Validering av kjemiske analysemetoder
Anders T. Halvorsen
Fagdag Kontroll og utvikling 01.04.2014
Validering ≠ Skjemautfylling
Validering ≠ Statistikk
Anscombes kvartett
A B C D
X Y X Y X Y X Y10,
08,04
10,0
9,1410,
07,46 8,0 6,58
8,0 6,95 8,0 8,14 8,0 6,77 8,0 5,7613,
07,58
13,0
8,7413,
012,7
48,0 7,71
9,0 8,81 9,0 8,77 9,0 7,11 8,0 8,8411,
08,33
11,0
9,2611,
07,81 8,0 8,47
14,0
9,9614,
08,1
14,0
8,84 8,0 7,04
6,0 7,24 6,0 6,13 6,0 6,08 8,0 5,25
4,0 4,26 4,0 3,1 4,0 5,3919,
012,5
012,
010,8
412,
09,13
12,0
8,15 8,0 5,56
7,0 4,82 7,0 7,26 7,0 6,42 8,0 7,91
5,0 5,68 5,0 4,74 5,0 5,73 8,0 6,89
y = 0,5x + 3,0
R2 0,667SE (b1)
0,118
Σ(y-y)2 13,75
n 11
x 9,0
SD x 3,32Σ(x-x)2 110,0
y 7,58
SD y 2,03
Anscombes kvartett
Validering = Kompetanse
Analytisk
Validering
Rapport
Medisinsk
Plan↔
Interferenser i LC-MS/MS analyse av MMA
MetylmalonsyreAnalytt
RavsyreInterferens
Analytisk og medisinsk kompetanse i validering
OOH
HOO
OOOHHO
Interferenser i LC-MS/MS analyse av MMA
Valproat
Pasienter på valproat produserer små syrer i
sera
Nyre- og leversvikt
Produserer har «skitne» sera
Medisinsk kompetanse
Interferenser i LC-MS/MS analyse av MMA
Analytisk kompetanse
Presisjon til en analytisk prosedyre
er den spredningen i resultater som
man får ved gjentatte målinger av
samme, homogene prøve under
gitte forhold.
Presisjonsstudier
Innen serie presisjon (repeterbarhet)Samme måling gjort under like omstendigheter
Total-presisjon (reproduserbarhet)Samme måling gjort over tid, av forskjellige operatører osv.
Presisjonsstudier
Nok data
Varier betingelser
Forsøksdesign (kjemometri)
Noen praktiske tips
Lot til lot variasjon
Små forskjeller
Inkluderes i presisjon
Store forskjeller
Korrigere metoden
Av kalibratorer og kritiske reagenser
Det er viktig at kunde (rekvirenten) ikke skal være avhengig av å
vite hvilke instrument, lotnr på reagenser osv som er brukt.
Jo mindre forskjell, jo flere målinger kreves for å estimere denne.
Linearitet til en analytisk prosedyre
er evnen til å gi et prøveresultat
som er direkte proporsjonalt med
konsentrasjonen av analytt i
prøven
Linearitet
Ikke alltid relevant
Ikke et krav at metoden skal være linear
Lineær i kalibreringsområdet
Linearitet
Metning av detektor
Deteksjonsgrense
Linearitet X/Y diagram
Linearitet residualdiagram
Linearitet konstant respons-diagram
Lineært område
Linearitet
Minst 6 konsentrasjonsnivåer, jevnt fordelt
QL til 120% av kalibreringsområdet
Anbefalte data
Linearitet
X/Y plott med lineær regresjon og korrelasjon
Residualer mot konsentrasjoner (X-verdier)
Residualer mot respons (Y-verdier)
Konstant-responsdiagram
Anbefalte diagrammer
Deteksjonsgrensen til en analytisk
prosedyre er den minste mengden
av analytt i en prøve som kan
skilles fra en blankprøve.
Deteksjonsgrense
Signal til støy-forhold (S/N)
Måling av blank
Fortynningsrekke ned mot deteksjonsgrensen
Deteksjonsgrense ved signal til støy
Støy
Signal
DL= 3 x støy-
signalet
Deteksjonsgrense ved blankmåling
~0,13 % av blanke vil gi et resultat >3s
(Dette er ikke helt sant)
Deteksjonsgrense ved blankmåling
Mulig feil
50% av resultatene vil bli satt lik 0
Deteksjonsgrense ved fortynningsrekke
Usikkerhet (σ) i skjæringspunktet
Usikkerhet (σ) i stigningstallet
DL=3,3 σStigningstall
Deteksjonsgrense: Måling av blank 1
Korrigerer ikke for snittmåling
av blank
DL = X + 3SD
Korriger for snitt ≠ 0
DL = 4,02
Nr. Resp1 3,172 2,633 3,444 2,595 3,286 3,297 2,748 3,189 2,73
10 3,4111 2,7212 2,5013 2,7514 3,1415 3,46SD 0, 34DL 1,02 (3xSD)
Deteksjonsgrense: Måling av blank 2
Estimert deteksjonsgrense
ligger lavere enn eneste måling
≠ 0.
For lite oppløsning i avlesning
til å gi et godt mål på variasjon
i blank.
Nr. Resp1 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,18 0,09 0,0
10 0,011 0,012 0,013 0,014 0,015 0,0
Snitt 0,0SD 0,03DL 0,09 (3xSD)
Kvantifiseringsgrensen til en
analytisk prosedyre er den minste
mengden av analytt i en prøve som
kan kvantifiseres med en gitt
nøyaktighet.
Kvantifiseringsgrense
Måling av blank
Fortynningsrekke
Måling av usikkerhet
Kvantifiseringsgrense ved blankmåling
50% av prøvene vil bli angitt som blank
Kvantifiseringsgrense ved blankmåling
0,13% av prøvene vil bli angitt som blank
Kvantifiseringsgrense ved blankmåling
Kvantifiseringsgrense ved usikkerhet
Krav til spredning (CV)
Kravet må være relatert til metodens bruk
Minst seks replikater nær
kvantifiseringsgrense
Deteksjonsgrense og kvantifiseringsgrense
Deteksjonsgrense viser at prøven ikke er
blank
Kvantifiseringsgrense er et resultat med
usikkerhet
Kvantifiseringsgrense kan presse ned mot
deteksjonsgrensen, om økt usikkerhet er
akseptabelt
Top Related