Tema 10. Transcripción1 Las fronteras del promotor pueden ser delimitadas delecionando...

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Tema 10. Transcrip ción 1 Las fronteras del promotor pueden ser delimitadas delecionando progresivamente material de un lado. Cuando una deleción permite la transcripción y la siguiente la impide, la frontera del promotor se encuentra entre ambas. Curso arriba Promotor Región que se transcribe Delecionar, reconectar Transcripció n Presencia de RNA: la deleción no incluye al promotor Delecionar, reconectar Ausencia de RNA: la deleción afecta al promotor La frontera del promotor se encuentra entre los extremos de las deleciones

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Tema 10. Transcripción 1

Las fronteras del promotor pueden ser delimitadas delecionando progresivamente material de un lado. Cuando una deleción permite la transcripción y la siguiente la impide, la frontera del promotor se encuentra entre ambas.

Curso arriba

Promotor Región que se transcribe

Delecionar, reconectar

Transcripción

Presencia de RNA: la deleción no incluye al promotor

Delecionar, reconectar

Ausencia de RNA: la deleción afecta al promotor

La frontera del promotor se encuentra entre los extremos de las deleciones

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Tema 10. Transcripción 2

La mutagénesis de la región curso arriba del promotor de -globina identifica tres regiones cortas (centradas a –30, -75 y –90) que son necesarias para iniciar la transcripción. Corresponden a las cajas TATA, CAAT y GC.

Nivel relativo de transcripción (1 = normal)

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Tema 10. Transcripción 3

Los promotores contienen diferentes combinaciones de cajas TATA, CAAT, GC y otras.

SV40 temprano

Timidina quinasa

Histona H2B

Punto de inicio

Tipos de módulosOctámero

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Tema 10. Transcripción 4

Un potenciador contiene varios motivos estructurales. El histograma refleja todas las mutaciones que reducen la función del potenciador con respecto al tipo silvestre. Los lugares de unión de proteínas se indican debajo del histograma

% de actividad

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Tema 10. Transcripción 5

Las funciones de unión a DNA y activación de la transcripción de un factor de transcripción generalmente residen en dominiosindependientes de la proteína

Dominio de activación

Dominio conector

Dominio de unión a DNA

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Tema 10. Transcripción 6

La proteína GAL4 tiene regiones independientes que unen DNA, activan la transcripción (2 regiones), dimerizan, y unen el regulador GAL80

Unión a DNA

Activación Activación

Dimerización Unión a GAL80

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Tema 10. Transcripción 7

La capacidad de GAL4 para activar la transcripción es independiente de su especificidad de unión a DNA. Cuando el dominio de unión a DNA de GAL4 se reemplaza por el dominio de unión a DNA de LexA, la proteína híbrida puede activar la transcripción cuando un operador LexA se coloca cerca del promotor

Promotor Operador LexA Promotor

Activador GAL4

Unión a DNA de GAL4

Activador GAL4

Unión a DNA de LexA

Unión y transcripción

No unión

No unión

Unión y transcripción

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Tema 10. Transcripción 8

Tabla de Latchman con elementos de secuencia promotores y potenciadores

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Tema 10. Transcripción 9

Esquema de dominios de unión a ADN de los factores de transcripción.: dedo de cinc etc

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Tema 10. Transcripción 10

Las unidades de transcripción para RNA pol I tienen un núcleo promotor y un elemento de control curso arriba. UBF1 y SL1 son necesarios para que la RNA polI se pueda unir. Se desconocen las interacciones entre factores unidos a ambas regiones controladoras

El promotor de pol I tiene dos componentes

Elemento curso arriba Núcleo del promotor

Punto inicio

UBF1 UBF1 se une a región rica en G-C

SL1

SL1 se une

cooperativamente a UB1

El complejo de iniciación se ensambla en tres pasos

? Pol I

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Tema 10. Transcripción 11

El análisis de deleciones muestra que el promotor de los genes de RNA 5S es interno. La iniciación de la transcripción comienza a una distancia fija (50pb) curso arriba del promotor

Promotor de Pol III curso abajo del punto de inicio

Punto de inicio Promotor

Curso arriba Región que se transcribe

La deleción de secuencias curso arriba del promotor no impide que tenga lugar correctamente la transcripción

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Tema 10. Transcripción 12

Los promotores para RNA pol III pueden estar constituidos por secuencias bipartitas curso abajo del punto de inicio (Caja A y caja B o C). O pueden estar constituidos por secuencias separadas curso arriba del punto de inicio (Oct, PSE, TATA)

Punto de inicio

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Tema 10. Transcripción 13

La iniciación de la transcripción por la RNA pol III en promotores internos implica el ensamblaje de los factores TFIIIA y TFIIIC, del factor de iniciación TFIIIB y de la RNA pol III

Promotores internos tipo 1 Promotores internos tipo 2

Punto de inicio Punto de inicio

Caja A Caja C Caja A Caja B

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Tema 10. Transcripción 14

El complejo de iniciación se ensambla en los promotores para RNA pol II siguiendo una asociación ordenada de factores de transcripción

FACTORES COMPLEJOS DE TRANSCRIPCIÓNPunto de inicio

Unión al surco menor

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Tema 10. Transcripción 15

La actividad quinasa de TFIIH fosforila a la RNA pol II lo que libera al enzima y comienza la transcrioción

Fosforilación

RNA pol comienza la transcripción