Tema 10. Transcripción 1
Las fronteras del promotor pueden ser delimitadas delecionando progresivamente material de un lado. Cuando una deleción permite la transcripción y la siguiente la impide, la frontera del promotor se encuentra entre ambas.
Curso arriba
Promotor Región que se transcribe
Delecionar, reconectar
Transcripción
Presencia de RNA: la deleción no incluye al promotor
Delecionar, reconectar
Ausencia de RNA: la deleción afecta al promotor
La frontera del promotor se encuentra entre los extremos de las deleciones
Tema 10. Transcripción 2
La mutagénesis de la región curso arriba del promotor de -globina identifica tres regiones cortas (centradas a –30, -75 y –90) que son necesarias para iniciar la transcripción. Corresponden a las cajas TATA, CAAT y GC.
Nivel relativo de transcripción (1 = normal)
Tema 10. Transcripción 3
Los promotores contienen diferentes combinaciones de cajas TATA, CAAT, GC y otras.
SV40 temprano
Timidina quinasa
Histona H2B
Punto de inicio
Tipos de módulosOctámero
Tema 10. Transcripción 4
Un potenciador contiene varios motivos estructurales. El histograma refleja todas las mutaciones que reducen la función del potenciador con respecto al tipo silvestre. Los lugares de unión de proteínas se indican debajo del histograma
% de actividad
Tema 10. Transcripción 5
Las funciones de unión a DNA y activación de la transcripción de un factor de transcripción generalmente residen en dominiosindependientes de la proteína
Dominio de activación
Dominio conector
Dominio de unión a DNA
Tema 10. Transcripción 6
La proteína GAL4 tiene regiones independientes que unen DNA, activan la transcripción (2 regiones), dimerizan, y unen el regulador GAL80
Unión a DNA
Activación Activación
Dimerización Unión a GAL80
Tema 10. Transcripción 7
La capacidad de GAL4 para activar la transcripción es independiente de su especificidad de unión a DNA. Cuando el dominio de unión a DNA de GAL4 se reemplaza por el dominio de unión a DNA de LexA, la proteína híbrida puede activar la transcripción cuando un operador LexA se coloca cerca del promotor
Promotor Operador LexA Promotor
Activador GAL4
Unión a DNA de GAL4
Activador GAL4
Unión a DNA de LexA
Unión y transcripción
No unión
No unión
Unión y transcripción
Tema 10. Transcripción 8
Tabla de Latchman con elementos de secuencia promotores y potenciadores
Tema 10. Transcripción 9
Esquema de dominios de unión a ADN de los factores de transcripción.: dedo de cinc etc
Tema 10. Transcripción 10
Las unidades de transcripción para RNA pol I tienen un núcleo promotor y un elemento de control curso arriba. UBF1 y SL1 son necesarios para que la RNA polI se pueda unir. Se desconocen las interacciones entre factores unidos a ambas regiones controladoras
El promotor de pol I tiene dos componentes
Elemento curso arriba Núcleo del promotor
Punto inicio
UBF1 UBF1 se une a región rica en G-C
SL1
SL1 se une
cooperativamente a UB1
El complejo de iniciación se ensambla en tres pasos
? Pol I
Tema 10. Transcripción 11
El análisis de deleciones muestra que el promotor de los genes de RNA 5S es interno. La iniciación de la transcripción comienza a una distancia fija (50pb) curso arriba del promotor
Promotor de Pol III curso abajo del punto de inicio
Punto de inicio Promotor
Curso arriba Región que se transcribe
La deleción de secuencias curso arriba del promotor no impide que tenga lugar correctamente la transcripción
Tema 10. Transcripción 12
Los promotores para RNA pol III pueden estar constituidos por secuencias bipartitas curso abajo del punto de inicio (Caja A y caja B o C). O pueden estar constituidos por secuencias separadas curso arriba del punto de inicio (Oct, PSE, TATA)
Punto de inicio
Tema 10. Transcripción 13
La iniciación de la transcripción por la RNA pol III en promotores internos implica el ensamblaje de los factores TFIIIA y TFIIIC, del factor de iniciación TFIIIB y de la RNA pol III
Promotores internos tipo 1 Promotores internos tipo 2
Punto de inicio Punto de inicio
Caja A Caja C Caja A Caja B
Tema 10. Transcripción 14
El complejo de iniciación se ensambla en los promotores para RNA pol II siguiendo una asociación ordenada de factores de transcripción
FACTORES COMPLEJOS DE TRANSCRIPCIÓNPunto de inicio
Unión al surco menor
Tema 10. Transcripción 15
La actividad quinasa de TFIIH fosforila a la RNA pol II lo que libera al enzima y comienza la transcrioción
Fosforilación
RNA pol comienza la transcripción
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