实验三 实验三 DICDIC 的造病和实验室检测的造病和实验室检测 

【目的要求】1. 通过 DIC 动物模型的复制，了解 DIC 的病因及发

病机制。

2. 观察急性 DIC 各期血液凝固性的变化，并分析这

些变化的原因及其病理意义。

3. 了解 DIC 的诊断标准，熟悉常用的实验室检查指

标及其意义。

【实验动物】【实验动物】 家兔，体重 1.5 ～ 2.0 kg 。

【药品与器材】【药品与器材】 1% 普鲁卡因，血小板稀释液，兔脑匀浆， 4% 肝素。

兔手术台，显微镜，离心机， 721 型分光光度计，水浴箱、手术器械，微量加样器，动脉插血小板计数板，注射器、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管等。

   【实验步骤】 1. 称重、麻醉和固定家兔

1% 普鲁卡因作颈部局部麻醉，颈前正中切口。分

离家兔一侧颈总动脉，动脉插管，备放血用。

2. 取肝素抗凝管和枸橼酸钠抗凝管各 3 个，分别做

好标记。

3. 正常血标本各项指标的的制备

■ 用玻璃纸，接兔血 1 滴，并立即取 10l 血放入 2.0

ml 血小板稀释液内充分混匀，作血小板计数。

■ 分别在肝素抗凝管内放入兔血 1.5ml ，在枸橼酸钠

抗凝管放入兔血 3.5ml 。迅速混匀后，离心、取上

层血浆，另置入干净小试管，并加上标记。 （ 肝素抗凝所制备的血浆用以测定 Fbg；枸橼酸钠 抗凝所制备的血浆用以测定 PT和 3P试验）

4. DIC 的造病：取兔脑匀浆，以 8ml／ Kg 体重剂量，

经耳缘静脉以 1ml/min 的速度匀速推注。

5. 兔脑匀浆注射完毕后，立即采集血样和 30 或 45min

后采血样一次。进行 BPC， PT 测定， 3P 试验和

Fbg 含量的测定。 【附录】【附录】1. 血小板计数（ BPC ）

将试管内已稀释血液滴到计数板上静置 10min ，

用高倍镜计数。准确数出计数板中央 l 大方格的血

小板数，乘以 2000 就是每立方毫米的血小板数。

2 ．凝血酶原时间（ Prothrombin Time 简称 PT ）

■ 取被检血浆 0.lml ，置于试管内， 37℃水浴预温。

■ 加入 P 试液 0.2ml ，并轻轻地侧动试管，至液体停止

流动或出现颗粒为止，记录 PT 测定值（秒）。

■ 重复 3 次测定，取平均值作为测定结果。3 ．血浆鱼精蛋白副凝试验（ 3P 试验）

■ 取被检血浆 0.5ml ，置于试管内， 37℃水浴 3min 。

■ 加入硫酸鱼精蛋白液 50l ，混匀， 37℃水浴 15min 。

观察有无白色纤维或凝块出现。

如纤维或凝块出现为阳性；无纤维或凝块为阴性。

4 ．纤维蛋白原定量（饱和氯化钠法）

■ 实验管：取血浆 0.5ml ，加入饱和 NaCl 4.5ml ，充分

混匀，置 37℃水浴 3min ，取出后再次摇匀。

■对照管：取生理盐水 0.5ml ，加入饱和 NaCl 4.5ml，

同上操作。

■选用波长 520nm ，以对照管试液调零点，然后测定

被检样品试液的光密度。测定光密度值

0.5× 1000 ＝  mg%纤维蛋白原含量

【注意事项】1 ．采集抗凝血需掌握好血液与抗凝剂的比例。

2 ．注射兔脑匀浆前，做好第二次采血的准备工作。

3 ．静脉推注兔脑匀浆的速度快慢是实验成败的关

键，故密切注意动物的反应。

【思考题】1 ．静脉注入兔脑浸液后为何能复制出家兔 DIC模型？

试述其发生机制。

2 ．讨论急性 DIC 产生的原因、机制及各项结果间的

关系。

【实验结果记录】

表 2-3-2 DIC 实验指标的测定记录项 目 注射前 注射后（立即） 注射后（ 30/60min ）  BPC

PT(sec) 

3P 试验Fbg 量

表 2-3-1 注入兔脑匀浆前后动物呼吸与状态观察 注兔脑匀浆前 注兔脑匀浆后腹式呼吸 一般状态

血小板计数血小板计数

1010 倍镜下倍镜下

4040 倍镜下倍镜下

凝血酶原时间测定凝血酶原时间测定

TF+ CaTF+ Ca2+2+ + + 被检血浆，测定凝血时间，使凝血酶被检血浆，测定凝血时间，使凝血酶

           原变为凝血酶，再进一步促进纤维蛋白形成。原变为凝血酶，再进一步促进纤维蛋白形成。

                                正常值：正常值： 12~1412~14 秒秒 

3P3P试验试验

     纤维蛋白单体 FM可与纤维蛋白（原）的降

     解产物 X片段形成可溶性复合物 SFMC，当加入硫酸鱼精蛋白或乙醇后可使复合物中的

FM游离，重新聚集，即血浆重凝固。

     意义：反映纤溶功能

1. 1. 来源：来源：肠粘膜肥大细胞，是一种酸性粘多糖；肠粘膜肥大细胞，是一种酸性粘多糖；2. 2. 作用：作用： AA、加速、加速 AT-IIIAT-III 、、 HC-IIHC-II 的作用，也影响的作用，也影响 TFPITFPI 、、 PCPC作用；作用；

BB、增强、增强 ECEC的抗凝和纤溶功能；的抗凝和纤溶功能； CC、与血小板结合，抑其表面凝血酶生成；、与血小板结合，抑其表面凝血酶生成；3. 3. 清除：清除：                   细胞清除和体液中和。细胞清除和体液中和。

肝素（肝素（ heparinheparin ））