1. RANDY ACUA THALA SUREZ JESSICA LIAN ESTEFANY JIMENEZ
2. ELISA
3. QUE ES INMUNOENSAYO? Es una prueba que usan complejos
antgeno-anticuerpo (tambin denominados inmuno complejos) para medir
la presencia de un analito especfico en una muestra. Los Inmuno
ensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorio ya
que usan complejos Ac-Ag para generar una seal que pueda
medirse.
4. ELISA Se trata de una tcnica de laboratorio que fue diseada
por cientficos suecos y holandeses en 1971, que permite detectar
pequeas partculas llamadas antgenos, que habitualmente son
fragmentos de protenas.
5. TIPOS DE ELISA Los diferentes tipos de ELISA son:
Anticuerpos marcados: ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA sndwich
Doble (DAS) Heterlogo (HADAS) Antgeno marcado: o ELISA
competitivo
6. ELISA DIRECTO Consta de las siguientes etapas: Fijacin al
soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos. Lavado con
solucin salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para
eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados. Adicin de
Ags marcados (conjugados) con una enzima; si los Acs reaccionan con
los Ags, el complejo quedar solubilizado.
7. ELISA DIRECTO o Lavado para eliminar los Ags marcados que no
hayan reaccionado. o Adicin de un substrato sobre el que sea capaz
de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o colorimtrica del
producto final coloreado.
8. ELISA INDIRECTO Consta de las siguientes etapas: o Fijacin
al soporte insoluble de antgenos especficos para los anticuerpos
objeto de estudio. o Lavado con solucin salina Tween 20 como agente
tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente
o no fijados. o Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una
enzima.
9. ELISA INDIRECTO o Lavado para eliminar los Acs marcados que
no hayan reaccionado. o Adicin de un substrato sobre el que sea
capaz de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o
colorimtrica del producto final coloreado.
10. ELISA SNDWICH ELISA Sndwich DAS Consta de las siguientes
etapas: Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del
agente patgeno a detectar. Adicin de la muestra problema (extracto
vegetal, sangre, suero, plasma, etc.). Adicin de anticuerpos
especficos del antgeno a detectar. Adicin de un substrato sobre el
que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Lectura visual o
colorimtrica del producto final coloreado. ELISA Sndwich HADAS
Consta de las siguientes etapas: Fijacin al soporte insoluble de
anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar. Adicin de la
muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.).
Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar. Adicin de
anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos empleados en
el paso anterior. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de
actuar la enzima marcadora. Lectura visual o colorimtrica del
producto final coloreado.
11. ELISA COMPETITIVO Consta de las siguientes etapas: o
Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente
patgeno a detectar. o Adicin en concentracin conocida de una mezcla
de antgenos del anticuerpo utilizado en el paso anterior. o Adicin
de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. o Lectura visual o colorimtrica del producto final
coloreado de ambas pruebas y comparar los resultados.
12. Pasos generales de un ELISA 1. Tapizado del pocillo con el
antgeno o anticuerpo. 2. Adicin de la muestra problema con la
mezcla de antgenos o anticuerpos. 3. Unin del antgeno o anticuerpo
especfico al anticuerpo o antgeno tapizado en el pocillo. 4. Lavado
del pocillo para eliminar el exceso de antgeno o anticuerpo no
unido. 5. Adicin del anticuerpo secundario marcado con la enzima.
6. Unin del anticuerpo secundario al antgeno o anticuerpo. 7.
Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida. 8.
Adicin del substrato. 9. Unin del substrato a la enzima.
10.Desarrollo del color o coloracin.
13. LECTURA E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS La lectura de los
resultados puede ser valorada tanto visual como colorimtricamente.
A simple vista, pueden ser ledos ciertos ensayos rutinarios en los
que no haga falta una cuantificacin y no se presenten abundantes
casos dudosos (el ojo humano no es capaz de discernir una variacin
de 0,1 de densidad ptica) ya que dicha lectura visual tendr el
inconveniente de la subjetividad y el de diagnosticar
equivocadamente los casos lmite. No obstante, evita la adquisicin
de aparatos relativamente costosos como son los lectores de micro
placas.
14. LECTURA E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS o Una de las
grandes ventajas de la tcnica ELISA es la posible automatizacin de
la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha automatizacin se
puede conseguir con un simple colormetro o espectrofotmetro de
cubeta o con sofisticados equipos de lectura automtica de micro
placas. o Los resultados finales de la lectura colorimtrica se
reflejan numricamente mediante valores de absorbancia o densidad
ptica que se obtendrn a la longitud de onda ms adecuada para la
coloracin final alcanzada.
15. APLICACIONES CLINICAS o Enfermedades producidas por
parsitos Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosoma. o Enfermedades
producidas por Micoplasmas o Enfermedades producidas por bacterias
Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonela. o
Enfermedades producidas por virus Enfermedad de Newcastle, Peste
porcina, Rotavirus, artritis vrica, Leucemia felina. o Otras
aplicaciones Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona)
Cuantificacin de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA) Inmunopatologa
(Ac anti-DNA, Factor reumatoide, Inmuno complejos circulantes)