Download - Cloning and expression of flavone synthase II from Gerbera hybrids

Transcript

������� ��� �� ��� �� ����� ����� �� ���� �������������

����� ����� � ��� ��� ��������

��������� �� ���� ���������� ���������� �����������

�������� �� ��������� �� � ! " #�������� $�����%

�������

�� ������� ������ � ����� ���� � � ��������� �� ��

���� ��� !� � ��� ��� �"��� ����� ����� ���

����� �� �� #$%&'(������ ��������� &)*+

��������� ���� �,� ������� ���������

�-�� ������� ��� ,��� �� �������� .��/ 0 ��

�� �� .�� ��0 ���� �� �� ���� ���� � ���������

&)*+ ������� .���%%�1�0 ,� � ����� � ��� �

���������� �� ���� �����2� ,��� �� ���� �����

�� � �� �� ��� ��� ��(������� ����� ��

��������� &)*+ ������ !� ����(����� �%#$

.�3&45670 ,���� �������� �� ���(������ ���� ���

���� �� �� ���%%�1� 2��� ,� � ����� ��� *�(8$�9

��� ��(��(�� &�8 ,��� �� ���-� �����

#������ ���� ����� � �� ����� 8#$ �� ������� ������

�������� ���� �� �3&4567 �� ,� ���� ���� ����� ��

��� ,��� �� �������� ���� ��/��� ���� �� ���� �����

��� ������ ��,� �������� �� �� ������ ,���

�� �� ��� �"�� �������� �� �#� �� ��� �����

������������ ����� �� ���� �� � ��� �� ���

�3&4567 ������ � �� ����� ��������� �� :;)�<(�����

���� �� � ����� :;)�<(������� !�� � �3&4567 ,�

��,� �� ���� ����� ����� �� !�� � �� -� �

����� �� �� � ������� ��� �� ��� �� � ����������

�#� �� �%#$ ���� ���� ��� ��� !� ������� �� ��

����� ���� 2��� ����� ���� �3&4567 ��� *)=

������� ,��� �� 2��� �� �3&456;� ,���� ��

������ �� ������ � � .7�0(������� 7(��������

�� ������ ��� �� ����� >

������������

������ ��� ������ � ���� �������� ���������

������� ������� ��� �� ��� ���� �������� ���

�������� ������ � ����� ������������� ������

������� �������� �� � ! �" ��� ���� ��� ���� �����

����� �&����������� ��������" � ���������� ������

#��� ������ $�� ����%�� �� � &��'���������������

���� ���'������� �(��� � �� ���� )*+)"� �� ������� �� �

$��� ���� �� ���� ��� ��� ��� ������ �������� �� �� !

��" $�� ����� �� �� ��� ������ ��������� �� ������

��������� ,���� ��������� �� ��������� ������� $��

����� �� ��� ������ ���� �� � ����� ���� ���$���

-�& ��� -�. ������ )" �/�� ��� ��0����� )**1"�

2� ����� ��� ������ ���� �� � ! �� � ������ �� ���

���� #�� $�� ��� ���� �� ��� %�� ���� �3����� ���

��0����� )**+"� (�� ���� � ������� �4� �� ���

5����� �� )*+6� !�� � �� ���� )*++" ������%�� � ! �� ��

� �� ����� ��� ���� 7189 �7189" �����'��������

#��� ���� �� ������������� ���� ���� ��������

$�� � ����� � $��� �:7/� ��� ���� 7189���� ����

�-72"� ��� � ��������� $�� � �� ������� �� � ����

�� �'������� �� ����� �� ��� ��������� �� �� �����

��������� #�� ���� ���� ����$��� ���� �� �'�����

�� �������� ��� ��� �� � �� ������� ��������

������������ ��� ���������� ���� ��� ����� ��� ��

�� 7189 �� ����� �� ����'�% ����� �� '�������� ���

������ ��� ����� ���� ������ �(�$� �� ���� )**1�

:��� ��� ����� )**8� ! ���� )**;"� �� �������

��� ���� .99 ���� 7189 ��<��� �� �� �������� ��

�������� ��������� ��� �� ����%�� �� ����'������

1; ���� ������� �:�2� ����� ������ ������ �����"�

�� ������ �� ���� ���� ������� ���� ����� ��

7189� $��� ��� ��0��$� ��� ������ ��� ��������

�� ���� �� ����� ���� ���� �� �������� �� ���

������������� ��� �������� ����$��� ��� ����

��� ����� -�������� 1�����'���� �-1/" ������ ��

��� -=76.� ��� ������� ��� ����'������ �� ������

� �� �/���� �� ���� )**8"� #�� ������� 1� ������� �� ���

����� �� ��� (���� ��� ��� �� ���������� �������� .������'���� ��.�/" ��� �������� .�� 8������'������.��8�/" ������ ��� (���� ����'������ �� ����������/�� ��� ��0����� )**1"� #��� �� �� �������

���� �� ������� � �� ��� ���� ���� ������� ���

��� � ���� $��� ���� � �� ��� ������ ����0� ��

��% ���� �����'������ �� � �� ����'����� ���������

�(�$� �� ���� )**1"� �� �.�/ $�� ���� ��� 7������

�-=768(&" ��� ��� ��� ���� �� ��� ���� ���� � $��

������%�� �(����� �� ���� )***"� �.��8�/ $�� ����

��� ����� ��� �� ��� ������ �� ��� -=768� �����

�/���� �� ���� )**."� #�� ���� �� � ! ��� $�� � �� ���

�� �������� 7189 ������ �� ��� �������� ����$���

���� ��$���� ��� ���� ���� ���� ��$�

(���� �� ��� ������ ���� ������� ��� ������������

�������� $�� � �� ������ �� � %������� �� 7189

������� �5������� )*+*"� ��� ��� ���������� ���

�������� ���� �3����� ��� ��0����� )**+� #�� �

��� /��� )**6"� 7-2 �������� $�� � ���� ���� ������

2� ����� &. >��� )***� ������ )) ? ���� )***� � ����� &+ ? ���� )***�@�� ��������� � ���' A1* +);) 6).++;������ ������B�$������������ ������"�

��� &���� '������ �)***" 7+�8"� ;))C;)+

�)*** (� 0$� ! ��� � D�� ;))

�� ����� ����� ��� �� ������ 7189 ����� �/���� �� ����

)**.� ! ����� ��� E��� )**+"� $�� ��$ ����� �� �� �

����� ��� �� ��� ��� � ����� �� ��� � ! �� 7189 ����

��� $������ �������

�� ���� ��� �� ��� %�� �� ����� ��� �� �����

�� � : � �� ����� � ! �� $�� � ������� ������

��������� �� ��� �������� ����$�� ��� �� ��� ��� �����

�'������� �� ������

8 ���

(�������� � � 5���� �)*� ������� ����+���

+����������% �, �����+ &� " ������

7������ ��� ���� � ������� $��� �������� $������ ����

���$�� ���� ��� �������� �� ������� �� ������ �� ���

���� #��� � ! �� � ������ $�� ��� ������ �� ���� $��� ���

�������� ��� ���A �" ��� ��� �� ���� $��� � ������

���� ��� ��"� ��������� �� ����� ��� $������

F2�����G ��� ������ � ������ �� � ! �� $�� ����� ��

�� ���� ���� ����������� ����� %�� ���� ����� &"�

���� ����� ���� ���������� ���� ���� ��� ���� �����

�� ������ �� ������ ���� �� ��� �3����� ��� ��0�����

)**+"� #���� $� ������ �2 � ���������� �������

��� ���� ���� ������ �� $������ ���� $��� ��� ��������

��� ��A ��� ������� $��� � ������ ���� �� ����� ��

���������� ������ �::�2#�7-2"�

#�� ::�2#�7-2 ����� � ������ ������ %�� ���

����������� �'������ ������ � �� ���� $�� ����

��%�� ��� �������� ?�� 7-2 ���� � �������� ����

��������� ����� � �� ��� ��� �� 0��$� ��0����� 7189

��<��� ��� �� ���� ������ ����$��� ��� ������� 7189

%������� ��� ���� � 8� ��� .� 7-2 ������ #�� ���

���������� �� -��::�6� ������ ."� ��������� ��� .�������� ����� ����� �� � 7189 : � ������� ��� ���

������������ ����� �� %�� ���� ���� �61 ����� � ���"

��� � )+;�� ���������� ������ #�� ����� $�� ��

� ���� � $��� ��� ��������� ���� �� ��� ����������

������ ���

��� ���� ��+ � ����� �, ������� � 5���� -% ))+.�

����� ��� ������� ��%��� ��� ���������� �'����

���� �� ��� �������� 7189 �������� #��� ��� ���� $��

������������ �� �������� ���������� �� )) ������ �� ��$�

���������� ��� �� ����� �� $������� /�����������

���� ���� ������� � ��������� �� ���� 2 � �����

-��::�6� : � ���� ������ � )�6 0� ���� ��� ������

�� ������ �� ��%��� $������ ���� ��� ������ $��� ���

�������� ��� ���A �" ��� ��� �� ���� ��� ������ $���

� ������ ���� �� ��� � �� #��� �� ������ $�� � �� ���

������ ��� �������� �� ������������ ����� ��� ��

���� ��� ������ 1"� -�� ��������� $��� � ! �� � ������ ���

������ � ��������� ��� ��'���� ��� �� ��� -��::�6�

���� ��� ���0�� �� ����� 1 ��� ���� �� ���� ������ 1"�

(�������� � ��� �/��+ �)*� ����� � ��� 5���� &� "

�)*�

�� ��� �������� �� ��� 8����� : � ���� ��� 8��2�-E�� ���<�� $�� ����� ���� ���� ���� ��� �% �����

�5!76C*� ��� E'�������� �� �����" ��� -��::�6�

$�� ���� ��� ���� �$� 7-2 ����� � )�1 0� �������

�-��#�H (�#�� ����� ." $�� ������� �� ������ ��

������� $��� ������� ������� #�� �������� �������

����� �������� ���� ��������� ����� � �� ��� ��� ��

0��$� ��0����� 7189 ��<��� ��� �� ���� ������ ����

$��� � ���� ����� ��� ������� ������������ ����� ���

����� ; E������� �������� �� ������� ��� ����������

����� 7 #��� ��� ����� � ! �� � ������ ��� ������ � �������� ��$������ ����� F2�����G�I���� �� ���� ��� ���� ��� 0"� ��������� �� ����� (�� �������������� � ������ �$����" ��� ������ ������ ����" ��������� ����� ���� �� 3����� ��� ��0���� �)**+"�

;)& 0���� ������� ��+ $��� #��1����

�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+

��� ���� � .� �������� �% 7-2 ���� �5!7*" �� �����

#������� ��� -��#�H (�#� ��� ��������� ��� 8�������� ����� ����� �� ��� $������ 7189 : � �1;9

����� � ���" ������� $��� � &.�� ����� �����

2, ������� � ��� 5���� &� " �)*� �� %����

#� �������� $�� � ��� ����� ������ �� �� ���� �� ���

������� ����� �� ��������� 7-2 $��� ���� ��� �%

����� �-��� !)/J2� ��� E'�������� �� �����" $��

������� ���� ������ ��� ����� �� ��� �������� 7189

����� ����� �-=7*.(&�?2�� ����� ." ���� ��� �����

�'������� �� �� ��=E!&" $������ �� ����� ��� �� ���

���������� 8� ������������ ���0��� ��<��� �� #��� $���� ����� �� ���� �� ���� ���� ��������� 8� ����������� ��<��� �� ��� ������ ����� ����� ������ ����

�'������� �� ����� �7����� �� ���� )**;"� � ! �� � ������

$�� ���� ��� �� �� ����� �� ����� ������ ��� �����

����� � I ! ) ��������� $��� -=7*.(&�?2� ��� ��� ��

�� ����� ���������� ��� ��� ������������� �����

����� � I ! ) ������ 8"� #�� ���� � $�� � $�� �����

��� ��������� � �2" �� � �������� $�� ������%�� ��

�������� ���" �� ��� �������� ������ ������� �� ��

����������� $��� �� �������� ������ ,��� ���

���� ���������� ��� �� ������� �� ����� ��� �E2�" ���

�<���������� �D�K" �� �� ��� �������� �� ��� ���� ����

�������� ������ �D�" ��� 6� 1��������'������� ����� ���

���$�"� #���� ����� ����������� ���� ��� �������

$������ 7189 : � ���� �� ��� ����� � ! ���

0�3����� � ��� 5���� &� " �)*� ����� �� ���������

#*0 ((

#�� ������� ��� �������� )�6 0� : � $��� � �����

���� ������ ���� �?2�" �� )8.;��� #�� ?2� ����

�� � ��������� �� 8)) ����� � �� ������� �� �

���� ��� ��� �� ���� �� 8+�& 0:�� #�� ���� ��

����� � �� ��<��� � �������� ��� ��� ��� �������

����� � ��� �� ��� ������������ ����� ��� ��� L��J

5"5'�:JE"#�#J!"M� $�� � �� ������� �� �� �������� ��

�'���� ������� ��� � ��������� ��������� �� �'�

�� ��� ��������� ������� �� �� ��� � ������

� � ����� ��� �� ��� 8� �������� ��� �� ���� ����-�������� �� ��� ���� �� ����� � �� ��<��� � $���

0��$� 7189 ��<��� �� ������ ���� ��� ������� : �

������ �� ��� -=7*. ������ 3������ ��� �������

: � �� ����� ��������� �� ��� � ���� ��������

��<��� � �� � �&!"��������� &�����'���� ��&/"

�-=7*.()� �0���� �� ���� )**+� 5��(��0 � ������ ���

�(99).+9" ��� � �� � �$�%�%������ ��������" $��� ��

�������� ���� �� ��� ������ �� 81N ������ ;"�

-����<����� ���� ��� $�� ����� -=7*.(& �:�

����� ������ ������ �����"� 7��������� �������

����� ��� ���� �� ����� � �� ��<��� �� �� � ���� ��

����� 5 !�<��� � ��� ��� �� 7189 ���������� �������� ��� $�������-������� ������O ��������� ��������� ��� ������ � ������ �'���� ������������ ��� ������������ ������

����� ) E'������� �� ��� ���� ����-��::�6� ���� ���� ��� �� ����������������� ��� �� ��� ����� �� $������������� $��� �������������

#������ �%������ (( ���� ��� 5���� �%���+� ;).

�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+

���� 7189� ������� �� ��� ������������� ���

�������� ����$�� �� ���$� �� ����� 6� �� ��� ���� ����

���� -=7*.(& �� ��� ����� �� ��� �&!"��������� &�

����'���� ���� �� ���� 7189��

%� �� ���

�� �� ����� ��������� ���� ��� ���� &99999

�� ����� ���������� ��� �'��� �� ����� ��� ���� ��

���� )9N ���� ���� ��� ������ �� ���� �:��� �� ����

)**1"� 3��� �� ����� ���� ����� �� �� � ����� ��

�������� ��������� ?�� ���� �� �������� �����

������ �� ��� ������� $�� � �� $��������� ���

$�� � � � ��� ��� �� ��� ��$�� �� ����� �����

���� ��� ��� ��� ��� �� ���� ���� ���� ���� �� � ��

������ ����� ��� ���� �����$���� )**1"� #��� ���

� � �� ���$ �������� �/������ )*6+"� ���������� ��

��$� �������� �5��� ��� 4����� )**)� ! ����

3�� ����� )*.;"� ���� ��� �� ��������� ������ �� ����

)*+;� 7���� �� ���� )*+;� 2������ �� ���� )*+;"� �����

�������� �� �������� ���� �C���� ����� �����

�/����� ��� 5���� )**1"� ���� ���� �������� ��

����� ��� ����� ����� �(�P �� �� ���� )**+"� ��� ��

����� ���� �� �3������� ��� 4����$���� )**1"�

(� ���� �� ��� ������� � �� �������� �� �� ��������

���� ��� �� ����� �� $�� � ���� �� ����� ��

������� �� ���� �������� ��� ����� �� ��� ������

��� ��� �� ��� ��� ���� � ��� ��� ��� �� ���

��� �� ���� #��� $�0 ��� ���� ��� %�� �� �����

����� ��� �'������� �� ��� � ! �� �����

���� � ::�2#�7-2 ������� $� ��� ������ %��

���������� �'������ ������ �� $�� � ��� $�� ������%��

�� � 7189 ��<��� � �-��::�6�"� ���� ���� 2 �� ��

�������� ��������� �� $������ ������ $�� ������� ��

����� �������� ������������ ��� ��� �� ���� ��� ��

���� $��� ��� �������� ��� ���A �"� �� � ������ ����

��� ��"� $�� � � 0 � ! �� � ������� �� ������������ $��

������ 3������ ��� ���� ���� �� ��� ���� ��� ����

����� ��$� ���������� ��������� �� ��� �������

������ � ������ ��� ������ � ��������� ���� �����

������ &"� #������� ��� ���� ���������� �� ���

-��::�6� : � ��� ��� �� �'������� ������ �'�

�� ��� �� � ! ���

#�� $������ 7189 ������ : � $�� �������� ����� 8�2�-E �� ���<�� ��� ���������� 7-2� �� �'�� ���� ���

������� 7189 : � ��<��� � ��� ���� ������� �� 7189

��<��� ��� ,��� �������� $��� 0��$� 7189 ���

������� ��� ���$�� � ���� ������� $��� -=7*.()� �

7189 ������� ��� �� ���������� ����������� �����

�� �� $�%�%������ ��������� #��� ��� $�� ������%�� ��

�� ��� �&!"��������� &�����'����� #�� �'������ ����

���� � ������� ��� �������� �� � ������ ��� &�

����'���������� �&�?/� �2" ��� �<���������� ���

�2� ���� ������ #�� ������ �� $�� ��� ����� ���

&�?/� �2 ���� � �� �������� �� ��� ���� ���� ������

����� ��0���� �� ���� )**+"� (� $4 �������� -��� ����

����� * 2���� ���������� �� ��� ������ ����� �� � ! �� : � ����'������ �� ������#�� : � ����� -=7*.(&�?2� $�� ���� ���� ����� �'������� �� ���=E!& �� I ! )�-=7*.(&�?2�"� E����� �'�� �� �� ������������������ �� I ! )" ��� ����� ��������� $��� -=7*.(& $�� ������� ������� ����� �� � ! �� � ������ ����� �)1-"���������� �� �������� ���������� $��� �������������

����� ? �������� �� -=7*.() ��� -=7*.(&�-������� ����� � ��� �� ���� ���� �� ������0� ��� ����������������������� �� ���� ���� �� �����

;)1 0���� ������� ��+ $��� #��1����

�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+

������� �� $� �� ������� ��� �� �� ���� )*+1"� �� �� ���

$� 0��$� ���� &�?/���������� ����� &�?/� �2" $�� ���

��� � ��������� �� -��� ���������� ������������

�4�� �� ��� ����� )*+6"� #������� $� �������� ����

-=7*.() ���� �� ��� �&!"��������� &�����'����

$�� � �� ������� �� ���� ����$��� �� ������� ������

����� �'������� �� ��� ��� -=7*.(& ��� ���� �� ����

���� ��� ���� ��� ��� ��������� ���� �� ��� ������

������ �� � ��� � �������� �� �� ��� ��� �2 $������

��� ���� � ��������� �� ��������� ������ ������ �����

E2� ��� D�K �� ��� ��������� �� �� ��� �������� �� ���

���� ���� �������� #��� ���� ��� ��� ������� ���� ���

���� $�� � $�� �� ������� $��� ��� ��������� ������

� ������ ��� ������� � �� ������� �� $������ �����

����� ��� %�� �� ����� ����� �� : � ����� �� � !

���

�� �������� � �� ���� �� ������ �� � ! �� ��� �&/�

���� ������ �� ��� ���� �� ��� �������������� ��

�0��� -/�-/ ����� ������� �� ��� �������� �� ���

���������� ����� ���� �3������ )**+"� �� $�� ���$�

���� ��� ����� ���� �� ��� ������ �� �� � ���������� ��

��� ����'����� ����������� ��� �� $�� ���$� ����

����� �$� �������� �� ����� ����� � ������ �� ?/

��� ��� ����I"�?/ ��� ��� �� ��� �������� ������'��

��������� -=7*.()" � ��� ����� ���� �� ��� �� ���

������� ���� ������� �� ����� ���� �� $��� ��� ���

��� ��� ��� ���������������� -=7*.(&" ��� � �

������ +"� � ����� ����� �� ��� �� ���� ���� ��� ��

��������� �� ��� �������� �� ����� �� -=7*.() ���

-=7*.(& ��� /��� ������ ������ �����"� � �����

�'�������� ��� ���� ����� �� ��� �� ���� �� ������ ��

� ! � �(��� �� )**9"�

!�<��� � ������� �� -=7*.(& $��� ���� -=7189�� ���

���� ��� ������ �� ��� -=7*. ��������� �������

������ ���������� �� ����� ��� ��� ��� ���� �� ��

� ! �� ���� ����� ."� �� ������ ��������� ������

����� 1 7��������� ������� �� ���� 7189 ������� �� ������������������� ����$���#�� ���������� ��� $�� �������� �� ��� ���� �� ��� ��'�� �� ���� ����� �������� $�� ��<��� �� �� 7189 ���� ������� �� ���������������� ��� �������� ����$��� #�� � ������ ������ ��-=76.�1 -����������� ������ �������� 1�����'���� �-1/" �Q.&8;."�-=76.�)& ������ ������� -1/ �,)**&&"� -=768�) &������ �%���+��������� .��8������'���� ��.��8�/" �Q&&818"� -=768�+ -����������������� �.��8�/ ��>9))+;&"� -=768(& &������ �%���+� �������� .������'���� ��.�/" ���)88.&&"� -=7+1�& �%�� ������� ���������������� 8�����'���� ��8/" ���)89++)"� -=7+1�. ��3��+�������%������� �8/ ���).*8.&"� -=7*.�) �� �. $�%���� ��, �:+.*;+� :+;.8)��� =)91*&"� -=7*.() $�%�%������ �������� �&!"��������� &�����'������&/" ��(99).+9"� -=7*.(& $������ ������ � ! �� ���)8;*6;"� -=7*.-)$�%���� ��, ���9&&1;&"� -=7*.-& $�%�%������ �������� ��(9&.;.;"�-=7*.-. -���� ��������� �>&1.+91"� -=7*.E) $�%���� ��, ���).81+8"�

����� @ 3����'��������� ��� �������������� �� ��������� ��������� �&!"��������� &�����'���� ��&/" ��� ������ �������� �� �� ! ��"����� ������#�� ������� �� ������ �� � ! �� ��� �&/ �� �����

#������ �%������ (( ���� ��� 5���� �%���+� ;)8

�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+

�� �� ����� �� )6 ����� � ���� $�� � �� �������� �� ���

���� ���������� ��� �������� �� ��� ������ �� ���

�� ����� ������� �3��0��� �� ���� )**1� !��� �� ����

)**9"� �� ���$�� �� ��� ���� ������� ������� � �����

����� �D77!7RRRR7" �� ��� ������ �=�����0� �� ����

)**."� ��������� ��� �'���� ������� �� 0�� ��5#:#�#J

!"" $�� ����� �� �� ����� ������� �� � -=7*.

������� #��� ������ ������ 0��$� �� L��J5"5'�:J

E"#�#J!"M� �� ������� �� �� �������� �� �'���� ������� ���

� ��������� #��� ���� ���� ���� ��� ���������� ����

���� � ������ �� ��� ��� ��� ������ 7189� �:��� ���

����� )**8"� #��� ���� �� �'�� ��� �� ������� ����

�����'���������� �! ���� )**;"� �� ��� ����� ���

7189 %������� �� ��� ���� ������� �����

�7�5R522R-75"� $�� � �� ����� ������� �� � 7189

������������ 7��������� ������� ���� ���� ���� � ! ��

��� �&/ �� ���� ����� ������ 6"� ��������� � ���

���������� ��� ��� �� ��� ���� �� � ! �� ��� ���

���� ������ �� ��� -=7*. ������ � ���������� $���

��� ���� 7189 ������� ��� ������������� ��� ���

�������� ����$�� �� ��� �� ��������

�� ������� $� ���� ���$� ���� -=7*.(& : �

�� ���� � ! �� �� 7189 �� ��� �������� ����$��

��������� �� ������ ��������"� #��� ������ ������

��� ���� �� � ���� �� �������� ������������ ���� ��

� ���� �� �� �������� S�� ���� �� ���� ����$�� ������

�� �������� ���������� �� � �� �������� �����������

�������� ������� �������� ��� ����� ��������� #����

���� ��$ 7189 ���� ����� �� ����� �� ��������

����� ��� �� ���� ��� ��������� �� ����� ���

������ �� ������� ��� � ! �� � ������� #�� ��� �

�������� �� ������ �������� �� �������� ���� �������

�� � ����� ��� �� ���� ��$ ��$� ���� ��� ��

������ � � $��� ���� �� � ����� �� ��� �� ����

������� �� �� ����� �'������� ��� ���� �������

������� �� ��� ���� ���� �� �� �������� ��������

��� ��� ��������� ��� ��� �� �������

9�������� �������

&���� ��������� %���� ������� ��+ �����+�

5����� �� ��%��� ����������� ��� ��������� ��A �" ��� ��������������� ��� ��������� �� ��" ���� �� $������ ������$�� �������� ��� ���������� ��� ��� ���� � ��������������� �#��� )� 3����� ��� ��0����� )**+� #�� � ��� /���)**6"� #�� ���� �� ������ F2�����G ���A �" $�� �������� ���#�� ��� �:� 4$�0�� ��� ��������"��� ���������� ���� �'�������� ��� ����� ����� � I! ) ���

��� �'������� �� �� �=E!& $�� ���� ����������� 5����������� ��������"�

(�������� ��+ ����%��� � 5*�

#��� 2 � ��� $������ ���� �� )) �������� ������ �� ������������� ������ &" $�� ������� � ����� �� 5������ �� ����)**." ����� &99�� �� ����� ���� ������� #�� �������� �� 2 ���� ��� ����� � �� : � $�� �� 0�� �� ������ �� �� ���������� ���� �������� ������ ��������� ����� ��� ��������)9 �� ���� 2 � �� ���" ����� ���������� ������ ��� ���/������ R �������� �������� (� ��� (���� �$����5�����" $�� ������� � ����� �� ������� �� ���<����!�����0 �� ���� )*+*"� .&7������� �� ����� $�� ������0������� 2��������� 4�� �������� (� ��"� 7����������������� ������������ $�� ������� �� 1&�- �� )9C);� �� 89N ��J�"��������� 8�!!7E� 8�:������G� �������� 9�8N �$J�" !:!��� )99���C) �������� ����� ���� : �� #�� ��������$�� $����� �$� � �� &�!!7E� 9�)N �$J�" !:! �� 1&�- ��)8���� �� � �� )�!!7E� 9�)N !:! �� ;8�- �� )9����K�����% ����� �� ��� ������������ ������ $�� ������� ������ ������������ �(�!)999� ��S�%�� 4�����$�� �0�����>����� ����$�� �� 0��� #� �� 2������� !�����������5�����"�

)��������� +�� ��% � �5*�

2����� ���� ������ $�� ������� $��� !���� ��� �� ��������� ������ �5�� � (2D� 7������ ,4" �� � ���� ����� �� &8 ����$��� ��� ������G� ����� ������ :��������� ������ ���������� �� ���������� ����� $�� ���� ��� � ����� �� ������� � �� D���� �� ��� �)**." $��� ���� ����� ��������� �����7189���� �% ������� ����� ��� ���� �� ���� ������#"����� �� ��� ���� �� ! ����� ��� E�� �)**+"� 2�����%��7-2 ���� �� $�� ���� ���� ��� �-2&�) �� �� ����� � #�-����� 4�� ����������"� 2������� �������� $�� ���E�� ���� �3������� ,!�"�

�/5�-2

$������ �������� �% ����� �5!76C*" $�� ���� �� ��� �����<��� � �� -��::�6� ��� $�� ���� �� � 8��2�-E $�� � $�� ���� ��� ��������� � ����� �� ��� ������ ���G� ����� ������ ����� ��� 0�� ��� 5�� ��(2D� #��� 2 � ��� ����� $������� ���� ��� ����� 5!76 �8���#-##-���5#5###--#-5�##-�.�" �� ��� ����� ���� ���% ����� ��� ������ ����������� ����� 8� �� ��� ������� #�# ���� � $�� ���� �� � �������

!��� ; :������� ���������� ��%��� $������ ���� ��� ������

$������ ����J ����� 5������� ?����

#�8+ ���A ��� #�� � ��� /�� �)**6"7���� �0� ��� ��� #�� � ��� /�� �)**6",���� ��� ��� #�� � ��� /�� �)**6"-���� ��� ��� #�� � ��� /�� �)**6"2����� ���A � #�� ���)16C)); ��� ��� #� 8+�!@

)16C))+ ��� ��� #� 8+�!@

)16C)&1 ���A � #� 8+�!@

)16C).6 ��� ��� #� 8+�!@

)16C).* ��� ��� #� 8+�!@

)16C)19 ���A � #� 8+�!@

)16C)1; ��� ��� #� 8+�!@

)16C)1+ ���A � #� 8+�!@

)16C)8* ��� ��� #� 8+�!@

@�!T ��� �������

;); 0���� ������� ��+ $��� #��1����

�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+

�� %������� 7-2 �� ��� ����� � �� ��� ������� �� �� �����5�� ��(2D" ��� 5!7+ �8����#55��-�-�-�-����#-#�--�.�"��� ��� �� ��� ���� 7-2� 8� �� ��� ������ %������� 7-2���� � $�� �����%�� $��� �,�7 �5�� ��(2D" ��� 5!7* �8��#-�--�-#5�5�5##-#-#-�#55�.�"�

)*� ��3������� ��+ ����%���

(��� ������ �� ��� : �� $�� ��<��� �� ����� � !�<������: � ��<��� ��� 0�� �������� (� ��"� L.8!M��#7 ��- �E� �$���� 5�����" ��� ��� �% ������ ������ ������3�5�(�?#E-/� E������� 5�����"� -������ ������� ����� : � ��� ������ ����� � �� ��<��� �� $�� ���� ��� �������� ?3�5� ����$�� �� 0��� �?'��� 3�� ��� ?'���� ,4"� ����� �������� ��� �������� �� ��<��� �� ������� ��� ���5��(��0� -D,!#�D� �#������� �� ���� )**1" $�� ���� ��� �������� $�� ��$� $��� ��� #2EEI�E� �7���� )**;" ������

������������ �, ������� �� %����

#�� ����� ����� �� -=7*.(& $�� ������� ���� ��� ����� �� ���=E!& �� ��� ���� �� ,��� �� ��� �)**1"� � %�� 7-2 $��������� �� ���� � �������� ������ �� ��� 7189 ?2� ���� ������� � 0�� ���������� 8� ���������� ��<��� ��� #�����$��� 7-2 ����� $�� ����O -��� !)/ �8�� ������� ��-�--�#5��#�-� -#--�.�" ��� -��� !)2 �8���5�#�5�--5�-#5--�#-��5���5-�.�"� #�� ��$�� ���� �������� � 6��/) ���� ���� ���� ���������� ���$�� �� ����#5 ���� ���� ��� ��� ��'� )9 ����� �� ��� ������ ����� #����$������ ���� $�� ��� �% �� ��� .� ���������� ����� ����� ����� #� �� ������ ��� ��� ����� �� ��� 7189 ���� ��� ������'������� �� ���� ��� ������ 2��2) ���� ��$������ �� ��������� �-2&�) ����������" $�� ����� #�� 7-2 ����% ����� $��������� $��� E'���� /��� ������� ������ ��' � ����� ����� ������ ���G� ����� ����� �(������� 3�������"�=���� ����� � I ! ) $�� ����� �� =75�� !5� ��� =75E

������� �� ��� ���� �� ,��� �� ��� �)**6"� #����������� $������ �� � ����%�� ������ � ����� ������ ����� 89 �� ���: � �5���� �� ���� )**&"� 3� ������ $�� ������ �� ��� ������������ �,��� �� ���� )**1"�

����% � #*0 (( ���%�� �������%

#�� ������� � ! �� ������ ������������ ������% ����� ������ ��� <�����% ����� ��� ������ ������������ $�� �������� �� ��� ���� �� 3����� ��� ��0���� �)**+"�

$����,������

�� $��� �0� �� ����0 -� ! ����� �D3, 3�P � ���" �� �� ��� �� ����� ��� 7189 ��� �% ::�2#�7-2 ��� �� /�� �5!� �������" �� ��� ������ ������� ��� �� ���� �� ��������� ��� $��� �� ����0 3� ��� ��� !� 5�P � �#, 3�P � ���" �������� ������ ����� �� ����� �'������� ��� :�2� ���� ������ -�������� �� !���������� -��� ���� 7189 ���� ������ ������ ��� 7189 ����� #��� $�0 $�� ���� �������� �� ���:���� �� ��� ������������ ���� �:�5"�

8����

$������ % � ���� $ � ���������� ' ��� A�2���� B �)*+1" EH ������� �H������ �G���� ���� ���������� ��� � ���� �� $�%�%�������������� D� &������ ��7+�������� &�%�����7�� ��� ;@� )69C)61�

$�� ��� ! � $���� ! ��� $���� � �)**+" ������% ����� �� � ��� ���� 7189 : � �� ����� �&!" ��������� &�����'���� �� � �� � �$�%�%������ �������� D� ���� ���"$�� � �������� � ������ �������� ��� ������ �������� ���#260 ����4 )5;� &+6C&*9�

6�C ��� ' � 6����� ' � '���� B � 8���� 6 ��� D���� $ �)**+"�������� ������� ��� ����� ������ �� ������ �����'������ ������ ��� ���� ������� �� �� ��� ��������� �� ���� ��������� �4 2���������8���� 51� )16C);.�

6��,��� � & � 6�"��� D ��� E��������� $ �)**1" 7��� ��� ���� 7189� &�%����������%� 51� )1*)C)89;�

6��� ��� > �)**9" 7��% ����� ��� ��� ��������� �� �������������� �� � &��'������������������ ���������� ����46������4 6�� �%�4 7@7� )8&C);9�

6��� ��� > � '���� F ��� ��� ����� ' �)*+)" -�������� ���������� �� ������� ������������ ��� ������ $��� �������� ������ ��� � ����� �� ������ �4 *���������45?�� 61&C689�

6�������� � � 6����(8,��� � � '������ ! $ ��� �� ��� B � �)***"�������� ��� ��� ��������� �� � �������� .������'���� : � ��� ���������� �� ��� /�) � �� �� 7������ �������&���� '4 ;4� 11)C18)�

%�� �� � � 6���� �� � � ������� B & ��� F���� % �)**1"��� ���� ��� �������� �� ���� ��� ���� 7189� ��&�����+���� � ��� ��� (������������ -�������� �-%�������� &� " �D� ���� 3�-� �� ���� ���"� D�����O >���D����� E����'�� ��� &.C.9�

%�� �� � ��� #� ��� % �)**8" :������� ��� �������� �� ����7189 ��� 7189 ��� ������ �� )��� ���������� ��+ )���(����������� �:���� �� ��� ?G4����� :�7�� ���"� D�����O ��������� )6)C)+6�

������� B > � F�� ��� D 9 � 8� �� > ��� B��� ���� F 6 �)*+;"�������� � �������� �� ��������� ����� �� 5�������������� �� ���� �������� ������ �� ������ *������ 57)�*9C*&�

���"� % � �� B��� $ � F��� � 8 $ ��� ���� ��� 8 ' �)**&"������� ������ �� ���� ��% ��� � ������������ �� ���� ������ ��� *���4 ���+� 5��4 7+� )1&8�

��������� � � 6������ � 9 ��� �������� & $ �)**." 2�������� �� �������� ������������ ����� ������ ����������� &����-���� *� .6*C.+6�

���"��"� � B �)*+*" #�� ��� �� ������ �� ��� ���� 7�189�� &��������4 5��4 )+� &1.C&++�

����� ! ��� D����� ! �)**)" !��0�� ��� ���0��� !���������� ����� ����� C I������� �� (�P ��������� ����84 -���4;+5� )6C..�

'������� B 6 �)*6+" #�� �� ������ ������� �� � ���$ ��$�������� �� ��%8��+����� ������� ���� ��� �� ���� -� �������&�%����������%� ;1� *)8C*)6�

'������� B 6 ��� ������ 8 B �)**1" ��������� ��� ���� ��� ����� #�������+�4 �+������ �� 5������� 0���� 9:�; �/������>�(�� ���"� D�����O -������ U /�� ��� 8+*C;)+�

'���� F ��� ��������� � �)**1" (����������� �� ���������� ����� #�������+�4 �+������ �� 5������� 0���� 9:�; �/������>�(�� ���"� D�����O -������ U /�� ��� 1**C8.;�

'������ ! $ � 6�������� � � > ��� % 8 � !������ 3 � '������ � % �������� B � ! � >�� � 3 � ������ 9 � ���� ��� ! F �������� �� 9 � �)**." -����� ��� �'������� �� ��� ����7189 ����� ������� ��$� ���� *������ 5??� &6;C&6*�

'��"� � � �����C ��� � ��� �����C ��� B �)**8" -�������� 1�����'���� ��� -����������� ������� ��� � ������� �� ������ ����� �'������� �� ���� ��� ���� 7189 ������� ������������ ������� $��� 7189 ��� ���� �� 2���������� �����#260 ����4 51)� .18C.89�

#������ �%������ (( ���� ��� 5���� �%���+� ;)6

�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+

D� ���� � ��� ����"� � �)*+6" (����������� �� ����'�� ����������'��O �������� ��������� �� ��� -��� ��������������'�� ��� �������'�� $��� �� ������ ��������� ���#��� %��� ���������� 3� ��������� �4 *���������4 )7��8)*C8&1�

D��� � � ��� ��� ����� ' �)*+6" ���� ���� ��� ��� ����������� � �:7/���������� ������ �������� ��� � ����� ���������� � *������������� )7�� .1.C.1+�

>����� & � $�������� > ��� &���� $ �)**." :���������� ��� ����� �� �� ����� �2 �� �� ����� �� ���������� ������O�%������� ��� ������������� *���4 ���+� 5��4 7;� .&;*C.&68�

��� ��� % �)**+" #�� ���� �������� �� �� ����� ������� �� ��� ����� 7189� -�� ������� 6������4 &�%����4 &��� -� ;7;�8C)1�

����� � � ��� ��������� � �)**+" 5����� ���� �� �������������� �� � ������ �� ��$�� �� $������ �������&�%����������%� )4� )*8.C)*8+�

�������� B�� 9 ��� D���� ,���� � �)**1" #�� ���� � �� ������������� �� �������� ������O ���� ������ �� �������������������� ��� �� �� �� ��� #�������+�4 �+������ ��5������� 0���� 9:�; �/������ >�(�� ���"� D�����O -������U /�� ��� ;)*C;8&�

��������� D � ������� D ��� G����� ! �)**1" #������������� ����� �� �� ����� ��� ���� 7189������%�� �� ��� ��������� ��� ��� �������� ������ '46������4 ;;?� );1C)68�

&��� 8 % � �)**;" �� ���� ����� �� ������ ���������� ������ ������ �������� -�� 4 � �4 6�����4 ;7� .86C.8+�

&������ % � >������ 6 � 6������ $ ��� H����� & �)**;" =�����'������� �� ����� ��� ���� 7189� �� ��������� ���'����������� ����4 2��%���4 717� 8)C;1�

&�� � # D � ��� �� B F ��� >���� � 8 �)*+;" � ���� �������������� ���� �� �'������� �� 5�������� �������� ��������������� 0������� 75� *66C*+9�

8������ B F � 6����� � � %I���I���� � $ � ��� � 8 F �D����� & > ��� 8���� 6 � �)*+;" ������� ���� ��'������� �� ��������� ����� �� 5��������4 *������ 575�;.&C;.8�

��������� B � ���� ��� 9 � ��� ������� � ! �)*+*" ���������-������4 � ���������% ������4 �$ =�0O -�� !���� /���D������� 7����

����� ! � ���������� � � ������� D ��� G����� ! �)**9" #�������������� ��� ���� ���� �������� ������� ����������� �� ��� ���� 7�189 �� �� ����� ��������2�6< '4 4� &.*)C&.*6�

�������� � 8 ��� 9��� B �)**+" ������% ����� �� �� �������� �� ��� ���� 7189� �� ������� �$�%���� ��, D�" ��������������� ������ �� �2 �� ���4 $��4 $����4 7*@� .)8C.&&�

�����(��������� 8 �)*.;" � ��� ���� � ����� �� ������������ �� ��� �� ��$� ���� '4 $����4 57� ))6C)69�

������� � $ �)**;" 7��� ��� ���� 7189 �����'���������-���4 5��4 &���� 0��4 ;*� &.8C&+1�

������ D � 9������� 8 ��� ��������� � �)*++" E�����-��� ��� 7�189������%� �� ���������� ��� ��� �0������P � ����������� .������'���� ��� ������������� �� ������ �������� 7������� &�%��� =�������>� 7@� &.6C&16�

!���� ��� B % � '����� � % B ��� ��� ��� ! B �)**1" -�����O�������� ��� ����������� �� ��������� ������ ��<��� ��������� ������ ��<��� � $��������� �������� ��� �% ����������� ��� $����� ����' ��� �� *���4 ���+� 5��4 7� 1;6.C1;+9�

!������ $ ��� '���� F �)**6" �������� � �� ��$� ��� ����������� �������� �� $������4 &���� 6���+4 ;;?� .66C.+)�

H����� & � F���(8�������� % � !�� ��� ' � � %�� �� � �8����� � � D�"���� � ��� &������ % �)**1"-��� ��������� �� � �������� ���� �������� 1�����'���� ���� �� �� ������ 4����� ��� ��� ���������� �� ��� ��S� ���� 7189 �� ��� �����������������$��� 2��4 '4 6������4 777� !�+1.C+89�

H����� & � �������� � � D�"���� � � %����� � ��� &������% �)**6" -������ ����� �'�������� ��� ��� ��������� �� ��� ������ �� �$� �������� ����� �����+� ��� �������� �:7/� ��� ���� 7189 ��� ����� $��� 7189 -=76.�8� '4 6���4 -���4717� )*)6;C)*)+;�

F����,��� 9 �)**1" ������ ��� �������� �� ��� #�������+�4�+������ �� 5������� 0���� 9:�; �/������ >�(�� ���"� D�����O-������ U /�� ��� &8*C..;�

3���"���� � � ����� D � ������� D � ���������� � � ������� D ���G����� ! �)**." ������� � �� ��� ������� � ��������$��� �������� �� ��<��� � �� ��� �������� �� �� � ���������� �� �� ����� ��� ���� 7�189�� '4 6������4;;)� ;8&C;86�

#�� �� ������ ��<��� � ������ �� ���� ���� ��� ���� ��������� �� ��� 5��(��0� ::(> ��� E3(D ��������� $��� ���

� ������ ����� ��)8;*6;�

;)+ 0���� ������� ��+ $��� #��1����

�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+