J Clin Pathol 1989;42:982-984
Tcnicas de laboratorio
Uso de anti-actina monoclonal como marcador de megacariocitos en muestras de biopsia de mdula sea incluidos en parafina C BOQU, N PUJOL-MOIX, M A LINDE,* C MURCIA, C GUANYABENS, J SOLER Servei d'Hematologia,* Servei d'Anatomia Patolgica, Hospital de la Santa Creu i Sant Pau, Barcelona, Espaa RESUMEN La anti-actina monoclonal se utiliza como marcador de megacariocitos fijados en solucin de Zenker sobre tejido de medula sea incluidos en parafina utilizando tincin con imnumnoperoxidasa. Se estudiaron veinte muestras de medula sea, entre ellas muestras control y de diferentes sndromes mieloproliferativos y mielodisplsicos. Los resultados se compararon con aquellos obtenidos en la inmunomarcacin mediante uso de antgeno asociado al Factor VIII (F VIII Rag). La anti-actina result un buen marcador para megacariocitos como el anti-FVIIIRag y es posible que tenga utilidad clnica en casos de dificultad en la identificacin morfolgica, aspiracin fallida de mdula sea o bien cuando es necesaria la evaluacin cuantitativa de secciones de tejido.
Los megacariocitos bien diferenciados y maduros se pueden detectar fcilmente en muestras
de biopsia de mdula sea, sin embargo, los mtodos convencionales pueden resultar
ineficaces en la identificacin de megacariocitos ms primitivos. La marcacin
inmunohistoqumica de muestras de biopsia de mdula sea es de especial inters en esos
casos.
La mayora de los anticuerpos capaces de detectar megacariocitos no son adecuados para
muestras de rutina de biopsia de mdula sea, debido a que reconocen antgenos que se
destruyeron durante la fijacin, descalcificacin e inclusin en parafina. Sin embargo, se
usaron anticuerpos relacionados con el VIII (FVIIIRAg) como marcadores de megacariocitos en
muestras de biopsia de mdula sea incluidos en parafina y en otras muestras de tejido. En
este paper se describe el uso de una anti-actina monoclonal alternativa con un mtodo de
tincin con inmunoperoxidasa y se comparan los resultados entre el FVIIIRAg y la
inmunomarcacin con actica en mdulas sanas y en varias anormalidades hematolgicas que
afectan a los megacariocitos.
Materiales y mtodos
De los veinte pacientes estudiados, cuatro tenan muestras de biopsia de mdula sea
normales (extraidas para la evaluacin de estadio de tumores slidos) y diecisis tenan
distintos trastornos hematolgicos que afectan la megacariocitopoyesis: trombocitopenia
primaria (TP) n = 2; policitemia rubra vera (PRV) n = 2; mielofibrosis idioptica (MF)
n = 4; leucemia granuloctica crnica (LGC) n = 4; y sndrome mielodisplsico (SMD) n = 4.
Las muestras de biopsia de mdula sea se obtuvieron mediante una tcnica de puncin
tradicional, se fijaron de inmediato en solucin de Zenker y se incluyeron en parafina luego de
la descalcificacin con cido actico.
La tincin con inmunoperoxidasa y un anticuerpo policlonal del FVIIIRAg humano se realiz por
medio del mtodo de avidina-biotina (Vectastain ABC Kit, Vector Laboratories, Burlingame,
California, EE.UU) mediante un anticuerpo humano al FVIIIAg policlonal con una dilucin 1/800
(Dakopats, Dinamarca) y un anticuerpo monoclonal de la actina con una dilucin 1/2000
(Amershan, Reino Unido). Las muestras control fueron incubadas con suero normal en lugar de
con anticuerpo primario.
Los resultados se evaluaron por microscopa ptica para observar tanto el nmero de
megacariocitos teidos como la intensidad de la tincin.
Resultados
En la tabla se resumen los resultados de la tincin con inmunoperoxidasa para la actina
monoclonal y el FVIIIAg policlonal.
En la figura se puede apreciar la tincin selectiva de megacariocitos marcados se puede
apreciar junto a la tincin de hematoxilina-eosina.
Uso de anti-actina monoclonal como marcador de megacariocitos
Mdula sea normal. (a) Tincin de hematoxilina-eoxina; (b) tincin por inmunoperoxidasa con
anti-actina monoclonal; (c) tincin por inmunoperoxidasa con anti-FVIIIRAg policlonal.
Tabla Resultados de tincin por inmunoperoxidasa para anticuerpos anti-actina monoclonal y anti-FVIIIRAg policlonal
Diagnstico Nmero Actina FVIIIAg de casos Control 4 + +, + + + +, + + + +, + + + + + + + +, + + + +, + + + +, + + + + TP 2 + + + +, + + + + -, + + PRV 2 + + + +, - + + +, + MF 4 +, -, + + + +, + + + + + + + +, -, -, + + + + LGC 4 +, +, + + + +, + + + + + + + +, + + + +, + + + +, + + SMD 4 +, + + + +, + + + +, + + +, + + + +, + + + +, +
+ + + + = positividad fuerte + + + = positividad moderada en ms de un 75% de megacariocitos. + + = fuerte + = positividad moderada entre un 25% a un 75% de megacariocitos. - = menor a un 25% de megacariocitos teidos o una positividad muy dbil considerada negativa.
Argumentacin
La actina es la protena principal del citoesqueleto planetario y representa aproximadamente
el 35% del contenido total de protenas celulares. Se sintetiza en los megacariocitos y
constituye el aparato contrctil que regula los cambios en la forma celular durante la
activacin de las plaquetas. En estas pruebas, la actina demostr ser un marcador confiable
para la lnea celular de megacariocitos en muestras de mdula sea y segn se sabe es la
primera vez que se informa el uso de esta tcnica. Aunque se sabe que las clulas de mdula
sea contienen actina, slo los megacariocitos se tien de manera considerable por este
mtodo. Otras estructuras que tambin reaccionan a tincin con actina en muestras de
mdula sea son las paredes musculares de los vasos, los pericitos de los capilares y las
plaquetas.
La inmunomarcacin de megacariocitos tiene utilidad clnica cuando el reconocimiento
morfolgico de megacariocitos resulta dificultoso debido a inmadurez y atipia, bien cuando la
aspiracin de mdula sea es fallida (puncin seca) o en casos donde es necesario cuantificar
con precisin la poblacin de megacariocitos en secciones de tejido.
La intensidad de la tincin parece depender del grado de madurez y la capacidad de sntesis
proteica de los megacariocitos necesaria para la tincin con actina, tal como se ha hecho con el
FVIIIRAg con anterioridad.
La actina es tan buen marcador de megacariocitos como el FVIIIRAg y puede resultar til en
casos de estudio de megacariocitos en muestras de biopsia de mdula sea en inclusin de
parafina.
Top Related