J Clin Pathol 1989;42:982-984

Tcnicas de laboratorio

Uso de anti-actina monoclonal como marcador de megacariocitos en muestras de biopsia de mdula sea incluidos en parafina C BOQU, N PUJOL-MOIX, M A LINDE,* C MURCIA, C GUANYABENS, J SOLER Servei d'Hematologia,* Servei d'Anatomia Patolgica, Hospital de la Santa Creu i Sant Pau, Barcelona, Espaa RESUMEN La anti-actina monoclonal se utiliza como marcador de megacariocitos fijados en solucin de Zenker sobre tejido de medula sea incluidos en parafina utilizando tincin con imnumnoperoxidasa. Se estudiaron veinte muestras de medula sea, entre ellas muestras control y de diferentes sndromes mieloproliferativos y mielodisplsicos. Los resultados se compararon con aquellos obtenidos en la inmunomarcacin mediante uso de antgeno asociado al Factor VIII (F VIII Rag). La anti-actina result un buen marcador para megacariocitos como el anti-FVIIIRag y es posible que tenga utilidad clnica en casos de dificultad en la identificacin morfolgica, aspiracin fallida de mdula sea o bien cuando es necesaria la evaluacin cuantitativa de secciones de tejido.

Los megacariocitos bien diferenciados y maduros se pueden detectar fcilmente en muestras

de biopsia de mdula sea, sin embargo, los mtodos convencionales pueden resultar

ineficaces en la identificacin de megacariocitos ms primitivos. La marcacin

inmunohistoqumica de muestras de biopsia de mdula sea es de especial inters en esos

casos.

La mayora de los anticuerpos capaces de detectar megacariocitos no son adecuados para

muestras de rutina de biopsia de mdula sea, debido a que reconocen antgenos que se

destruyeron durante la fijacin, descalcificacin e inclusin en parafina. Sin embargo, se

usaron anticuerpos relacionados con el VIII (FVIIIRAg) como marcadores de megacariocitos en

muestras de biopsia de mdula sea incluidos en parafina y en otras muestras de tejido. En

este paper se describe el uso de una anti-actina monoclonal alternativa con un mtodo de

tincin con inmunoperoxidasa y se comparan los resultados entre el FVIIIRAg y la

inmunomarcacin con actica en mdulas sanas y en varias anormalidades hematolgicas que

afectan a los megacariocitos.

Materiales y mtodos

De los veinte pacientes estudiados, cuatro tenan muestras de biopsia de mdula sea

normales (extraidas para la evaluacin de estadio de tumores slidos) y diecisis tenan

distintos trastornos hematolgicos que afectan la megacariocitopoyesis: trombocitopenia

primaria (TP) n = 2; policitemia rubra vera (PRV) n = 2; mielofibrosis idioptica (MF)

n = 4; leucemia granuloctica crnica (LGC) n = 4; y sndrome mielodisplsico (SMD) n = 4.

Las muestras de biopsia de mdula sea se obtuvieron mediante una tcnica de puncin

tradicional, se fijaron de inmediato en solucin de Zenker y se incluyeron en parafina luego de

la descalcificacin con cido actico.

La tincin con inmunoperoxidasa y un anticuerpo policlonal del FVIIIRAg humano se realiz por

medio del mtodo de avidina-biotina (Vectastain ABC Kit, Vector Laboratories, Burlingame,

California, EE.UU) mediante un anticuerpo humano al FVIIIAg policlonal con una dilucin 1/800

(Dakopats, Dinamarca) y un anticuerpo monoclonal de la actina con una dilucin 1/2000

(Amershan, Reino Unido). Las muestras control fueron incubadas con suero normal en lugar de

con anticuerpo primario.

Los resultados se evaluaron por microscopa ptica para observar tanto el nmero de

megacariocitos teidos como la intensidad de la tincin.

Resultados

En la tabla se resumen los resultados de la tincin con inmunoperoxidasa para la actina

monoclonal y el FVIIIAg policlonal.

En la figura se puede apreciar la tincin selectiva de megacariocitos marcados se puede

apreciar junto a la tincin de hematoxilina-eosina.

Uso de anti-actina monoclonal como marcador de megacariocitos

Mdula sea normal. (a) Tincin de hematoxilina-eoxina; (b) tincin por inmunoperoxidasa con

anti-actina monoclonal; (c) tincin por inmunoperoxidasa con anti-FVIIIRAg policlonal.

Tabla Resultados de tincin por inmunoperoxidasa para anticuerpos anti-actina monoclonal y anti-FVIIIRAg policlonal

Diagnstico Nmero Actina FVIIIAg de casos Control 4 + +, + + + +, + + + +, + + + + + + + +, + + + +, + + + +, + + + + TP 2 + + + +, + + + + -, + + PRV 2 + + + +, - + + +, + MF 4 +, -, + + + +, + + + + + + + +, -, -, + + + + LGC 4 +, +, + + + +, + + + + + + + +, + + + +, + + + +, + + SMD 4 +, + + + +, + + + +, + + +, + + + +, + + + +, +

+ + + + = positividad fuerte + + + = positividad moderada en ms de un 75% de megacariocitos. + + = fuerte + = positividad moderada entre un 25% a un 75% de megacariocitos. - = menor a un 25% de megacariocitos teidos o una positividad muy dbil considerada negativa.

Argumentacin

La actina es la protena principal del citoesqueleto planetario y representa aproximadamente

el 35% del contenido total de protenas celulares. Se sintetiza en los megacariocitos y

constituye el aparato contrctil que regula los cambios en la forma celular durante la

activacin de las plaquetas. En estas pruebas, la actina demostr ser un marcador confiable

para la lnea celular de megacariocitos en muestras de mdula sea y segn se sabe es la

primera vez que se informa el uso de esta tcnica. Aunque se sabe que las clulas de mdula

sea contienen actina, slo los megacariocitos se tien de manera considerable por este

mtodo. Otras estructuras que tambin reaccionan a tincin con actina en muestras de

mdula sea son las paredes musculares de los vasos, los pericitos de los capilares y las

plaquetas.

La inmunomarcacin de megacariocitos tiene utilidad clnica cuando el reconocimiento

morfolgico de megacariocitos resulta dificultoso debido a inmadurez y atipia, bien cuando la

aspiracin de mdula sea es fallida (puncin seca) o en casos donde es necesario cuantificar

con precisin la poblacin de megacariocitos en secciones de tejido.

La intensidad de la tincin parece depender del grado de madurez y la capacidad de sntesis

proteica de los megacariocitos necesaria para la tincin con actina, tal como se ha hecho con el

FVIIIRAg con anterioridad.

La actina es tan buen marcador de megacariocitos como el FVIIIRAg y puede resultar til en

casos de estudio de megacariocitos en muestras de biopsia de mdula sea en inclusin de

parafina.