg sérül; stb…..

DÖDERLEIN FLÓRA

1. intermedier sejtek membránját feloldják - citolizis

2. a citoplazmában található glykogénb ől tejsavat produkálnak ( hüvely pH 3,5-)

3. ugyanezen glikogén a f ő táplálékuk

4. fenti folyamat biztosítja az optimális savi környezetet

ectocervixendocervix

GYAKORI:

• ciklus második fele

• terhesség alatt

• cukorbetegségben

• progeszteron dominanciájú fogamzásgátlás esetén

• menopauzában

Döderlein flóra jelenlétében egyéb kórokozók nem viselkednek patogén módon;

Döderlein hiányában fakultatív kórokozók patogen módon viselkedhetnek

( egyéb kórokozók által okozott fert őzésben Döderlein flóra nincsen jelen )

Feltüntetése a leleten nem kötelez ő, de….

JÓ, HA ÉSZREVESSZÜK, MIVEL Trichomonas gyakori Leptotrix mellett!

LEPTOTHRYX ( nem patogén )

KÓROS BAKTÉRIUM FLÓRA

nem Döderlein

• coccusok és pálcák

• Gardnerella ( hemophylus ) vaginalis

• „vörös” sejtek a háttérben

• „irritált” sejtkép

• külső fertőzés következménye

Clue ( kulcs) sejt

ACTINOMYCES ÉS IUD

ACTINOMYCES:

• baktérium, fonalszerű csoportokat alkot

• gyakori IUD mellett

• Gram pozitiv

• kismedencei szövődménye lehet

Ágyu-golyó

TRICHOMONAS VAGINALIS

OSTOROS PARAZITA (FLAGELLATA )

Jellemz ői:

• mérete ??

• formája !!

• festődése??

• elhelyezkedése ??

• magja !!!!!

• indirekt jelek a kenetben

Indirekt jelek a kenetben:

• „ cannonballs”

• orangofilia

• autolizis a citoplazmában

• mag nélküli laphámsejtek

• kettős magvú alakok

• mag enyhén nagyobb

• hyperkromatikus mag

• mag körül udvar

• csupasz magvak

• Gardnerella vagy/és Leptorix kisér ője

Differeciáldiagnosztika:

• enyhe dysplázia

• HPV

CANDIDA GOMBA

Megjelenése a hüvelyflóra változásához kötött

Ha csak fonalak: Geotrichum

Ha csak ( és nagy ) spórák: Torulopsis

Indirekt jelek a kenetben:

• mag nagyobb, de nem hyperkrom, kromatin szabályos

• hyperkeratosis, enyhe

• neutrophil leukocyták „lysise” ( elkülönitend ő Trichomonastól! )

FÉREGPETE

• Gyermek vagy id ős korban

• leggyakrabban Enterobius vermiculáris

EGYÉB

• bőrgomba

• szennyezés, ami kórokozót utánoz

MŰTERMÉKEK, TECHNIKAI HIBÁK, „IDEGEN” ANYAGOK

• alternária

• talkum

• fixálási m űtermék

• ondó / spermium ( post coitális kenet )

• haematoidin (?) radiális kristály (?)

• „ corn flakes „

LSIL és HSIL

Normáleuplázia

Daganatosneoplázia

Regresszivretroplázia

Progresszivproplázia

J.K. FROST/JENNY

Kis sejtes, CIS

nagy sejtes, laphámcc

A HPV fertőzés „klasszikus” citológiai jelei

•Koilocyta

•Dyskaryosis

A HPV fertőzés „nem klasszikus”

citológiai jelei

• két- vagy többmagvúság

• orsó alakú sejtek és magok

• sejtmag - degenerációk

• többmagvú óriássejtek

• a citoszkeletális filamentumok kondenzációja

• keratohialin- és keratohialin - szerű granulumok megjelenése

HPV “cytomorphological markers”

Bi or multinucleation Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987

Karyorrhexis Naib & Masukawa, 1961; Takahashi, 1982

Cleared cytoplasm Schneider et al., 1987 Spindle cells Schneider et al., 1987

Multinucleated giant cells De Borges et al., 1989; Luzzatto et al.,1990

Condylomatous parabasal cells Meisels et al., 1988

Koilocytosis * Koss & Durfee, 1956; Meisels & Fortin, 1976Mild koilocytosis Schneider et al., 1987

Condensation of filaments Schneider et al., 1987

Dyskeratocytes* Meisels & Fortin, 1976; Purola & Savia, 1977Mild dyskeratosis Schneider et al., 1987

Perinuclear halos Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al.,1987

Nuclear hyperchromatism Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987

Keratohyalin and keratohyalin- like granules Schneider et al., 1987

Smudge chromatin Meisels et al., 1988

Spindle nuclei Shroyer et al., 1990

CIN. I. ( hpv )

DIAGNOSZTIKUS KÖVETELMÉNY

SEJTMAG ELTÉRÉS és

CITOPLAZMA ELTÉRÉS ( pl.perifériás megvastagodás, elszarusodás zavarai, stb.)

CIN 1. és HPV jelek nem mindig megkülönböztethetőek

CIN. I.

HSIL/CIN2

• sejt mérete kisebb mint a CIN1, nagyobb mint CIN3 ( kb. parabasalis, esetleg kisebb intermedier sejt-méret)

• mag méret nagyobb, minimálisan különböző

• kromatin: rögös, „aktív” sejtekéhez hasonló

• citoplazma mutathat érési jeleket, ez nem felel meg a mag méretének és érettségének

• sejtek egyesével vagy csoportokban, háttér tiszta vagy csupán lobos

• magvacska nincsen vagy nem jellemző

• a jellegzetes HPV ( koilocitotikus ) atypia már ritkább mint CIN1 esetén

HSIL/CIN2

HSIL/CIN3-CIS

Tipusai:

• elszarusodó – van citoplazma differenciáció, fiber/ebihal sejtek ( Papanicolaou inv. rákban írta le!)

• kp. differenciált nagysejtes

• kis sejtes anaplasticus ( „harmadik sejt” tipus, GRAHAM )

HSIL/CIN3

HSIL/CIN3-CIS

CC. IN SITU

DYSPLASIA I.

DYSPLASIA III.

DYSPLASIA II.

CIN. I.

CIN. II.

CIN III.

LOW GRADE SIL

HIGH GRADE SIL

HPV + CIN I.

CIN II. + CIN III. + CC. IN SITU

R,M, Richart, 1967W. Schauenstein, 1908, GN Papanicolaou, 1942 TBS, 1988, 1991, 2001

CIN léziók természetes viselkedése( K. Syrjänen et al. EUROGYN-WHO 1997.)

CIN I. CIN II.

Regrediál 57 % 43 % Perzisztál 32 % 35 % CIN II.-III. 11 % 22 % Invaziv cc. 1 % 5 %

HPV fertőzés és rák kialakulásának időbeli lefolyása

15 év 30 év 45 év

HPV

PrecancerCancer

életkor

Rat

e

Lifetime incidence of genital HPV infection >80% in U.S.

AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz

HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik

Virus termelés kezdődik

Capsid protein képzése

HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA(LEEGYSZERÜSÍTVE)

virus exit

Sejt elpusztul

LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!

viral DNA

capsid protein virus

Virus DNS replikációja

malignus sejtek

Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

Sejtmag: chromosomalisDNS

+Sejt érés

HPV SZŰRÉS INTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓ

Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának részévé válikrészévé válikrészévé válikrészévé válik

Humán Papillomavirus Testing for Triage of Women With Cytologic Evidence of Low-Grade Squamous Intraepithelial Lesions: Baseline Data From a Randomized Trial. The ASCUS/LSIL Study (ALTS) Group, Journal of the National Cancer Institute, Mar 1, 2000: 92 (5):.397-402.

642 LSIL diagnozis nyomán az esetek 82,8%-ban HG HPV jelen van.( 30 éves kor felett ez csökken)

LSIL esetében a HPV meghatározás a követés módjának megválasztásában nem informatív

INTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓVirus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának részévé válikrészévé válikrészévé válikrészévé válik

AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz

HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik

Virus termelés kezdődik

Capsid protein képzése

HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA(LEEGYSZERÜSÍTVE)

virus exit

Sejt elpusztul

LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!

viral DNA

capsid protein virus

Virus DNS replikációja

malignus sejtek

Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

Sejtmag: chromosomalisDNS

+Sejt érés

HPV SZŰRÉS

CITOLOGIA

INTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓVirus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának részévé válikrészévé válikrészévé válikrészévé válik

AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz

HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik

Virus termelés kezdődik

Capsid protein képzése

HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA(LEEGYSZERÜSÍTVE)

virus exit

Sejt elpusztul

LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!

viral DNA

capsid protein virus

Virus DNS replikációja

malignus sejtek

Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

Sejtmag: chromosomalisDNS

+Sejt érés

HPV SZŰRÉS

CITOLOGIA

L 3 antitest

0

10

20

30

40

50

60

70

perzisztál 10 15 5 9

remissióba kerül 22 23 1 2

CIN1 1 0 6 4

CIN2 2 3 4 7

rosszabb mint CIN2 7 9 20 61

LSIL L1+

HSIL L1+

LSIL L1-HSIL L1-

H. Griesser, H. Sander, R. Hilfrich

Schmidt, D., Bergeron, C., Denton, KJ., Ridder, R., European CINtec Cytology Study Group

p16/ki-67 dual-stain cytology in the triage of ASCUS and LSIL papanicolaou cytology: results from the European equivocal or mildly abnormal Papanicolaou cytology study.Cancer Cytopathol.2011 Jun 25;119(3):158-66

A p16/Ki-67 dual-stain cytologia

senzitivitása

CIN2-nél súlyosabb léziók felismerésére 92.2%(ASCUS) and 94.2% (LSIL),

specificitása

80.6% (ASCUS) and 68.0% (LSIL) esetén.

Az eredmények nem különböznek 30 éves kor

alatt vagy felett.

HPV-E7....Rb:

E2F aktiválja mind osztódást (Ki 67) mind p16ink (cyclin dependens kináz, Chr9p21) aktivitását

p16ink/Ki 67 dual festés!

AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz

HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik

Virus termelés kezdődik

Capsid protein képzése

HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA((((LEEGYSZERÜSÍTVELEEGYSZERÜSÍTVELEEGYSZERÜSÍTVELEEGYSZERÜSÍTVE))))

virus exit

Sejt elpusztul

LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!

viral DNA

capsid protein virus

Virus DNS replikációja

malignus sejtek

Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein

Sejtmag: chromosomalisDNS

+Sejt érés

HPV SZŰRÉS

CITOLOGIAINTEGRÁCIÓVirus DNS gazdasejt genetikai állományának részévé válik

Immunomarkers in GynecologicCytology: The Searchfor the Ideal‘Biomolecular PapanicolaouTest’Álvaro P. Pinto a Martin Degen b Luisa Lina Villa c Edmund S. Cibas

Acta Cytologica 2012;56:109–121

„A cervico/vaginális cytologia a laphám rák és megelőző állapotainak szűrését szolgáló módszer. Nem eléggé pontos az endometriális elváltozások felismerésében, ezért endometrialis elváltozások és azok okainak felderítésére a használata nem javasolt ”

( BETHESDA 2001 )

Mdkft/FFK 2003

III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)

V. KIEGÉSZÍT Ő TESZT

módszer rövid leírása és az eredmény közlése olyan módon, hogy az a klinikus számára könnyen érthető legyen

( BETHESDA 2001 )

?

III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)

• Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy

• Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result(specify ‘squamous’ or ‘glandular’ as appropriate)

• Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cellsin a woman > 40 years of age)

III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)

• Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy

• Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result(specify ‘squamous’ or ‘glandular’ as appropriate)

• Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cellsin a woman > 40 years of age)

III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)

• Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy

• Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result(specify ‘squamous’ or ‘glandular’ as appropriate)

• Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cellsin a woman > 40 years of age)

Mdkft/FFK 2003

Mdkft/FFK 2003

FEJLÉC,LABOR ADATAI

Terminologia és minőségbiztosítás (Bethesda……)

ÉRTÉKELHET ŐSÉG

SBLB: megfelelő, de értékelhetősége korlátozott azáltal, hogy: ……..

DE:

dysplaticus sejt vagy daganatsejt jelenlétében a kenet nem lehet ÉRTÉKELHETETLEN

TERMINOLOGIA ( Hawaii, 1997 )TERMINOLOGIA ( Hawaii, 1997 )U. Schenk, A. Herbert, D. Solomon, NS., A,,a. RJ Collins, SK Gupta, M. Jimenez-Ayala, J. Kobilkova, M. Nielsen, HZ. Suprun

Mdkft/FFK 2003

( BETHESDA 2001 )

Conventional Paps have less random sampling than liquid-Paps, so a slightly higher estimate (8,000-12,000) is suggested

Preliminary studies show that reference images methods are quickly learned and have better interobserver reproducibility than the 10% cellularity criterion.

Set a minimum limit of5,000well-

visualized/preserved squamous cells for LBP

( BETHESDA 2001 )

CONTROL:

REFERENCE IMAGES

FFK/MD-2001

Legalább 10 jól megítélhet ő strukturájú endocervikális vagy

laphám metaplaziát mutató sejt kell ahhoz, hogy a transformációs zona

jelenléte bizonyított legyen.Degenerált sejtek nyákban nem

értékelendők.

( BETHESDA 2001 )

SQUAMOUS CELL

1.Atypical squamous cells - of undetermined significance(ASC(ASC--US)US)- cannot exclude HSIL (ASC(ASC--H)H)

It is anticipated that ASC-H will comprise5%-10% or less of total ASC.

( BETHESDA 2001 )

2. Low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL)- HPV/mild dysplasia/CIN 1

3. High grade squamous intraepithelial lesion (HSIL)- moderate and severe dysplasia, CIN 2 and CIN 3/

CIS- with features suspicious for invasionwith features suspicious for invasion((if invasionif invasion

is is suspectedsuspected))

4. Squamous cell carcinoma

Mdkft/FFK 2003

ASCUS/AGUS nem lehet több mint: 3 -5 %

ASCUS/AGUS : LSIL/HSIL/CC = 3 - 4 : 1

„Atypusos mirigyhámsejtek” megjelölés aránya egy szokványos cytologiai laboratoriumban 1 % alatt kell, hogy legyen”

( előfordulása az irodalomban 0,3 - 0,5 % )

?? ? ??