8/19/2019 Lapres Dna
1/8
1. HASIL PENGAMATAN
Hasil pengamatan Isolasi DNA Bahan Hewani dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Isolasi DNA Bahan Hewani
Kel BahanGambar DNA
Warna Kekeruhan Keteranganebelum esudah
A1 Hati api
!erah!uda
"okelat!uda
Bening
Keruh
• Ada DNA• Bentuk bulat
ke#il$serabut
A% Hati api
!erah!uda
"okelat!uda
Bening
Keruh
• Ada DNA• Bentuk bulat
ke#il$serabut
A& Hati api
!erah
!uda
"okelat!uda
Bening
Keruh
• Ada DNA• Bentuk bulat
ke#il $serabut
A'
A(
Hati api
Hati api
!erah!uda
"okelat
!uda
!erah!uda
"okelat!uda
Bening
Keruh
Bening
Keruh
• Ada DNA• Bentuk bulat
ke#il $serabut
• Ada DNA• Bentuk
bulat ke#il$ serabut
1
8/19/2019 Lapres Dna
2/8
%
A) Hati api!erah!uda
"okelat!uda
Bening
Keruh
• Ada DNA• Bentuk bulat
ke#il$serabut
*ada Tabel 1 dapat dilihat sampel +ang digunakan pada per#obaan ini adalah hati sapi.
*ada setiap kelompok menun,ukkan peubahan warna dari merah muda men,adi #oklat
muda ketika diberikan penambahan sen+awa tertentu. *ada tingkat kekeruhann+a
larutan +ang semula berwarna bening berubah men,ad keruh- serta terlihatn+a bentuk
DNA se#ara isual- +aitu berbentuk bulat ke#il dan berserabut.
2. PEMBAHASAN
&.
DNA merupakan asam nukleat +ang mengandung materi genetik dan ber/ungsi untuk
mengatur perkembangan biologis kehidupan se#ara seluler. DNA ada +ang berada di
nukleus +ang berbentuk linear dan berikatan dengan protein histon- ada +ang berada di
mitokondria dan di kloroplas dimana DNA tersebut tidak berikatan dengan protein
histon dan berbentuk sirkular 0 a en $ 2ohnson- %33%4. antai DNA berbentuk double
helix . DNA tersusun atas gula pentosa- basa nitrogen- dan gugus /os/at 05ewis- 16784.
elain itu DNA dapat dibagi men,adi DNA prokariot dan eukariot berdasarkan
organismen+a. *rotein dikatakan eukariot ,ika berbentuk linear dan mempun+ai protein
histon. edangkan dikatakan prokariot ,ika bila berbentuk sirkular dan tidak memiliki
protein histon 0Klug $ "ummings- 166'4. *ada per#obaan ini dilakukan pengu,ian
isolasi DNA dengan bahan Hwani +aitu hati sapi. !enurut "appu#ino $ herman
0167&4- isolasi adalah suatu #ara untuk memisahkan mikroba +ang satu dengan +ang lainuntuk mendapatkan spesies tunggal serta si/at9si/at +ang diinginkan seperti bentuk-
ukuran- warna- tekstur- permukaan serta beberapa si/at lain +ang nampak. edangkan
menurut Hadioetomo 0166&4- isolasi merupakan suatu proses pemisahan suatu spesies
tertentu dari spesies mikroorganisme lainn+a dalam habitat kemudian ditumbuhkan
men,adi suatu biakan murni dimana sel9seln+a berasal dari pembelahan satu sel tunggal.
'.
8/19/2019 Lapres Dna
3/8
&
(. *ada praktikum ini- pertama9tama bahan ditimbang seban+ak ' gram- diiris ke#il
lalu kemudian dihan#urkan hingga halus . *enghan#uran bahan ini bertu,uan
untuk menghan#urkan ,aringan9,aringan pada sampel tersebut 0!uslim- %33&4.
Kemudian bahan ditambahkan dengan %3 ml larutan sukrosa 3-( ! dingin.
*enambahan larutan sukrosa bertu,uan untuk merusak lipid +ang terdapat pada
membran sel sehingga men+ebabkan sel men,adi han#ur. elain itu- larutan
sukrosa ,uga berperan sebagai larutan bu//er +ang ber/ungsi untuk men,aga
kestabilan hasil sentri/ugasi dari kerusakan 0!uslim- %33&4. Bahan diaduk
hingga ter#ampur rata- kemudian disaring- menurut Kimball 0166%4 pen+aringan
bertu,uan untuk memisahkan bagian sel dari debris sel +ang meliputi membran
sel- endapan protein dan potongan +ang tidak dapat dihan#urkan saat dihaluskan.
5arutan hasil saringan- dimasukkan kedalam tabung senti/us hingga tanda tera
kemudian disenti/ugasi dengan ke#epatan &333 rpm selama 13 menit.
enti/ugasi merupakan proses pemisahan substansi +ang berada di dalam suatu
#ampuran larutan untuk mendapatkan ekstrak kasar dan untuk memisahkan
#airan dari endapann+a berdasarkan berat ,enis molekul dengan #ara
memberikan ga+a sentri/ugal sehingga substansi +ang lebih berat akan berada di
dasar- sedangkan substansi +ang lebih ringan akan terletak di atas 0 u+itno-16764.
).8. :ndapan hasil sentri/ugasi diambil dan ditambahkan dengan ( ml larutan
sukrosa 3-( ! dingin- lalu disentri/ugasi kembali selama 13 menit dengan
ke#epatan &333 rpm. :ndapan hasil senti/ugasi kedua diambil ditambahkan
dengan 13 ml Na"l 1 ! dingin dan 3-( ml larutan sunlight 13;- lalu
dimasukkan kedalam tabung reaksi dan diaduk didalam beaker glass +ang berisi
es batu hingga mengental. !enurut
8/19/2019 Lapres Dna
4/8
'
sabun pen#u#i piring merupakan larutan hipotonis +ang akan meme#ah lapisan
bila+er lipid dari membran sel dan nukleus. Didalam sunlight terkandung
sen+awa :DTA 0 ethylene diamine tetraacetic acid 4 +aitu sen+awa +ang
mengikat kation seperti !g %=- +ang kemudian akan bertindak sebagai ko/aktor
dalam membantu en>im nuklease menguraikan DNA. edangkan /ungsi dari
pengadukan adalah agar larutan men,adi homogen+. etiap reagen dingin dan es
batu +ang digunakan ber/ungsi untuk men,aga kestabilan suhu sehingga
kerusakan DNA dapat di#egah 0Kimball- 166%4.7.6. 5arutan +ang sudah mengental diatambahkan lagi dengan 3-% ml kloro/orm dan
disenti/us kembali selama 13 menit. *enambahan kloro/om bertu,uan untuk
mem isualisasikan DNA serta menetralkan karena kloro/orm tidak bermuatan
sedangkan DNA memiliki muatan negati/ 0Harle+- %33(4. elain itu- menurut
8/19/2019 Lapres Dna
5/8
(
13.11. Didalam ,urnal 5angga- et al 0%31%4 +ang ber,udul @ ptimalisasi uhu dan
5ama Inkubasi Dalam :kstasi DNA Tanaman Bitti 0 Vitex cofassus Reinw 4 erta
Analisis Keragaman Genetik Dengan Teknik A*D9*" terdapat tiga langkahutama dalam ekstras DNA +aitu perusakan dinding sel 0lisis4- pemisahan DNA
dari bahan padat seperti slulosa dan protein- serta pemurnian DNA. DNA +ang
akan diisolasi didenti/ugasi agas komponen +ang besar mengendap- dalam prose
isioalsi DNA ,uga digunakan larutan buffer lysis +ang mengandung :DTA
0etilen diamin tetra asetat4 dan es batu +ang diletakkan dibawah #awan dengan
tu,uan agar DNA pada saat penggerusan tidak rusak. 5arutan buffer lysis
merusak dinding sel se#ara kimiawi dengan mengikat ion magnesium ber/ungsimempertahankan integritas sel maupun akti/itas en>im nuclease +ang merusak
asam nukleat. Cntuk memebersihkan protein dan polisakarida digunkan
kloro/orm.1%.1&. 2urnal Tenriulo 0%3314 +ang ber,udul @:kstrasi DNA umput 5aut Kappaphycus
alvarezii Dengan !etode enol Kloro/orm :kstrasi DNA dapat dilakukan
dengan metode kon esional /enol9kloro/orm +ang ditambhakan dengan sedikit
modi/ikasi- dengan penambahann kalium asetat dapat meningkatkan tingaktkemurnian DNA +ang menghasilkan rata9rata ,umlah DNA %%)-3 ngEF5 dengan
tingkat kemurniann+a 1-7%'. sedangkan tanpa penambahan kloro/orm
mendapatkan rata9rata &8%-3 ngEF5 dengan tingkat kemurniann+a 1-&). emakin
besar olume genom +ang di loading pada sumur gel- maka semakin tinggi
konsentrasi DNA +ang terkandung dalamlarutan sampel tersebut akan
membentuk pita+ang lebih tebal.Didalam ,urnal o+#howdhur+ 0%31%4 +ang
ber,udul @*" 9#ompatible genomi# DNA isolation /rom tissues o/ ri#e 0 Oryza sativa 4 /or /ingerprint dalam melakukan isolasi DNA dilakukan
penimbangan sampel +ang akan homogenkan- penambahan larutan buffer 0+ang
tersusun dari sukrosa- tris H"l- Na %9:DTA dan Na"l4. *enghomogenenan
dilakukan dengan suhu dingin agar DNA tidak rusak.1'.
15. KESIMPULAN• DNA merupakan asam nukleat +ang mengandung materi genetik dan ber/ungsi untuk
mengatur perkembangan biologis kehidupan se#ara seluler.
8/19/2019 Lapres Dna
6/8
)
• antai DNA berbentuk double helix dan tersusun atas gula pentosa- basa nitrogen-
dan gugus /os/at.
• DNA eukariot berbentuk linear dan mempun+ai protein histon.
• DNA prokariot berbentuk sirkular dan tidak memiliki protein histon.• Isolasi adalah suatu #ara untuk memisahkan mikroba +ang satu dengan +ang lain
untuk mendapatkan spesies tunggal serta si/at9si/at +ang diinginkan seperti bentuk-
ukuran- warna- tekstur- permukaan serta beberapa si/at lain +ang nampak.• *enggunaan reagen dingin dan es batu bertu,uan untuk men#egah kerusakan DNA.
ukrosa dingin digunakan sebagai larautan pelisis dan men,adikan bahan hemolisis.• *enambahan Na"l mengikat protein dalam larutan sehingga protein akan
mengendap.• unlight merupakan larutan hipotonis +ang akan meme#ah lapisan bila+er lipid dari
membran sel dan nukleus.• Kloro/orm digunakan untuk menghilangkan polisakarida- pemisahan DNA dengan
komponen lain 0lemak- protein- karbohidrat dan /enol4.• !olekul DNA memiliki si/at larut air akan tetapi tidak larut dalam alkohol.• DNA +ang ber#ampur dengan alohol akan terpresipitasi dan dapat terlihat se#ara
isual• DNA murni tidak berwarna- warna +ang nampak +ang ditandai dengan kekeruhan• DNA +ang tampak berbentuk bulat ke#ildan berserabut.
1).18.17.16. emarang- % ktober %31(%3. *raktikan Asisten Dosen%1.%%.%&.%'.%(.%). 2ulita Abigail haron ://end+27. 1'.I1.31)3%7.
29. DAFTAR PUSTAKA
30.&1. "appu#ino- 2. G. $ N. herman. 0167&4. !i#robiolog+ A 5aborator+ !anual.
Addison Wesle+ *ublishing "ompan+. !assa#husetts.&%.&&. "hai- 5."- et al . 0%3364. apid Isolation o/ Genomi# DNA /rom Asian green9
lipped mussel 0*erna iridis4 /or andom Ampli/ied !i#rosatellite*ol+morphism. International ood esear#h 2ournal 1) 11&9117.
8/19/2019 Lapres Dna
7/8
8
&'.&(. Hadioetomo- . . 0166&4. !ikobiologi Dasar dalam *raktek- Teknik dan *rosedur
Dasar 5aboratorium. *T. Gramedia *ustaka Ctama. 2akarta.&).
&8. Harle+- 2.T. 0%33(4. egulator+ e er#ises in mi#robiolog+. )th ed. !#Graw9Hill"ompan+- Boston i = ')) hlm.
&7.&6. Kimball- 2.W. 0166%4. Biologi ,ilid 1 edisi (. :rlangga. 2akarta.'3.'1. Klug- W. . $ !. . "ummings. 0166'4. "on#epts o/ geneti#s. *reti#e9Hall In#.-
:nglewood "li//s.'%.'&. 5angga- .I. !uh estu dan Tutik Kuswinati. 0%31%4. ptimalisasi uhu dan
5ama Inkubasi Dalam :kstasi DNA Tanaman Bitti 0 Vitex cofassus Reinw 4 ertaAnalisis Keragaman Genetik Dengan Teknik A*D9*" . 2urnal ains danTeknologi ol.1% No.& Hal %)(9%8).
''.'(. 5ewis- . 0%33&4. Human geneti#s "on#epts and appli#ations. The !#Graw9
Hills "ompan+- In#.- Boston iii = '(' hlm.').'8. !uslim- ". 0%33&4. Biologi !olekuler el. 2urusan Biologi Cni ersitas
Bengkulu. Bengkulu.'7.'6. a en- *. H. $ G. B. 2ohnson. 0%33%4. Biolog+. )th ed. !#Graw9Hill
"ompanies- In#.- New ?ork.(3.
(1. o+#howdhur+- . 2o+dip Karmakar. Narottam Da+. 0%31%4. *" 9#ompatiblegenomi# DNA isolation /rom tissues o/ ri#e 0 Oryza sativa 4 /or /ingerprint.:urAsian 2ournal o/ Bio #ien#es ) *age 7(963.
(%.(&. a+ed !.
8/19/2019 Lapres Dna
8/8
7
5.1. Lapora S!"! #ara
62.
(.%. A$%#ra& '(r a)