1. 1. RANDY ACUA THALA SUREZ JESSICA LIAN ESTEFANY JIMENEZ
2. 2. ELISA
3. 3. QUE ES INMUNOENSAYO? Es una prueba que usan complejos antgeno-anticuerpo (tambin denominados inmuno complejos) para medir la presencia de un analito especfico en una muestra. Los Inmuno ensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorio ya que usan complejos Ac-Ag para generar una seal que pueda medirse.
4. 4. ELISA Se trata de una tcnica de laboratorio que fue diseada por cientficos suecos y holandeses en 1971, que permite detectar pequeas partculas llamadas antgenos, que habitualmente son fragmentos de protenas.
5. 5. TIPOS DE ELISA Los diferentes tipos de ELISA son: Anticuerpos marcados: ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA sndwich Doble (DAS) Heterlogo (HADAS) Antgeno marcado: o ELISA competitivo
6. 6. ELISA DIRECTO Consta de las siguientes etapas: Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos. Lavado con solucin salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados. Adicin de Ags marcados (conjugados) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedar solubilizado.
7. 7. ELISA DIRECTO o Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan reaccionado. o Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.
8. 8. ELISA INDIRECTO Consta de las siguientes etapas: o Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los anticuerpos objeto de estudio. o Lavado con solucin salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados. o Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima.
9. 9. ELISA INDIRECTO o Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado. o Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.
10. 10. ELISA SNDWICH ELISA Sndwich DAS Consta de las siguientes etapas: Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar. Adicin de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.). Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado. ELISA Sndwich HADAS Consta de las siguientes etapas: Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar. Adicin de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.). Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar. Adicin de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos empleados en el paso anterior. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.
11. 11. ELISA COMPETITIVO Consta de las siguientes etapas: o Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar. o Adicin en concentracin conocida de una mezcla de antgenos del anticuerpo utilizado en el paso anterior. o Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. o Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado de ambas pruebas y comparar los resultados.
12. 12. Pasos generales de un ELISA 1. Tapizado del pocillo con el antgeno o anticuerpo. 2. Adicin de la muestra problema con la mezcla de antgenos o anticuerpos. 3. Unin del antgeno o anticuerpo especfico al anticuerpo o antgeno tapizado en el pocillo. 4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antgeno o anticuerpo no unido. 5. Adicin del anticuerpo secundario marcado con la enzima. 6. Unin del anticuerpo secundario al antgeno o anticuerpo. 7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida. 8. Adicin del substrato. 9. Unin del substrato a la enzima. 10.Desarrollo del color o coloracin.
13. 13. LECTURA E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS La lectura de los resultados puede ser valorada tanto visual como colorimtricamente. A simple vista, pueden ser ledos ciertos ensayos rutinarios en los que no haga falta una cuantificacin y no se presenten abundantes casos dudosos (el ojo humano no es capaz de discernir una variacin de 0,1 de densidad ptica) ya que dicha lectura visual tendr el inconveniente de la subjetividad y el de diagnosticar equivocadamente los casos lmite. No obstante, evita la adquisicin de aparatos relativamente costosos como son los lectores de micro placas.
14. 14. LECTURA E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS o Una de las grandes ventajas de la tcnica ELISA es la posible automatizacin de la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha automatizacin se puede conseguir con un simple colormetro o espectrofotmetro de cubeta o con sofisticados equipos de lectura automtica de micro placas. o Los resultados finales de la lectura colorimtrica se reflejan numricamente mediante valores de absorbancia o densidad ptica que se obtendrn a la longitud de onda ms adecuada para la coloracin final alcanzada.
15. 15. APLICACIONES CLINICAS o Enfermedades producidas por parsitos Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosoma. o Enfermedades producidas por Micoplasmas o Enfermedades producidas por bacterias Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonela. o Enfermedades producidas por virus Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vrica, Leucemia felina. o Otras aplicaciones Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona) Cuantificacin de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA) Inmunopatologa (Ac anti-DNA, Factor reumatoide, Inmuno complejos circulantes)