ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS · 2014-04-09 · HSIL/CIN2 • sejt mérete kisebb mint a CIN1,...
Transcript of ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS · 2014-04-09 · HSIL/CIN2 • sejt mérete kisebb mint a CIN1,...
ANATOMIA, KENETVÉTEL, FESTÉS
Jacques
Jenny
Jacques
Jenny
Jacques
Jenny
Jacques
Jenny
Mag…………………………. hematoxylin
Citoplazma “kontraszt” festése: Orange G,/ EA.
Orange G
Savanyu protein festék, mely egyéb festékekkel competitiv reakciót ad a cytoplazmában
Kis méret ű, könnyen festi a vvt-ket, vastag kenetrészeket
Savanyításra került a fest ősorba, eosinnal van csak versenyben, de csupán pH 6,5 – 3,0 körül. ( Optimálisan pH1-nél fest, pH 3 körül már csak fele intenzitással. )
EA: Eosin, Fényzöld, ( PTA )
Eosin:Nagyobb mint az Orange G, kisebb mint a fényzöld (Light Green) .... mindkett ővel „vetélkedik”
Magvacska vörös színe, amit a Hematoxylin fém komponense er ősít!
Light Green ( Fényzöld ) :amphoterikus festék, festési csúcsa pH 2 körül van.intermedier, metaplastikus ill. endocervikális sejteket festi
PTA
A kompetitiv festés eredménye:
Orange G és Eosin:• elszarusodó sejtek színe: narancs – sárga
Fényzöld és Eosin:
• ” ál - „ versenyben a monomer forma: keveredés nincsen , a szín vagy vörös, vagy zöld ( sakktábla minta egy sejten belül szabálytalan elszarusodás mellett, pl. HPV infekcióban )
• Valós kompetició az intermedier sejtekben van
• Szélek zölden fest ődnek ha vastag a kenet ( nagy molekula ), fixálatla n sejtek Eosin fest ődése kifejezett ( fényzöld helyett ).
PTA szerepe:
• nem láthatóan köt ődik az eosinnal versenyezve a cytoplazma fehérjékhez. Ha ez a hatás er ős, a cytoplazma kék lesz ( nem látható PTA + hematoxy lin ! ).
Vastag centrum: vörös
Vvt.-k vörös színe
A citoplazma kék színeIntermedier sejtek
zöld színe
A CITOPLAZMA KÉK SZÍNE
INTERMEDIER SEJTEK ZÖLD SZÍNE
TRANSPARENCIA
(Orange-G nélkül)
NARANCS SZÍN: PARAKERATOZIS
NARANCS SZÍN: LAPHÁMCC. NYAKI ÁTTÉTE
MIKROSZKÓP
Mechanikai alkotókl. állvány
2. tárgyasztal
3. tubus (cső)
Az állítószerkezet részei
4. makrométer csavar
5. mikrométer csavar
Az optikai rész alkotóiA megvilágító rendszer részei
6. fényforrás
7. diafragma (fényrekesz)
8. kondenzor
9. színszűrő
Az optikai nagyító rendszer részei
A. okulár
(B. objektívrevolver)
C. objektív (tárgylencse)
STATISZTIKAI ÉRTÉKELÉS ALAPELEMEI
A = VALÓDI POZITIV ( VP )
B = ál - POZITIV ( áP )
C = ál - Negativ ( áN )D = VALÓDI Negativ ( VN )
+ a b- c d
TESZT VÉGEREDMÉNY+ -
Szenzitivitás:
VP
VP+aN (összes pozitív)
Mennyit ismerek fel betegségnekazok
közül, akik valóban betegek
Specificitás:
VN
VN+aP (összes negatív)
Mennyit ismerek fel egészségesnekazok közül, akik valóban
egészségesek
X 100
Pozitiv prediktiv érték:
VP
VP+aP
Mennyire helyesen itéltem meg előre
betegségnekazt, ami valóban betegség
Negatív prediktiv érték :
VN
VN+aN
X 100Mennyire helyesen itéltem meg előre
betegség hiányának azt, ami valóban nem
betegség
SEJT TIPUSOK
V v t
Leukocita
lymphocita
plazmasejt
histiocita
Érett felszines laphámsejt
Parabazális sejt
SEJT TIPUSOK
SEJT TIPUSOK
SEJT TIPUSOK
SEJT TIPUSOK
SEJT TIPUSOK
SEJT TIPUSOK
POST PARTUM KENET
BAKTÉRIUMOK
• egysejt űek
• karyoplazma (membrán nélkül) és citoplazma (membránnal); tokjuk is lehet
• táplálékuk és túlélésük környezetük függvénye
PATOGÉN FAKULTATIV PATOGÉN
mindig betegséget okoz meghatározott
körülmények
között okoz betegséget
mennyisége sok; gazdaszervezet gyenge; környezet kedvez ővé válik; védelmet nyújtó hámréteg sérül; stb…..
DÖDERLEIN FLÓRA
1. intermedier sejtek membránját feloldják - citolizis
2. a citoplazmában található glykogénb ől tejsavat produkálnak ( hüvely pH 3,5-)
3. ugyanezen glikogén a f ő táplálékuk
4. fenti folyamat biztosítja az optimális savi környezetet
ectocervixendocervix
GYAKORI:
• ciklus második fele
• terhesség alatt
• cukorbetegségben
• progeszteron dominanciájú fogamzásgátlás esetén
• menopauzában
Döderlein flóra jelenlétében egyéb kórokozók nem viselkednek patogén módon;
Döderlein hiányában fakultatív kórokozók patogen módon viselkedhetnek
( egyéb kórokozók által okozott fert őzésben Döderlein flóra nincsen jelen )
Feltüntetése a leleten nem kötelez ő, de….
JÓ, HA ÉSZREVESSZÜK, MIVEL Trichomonas gyakori Leptotrix mellett!
LEPTOTHRYX ( nem patogén )
KÓROS BAKTÉRIUM FLÓRA
nem Döderlein
• coccusok és pálcák
• Gardnerella ( hemophylus ) vaginalis
• „vörös” sejtek a háttérben
• „irritált” sejtkép
• külső fertőzés következménye
Clue ( kulcs) sejt
ACTINOMYCES ÉS IUD
ACTINOMYCES:
• baktérium, fonalszerű csoportokat alkot
• gyakori IUD mellett
• Gram pozitiv
• kismedencei szövődménye lehet
Ágyu-golyó
TRICHOMONAS VAGINALIS
OSTOROS PARAZITA (FLAGELLATA )
Jellemz ői:
• mérete ??
• formája !!
• festődése??
• elhelyezkedése ??
• magja !!!!!
• indirekt jelek a kenetben
Indirekt jelek a kenetben:
• „ cannonballs”
• orangofilia
• autolizis a citoplazmában
• mag nélküli laphámsejtek
• kettős magvú alakok
• mag enyhén nagyobb
• hyperkromatikus mag
• mag körül udvar
• csupasz magvak
• Gardnerella vagy/és Leptorix kisér ője
Differeciáldiagnosztika:
• enyhe dysplázia
• HPV
CANDIDA GOMBA
Megjelenése a hüvelyflóra változásához kötött
Ha csak fonalak: Geotrichum
Ha csak ( és nagy ) spórák: Torulopsis
Indirekt jelek a kenetben:
• mag nagyobb, de nem hyperkrom, kromatin szabályos
• hyperkeratosis, enyhe
• neutrophil leukocyták „lysise” ( elkülönitend ő Trichomonastól! )
FÉREGPETE
• Gyermek vagy id ős korban
• leggyakrabban Enterobius vermiculáris
EGYÉB
• bőrgomba
• szennyezés, ami kórokozót utánoz
MŰTERMÉKEK, TECHNIKAI HIBÁK, „IDEGEN” ANYAGOK
• alternária
• talkum
• fixálási m űtermék
• ondó / spermium ( post coitális kenet )
• haematoidin (?) radiális kristály (?)
• „ corn flakes „
LSIL és HSIL
Normáleuplázia
Daganatosneoplázia
Regresszivretroplázia
Progresszivproplázia
J.K. FROST/JENNY
Kis sejtes, CIS
nagy sejtes, laphámcc
A HPV fertőzés „klasszikus” citológiai jelei
•Koilocyta
•Dyskaryosis
A HPV fertőzés „nem klasszikus”
citológiai jelei
• két- vagy többmagvúság
• orsó alakú sejtek és magok
• sejtmag - degenerációk
• többmagvú óriássejtek
• a citoszkeletális filamentumok kondenzációja
• keratohialin- és keratohialin - szerű granulumok megjelenése
HPV “cytomorphological markers”
Bi or multinucleation Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987
Karyorrhexis Naib & Masukawa, 1961; Takahashi, 1982
Cleared cytoplasm Schneider et al., 1987 Spindle cells Schneider et al., 1987
Multinucleated giant cells De Borges et al., 1989; Luzzatto et al.,1990
Condylomatous parabasal cells Meisels et al., 1988
Koilocytosis * Koss & Durfee, 1956; Meisels & Fortin, 1976Mild koilocytosis Schneider et al., 1987
Condensation of filaments Schneider et al., 1987
Dyskeratocytes* Meisels & Fortin, 1976; Purola & Savia, 1977Mild dyskeratosis Schneider et al., 1987
Perinuclear halos Naib & Masukawa, 1961; Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al.,1987
Nuclear hyperchromatism Meisels & Fortin, 1976; Schneider et al., 1987
Keratohyalin and keratohyalin- like granules Schneider et al., 1987
Smudge chromatin Meisels et al., 1988
Spindle nuclei Shroyer et al., 1990
CIN. I. ( hpv )
DIAGNOSZTIKUS KÖVETELMÉNY
SEJTMAG ELTÉRÉS és
CITOPLAZMA ELTÉRÉS ( pl.perifériás megvastagodás, elszarusodás zavarai, stb.)
CIN 1. és HPV jelek nem mindig megkülönböztethetőek
CIN. I.
HSIL/CIN2
• sejt mérete kisebb mint a CIN1, nagyobb mint CIN3 ( kb. parabasalis, esetleg kisebb intermedier sejt-méret)
• mag méret nagyobb, minimálisan különböző
• kromatin: rögös, „aktív” sejtekéhez hasonló
• citoplazma mutathat érési jeleket, ez nem felel meg a mag méretének és érettségének
• sejtek egyesével vagy csoportokban, háttér tiszta vagy csupán lobos
• magvacska nincsen vagy nem jellemző
• a jellegzetes HPV ( koilocitotikus ) atypia már ritkább mint CIN1 esetén
HSIL/CIN2
HSIL/CIN3-CIS
Tipusai:
• elszarusodó – van citoplazma differenciáció, fiber/ebihal sejtek ( Papanicolaou inv. rákban írta le!)
• kp. differenciált nagysejtes
• kis sejtes anaplasticus ( „harmadik sejt” tipus, GRAHAM )
HSIL/CIN3
HSIL/CIN3-CIS
CC. IN SITU
DYSPLASIA I.
DYSPLASIA III.
DYSPLASIA II.
CIN. I.
CIN. II.
CIN III.
LOW GRADE SIL
HIGH GRADE SIL
HPV + CIN I.
CIN II. + CIN III. + CC. IN SITU
R,M, Richart, 1967W. Schauenstein, 1908, GN Papanicolaou, 1942 TBS, 1988, 1991, 2001
CIN léziók természetes viselkedése( K. Syrjänen et al. EUROGYN-WHO 1997.)
CIN I. CIN II.
Regrediál 57 % 43 % Perzisztál 32 % 35 % CIN II.-III. 11 % 22 % Invaziv cc. 1 % 5 %
HPV fertőzés és rák kialakulásának időbeli lefolyása
15 év 30 év 45 év
HPV
PrecancerCancer
életkor
Rat
e
Lifetime incidence of genital HPV infection >80% in U.S.
AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz
HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik
Virus termelés kezdődik
Capsid protein képzése
HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA(LEEGYSZERÜSÍTVE)
virus exit
Sejt elpusztul
LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!
viral DNA
capsid protein virus
Virus DNS replikációja
malignus sejtek
Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein
Sejtmag: chromosomalisDNS
+Sejt érés
HPV SZŰRÉS INTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓ
Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának részévé válikrészévé válikrészévé válikrészévé válik
Humán Papillomavirus Testing for Triage of Women With Cytologic Evidence of Low-Grade Squamous Intraepithelial Lesions: Baseline Data From a Randomized Trial. The ASCUS/LSIL Study (ALTS) Group, Journal of the National Cancer Institute, Mar 1, 2000: 92 (5):.397-402.
642 LSIL diagnozis nyomán az esetek 82,8%-ban HG HPV jelen van.( 30 éves kor felett ez csökken)
LSIL esetében a HPV meghatározás a követés módjának megválasztásában nem informatív
INTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓVirus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának részévé válikrészévé válikrészévé válikrészévé válik
AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz
HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik
Virus termelés kezdődik
Capsid protein képzése
HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA(LEEGYSZERÜSÍTVE)
virus exit
Sejt elpusztul
LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!
viral DNA
capsid protein virus
Virus DNS replikációja
malignus sejtek
Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein
Sejtmag: chromosomalisDNS
+Sejt érés
HPV SZŰRÉS
CITOLOGIA
INTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓINTEGRÁCIÓVirus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt Virus DNS gazdasejt genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának genetikai állományának részévé válikrészévé válikrészévé válikrészévé válik
AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz
HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik
Virus termelés kezdődik
Capsid protein képzése
HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA(LEEGYSZERÜSÍTVE)
virus exit
Sejt elpusztul
LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!
viral DNA
capsid protein virus
Virus DNS replikációja
malignus sejtek
Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein
Sejtmag: chromosomalisDNS
+Sejt érés
HPV SZŰRÉS
CITOLOGIA
L 3 antitest
0
10
20
30
40
50
60
70
perzisztál 10 15 5 9
remissióba kerül 22 23 1 2
CIN1 1 0 6 4
CIN2 2 3 4 7
rosszabb mint CIN2 7 9 20 61
LSIL L1+
HSIL L1+
LSIL L1-HSIL L1-
H. Griesser, H. Sander, R. Hilfrich
Schmidt, D., Bergeron, C., Denton, KJ., Ridder, R., European CINtec Cytology Study Group
p16/ki-67 dual-stain cytology in the triage of ASCUS and LSIL papanicolaou cytology: results from the European equivocal or mildly abnormal Papanicolaou cytology study.Cancer Cytopathol.2011 Jun 25;119(3):158-66
A p16/Ki-67 dual-stain cytologia
senzitivitása
CIN2-nél súlyosabb léziók felismerésére 92.2%(ASCUS) and 94.2% (LSIL),
specificitása
80.6% (ASCUS) and 68.0% (LSIL) esetén.
Az eredmények nem különböznek 30 éves kor
alatt vagy felett.
HPV-E7....Rb:
E2F aktiválja mind osztódást (Ki 67) mind p16ink (cyclin dependens kináz, Chr9p21) aktivitását
p16ink/Ki 67 dual festés!
AKTIV FERTŐZÉSBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okozBetegséget okoz
HPV FERTŐZÉSSejtmagban zajlik
Virus termelés kezdődik
Capsid protein képzése
HPVHPVHPVHPV FERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSAFERTŐZÉSI CIKLUSA((((LEEGYSZERÜSÍTVELEEGYSZERÜSÍTVELEEGYSZERÜSÍTVELEEGYSZERÜSÍTVE))))
virus exit
Sejt elpusztul
LAPPANGÓ FERTŐZÉSNem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!Nem okoz betegséget!
viral DNA
capsid protein virus
Virus DNS replikációja
malignus sejtek
Sejtmag: chromosomalis és viralis DNS, nincs capsid protein
Sejtmag: chromosomalisDNS
+Sejt érés
HPV SZŰRÉS
CITOLOGIAINTEGRÁCIÓVirus DNS gazdasejt genetikai állományának részévé válik
Immunomarkers in GynecologicCytology: The Searchfor the Ideal‘Biomolecular PapanicolaouTest’Álvaro P. Pinto a Martin Degen b Luisa Lina Villa c Edmund S. Cibas
Acta Cytologica 2012;56:109–121
„A cervico/vaginális cytologia a laphám rák és megelőző állapotainak szűrését szolgáló módszer. Nem eléggé pontos az endometriális elváltozások felismerésében, ezért endometrialis elváltozások és azok okainak felderítésére a használata nem javasolt ”
( BETHESDA 2001 )
Mdkft/FFK 2003
III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)
V. KIEGÉSZÍT Ő TESZT
módszer rövid leírása és az eredmény közlése olyan módon, hogy az a klinikus számára könnyen érthető legyen
( BETHESDA 2001 )
?
III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)
• Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy
• Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result(specify ‘squamous’ or ‘glandular’ as appropriate)
• Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cellsin a woman > 40 years of age)
III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)
• Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy
• Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result(specify ‘squamous’ or ‘glandular’ as appropriate)
• Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cellsin a woman > 40 years of age)
III. ÖSSZEFOGLALÓ VÉLEMÉNY (nem kötelez ő)
• Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy
• Epithelial Cell Abnormality: See Interpretation/Result(specify ‘squamous’ or ‘glandular’ as appropriate)
• Other: See Interpretation/Result (e.g. endometrial cellsin a woman > 40 years of age)
Mdkft/FFK 2003
Mdkft/FFK 2003
FEJLÉC,LABOR ADATAI
Terminologia és minőségbiztosítás (Bethesda……)
ÉRTÉKELHET ŐSÉG
SBLB: megfelelő, de értékelhetősége korlátozott azáltal, hogy: ……..
DE:
dysplaticus sejt vagy daganatsejt jelenlétében a kenet nem lehet ÉRTÉKELHETETLEN
TERMINOLOGIA ( Hawaii, 1997 )TERMINOLOGIA ( Hawaii, 1997 )U. Schenk, A. Herbert, D. Solomon, NS., A,,a. RJ Collins, SK Gupta, M. Jimenez-Ayala, J. Kobilkova, M. Nielsen, HZ. Suprun
Mdkft/FFK 2003
( BETHESDA 2001 )
Conventional Paps have less random sampling than liquid-Paps, so a slightly higher estimate (8,000-12,000) is suggested
Preliminary studies show that reference images methods are quickly learned and have better interobserver reproducibility than the 10% cellularity criterion.
Set a minimum limit of5,000well-
visualized/preserved squamous cells for LBP
( BETHESDA 2001 )
CONTROL:
REFERENCE IMAGES
FFK/MD-2001
Legalább 10 jól megítélhet ő strukturájú endocervikális vagy
laphám metaplaziát mutató sejt kell ahhoz, hogy a transformációs zona
jelenléte bizonyított legyen.Degenerált sejtek nyákban nem
értékelendők.
( BETHESDA 2001 )
SQUAMOUS CELL
1.Atypical squamous cells - of undetermined significance(ASC(ASC--US)US)- cannot exclude HSIL (ASC(ASC--H)H)
It is anticipated that ASC-H will comprise5%-10% or less of total ASC.
( BETHESDA 2001 )
2. Low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL)- HPV/mild dysplasia/CIN 1
3. High grade squamous intraepithelial lesion (HSIL)- moderate and severe dysplasia, CIN 2 and CIN 3/
CIS- with features suspicious for invasionwith features suspicious for invasion((if invasionif invasion
is is suspectedsuspected))
4. Squamous cell carcinoma
Mdkft/FFK 2003
ASCUS/AGUS nem lehet több mint: 3 -5 %
ASCUS/AGUS : LSIL/HSIL/CC = 3 - 4 : 1
„Atypusos mirigyhámsejtek” megjelölés aránya egy szokványos cytologiai laboratoriumban 1 % alatt kell, hogy legyen”
( előfordulása az irodalomban 0,3 - 0,5 % )
?? ? ??