Cloning and expression of flavone synthase II from Gerbera hybrids
-
Upload
stefan-martens -
Category
Documents
-
view
213 -
download
0
Transcript of Cloning and expression of flavone synthase II from Gerbera hybrids
������� ��� �� ��� �� ����� ����� �� ���� �������������
����� ����� � ��� ��� ��������
��������� �� ���� ���������� ���������� �����������
�������� �� ��������� �� � ! " #�������� $�����%
�������
�� ������� ������ � ����� ���� � � ��������� �� ��
���� ��� !� � ��� ��� �"��� ����� ����� ���
����� �� �� #$%&'(������ ��������� &)*+
��������� ���� �,� ������� ���������
�-�� ������� ��� ,��� �� �������� .��/ 0 ��
�� �� .�� ��0 ���� �� �� ���� ���� � ���������
&)*+ ������� .���%%�1�0 ,� � ����� � ��� �
���������� �� ���� �����2� ,��� �� ���� �����
�� � �� �� ��� ��� ��(������� ����� ��
��������� &)*+ ������ !� ����(����� �%#$
.�3&45670 ,���� �������� �� ���(������ ���� ���
���� �� �� ���%%�1� 2��� ,� � ����� ��� *�(8$�9
��� ��(��(�� &�8 ,��� �� ���-� �����
#������ ���� ����� � �� ����� 8#$ �� ������� ������
�������� ���� �� �3&4567 �� ,� ���� ���� ����� ��
��� ,��� �� �������� ���� ��/��� ���� �� ���� �����
��� ������ ��,� �������� �� �� ������ ,���
�� �� ��� �"�� �������� �� �#� �� ��� �����
������������ ����� �� ���� �� � ��� �� ���
�3&4567 ������ � �� ����� ��������� �� :;)�<(�����
���� �� � ����� :;)�<(������� !�� � �3&4567 ,�
��,� �� ���� ����� ����� �� !�� � �� -� �
����� �� �� � ������� ��� �� ��� �� � ����������
�#� �� �%#$ ���� ���� ��� ��� !� ������� �� ��
����� ���� 2��� ����� ���� �3&4567 ��� *)=
������� ,��� �� 2��� �� �3&456;� ,���� ��
������ �� ������ � � .7�0(������� 7(��������
�� ������ ��� �� ����� >
������������
������ ��� ������ � ���� �������� ���������
������� ������� ��� �� ��� ���� �������� ���
�������� ������ � ����� ������������� ������
������� �������� �� � ! �" ��� ���� ��� ���� �����
����� �&����������� ��������" � ���������� ������
#��� ������ $�� ����%�� �� � &��'���������������
���� ���'������� �(��� � �� ���� )*+)"� �� ������� �� �
$��� ���� �� ���� ��� ��� ��� ������ �������� �� �� !
��" $�� ����� �� �� ��� ������ ��������� �� ������
��������� ,���� ��������� �� ��������� ������� $��
����� �� ��� ������ ���� �� � ����� ���� ���$���
-�& ��� -�. ������ )" �/�� ��� ��0����� )**1"�
2� ����� ��� ������ ���� �� � ! �� � ������ �� ���
���� #�� $�� ��� ���� �� ��� %�� ���� �3����� ���
��0����� )**+"� (�� ���� � ������� �4� �� ���
5����� �� )*+6� !�� � �� ���� )*++" ������%�� � ! �� ��
� �� ����� ��� ���� 7189 �7189" �����'��������
#��� ���� �� ������������� ���� ���� ��������
$�� � ����� � $��� �:7/� ��� ���� 7189���� ����
�-72"� ��� � ��������� $�� � �� ������� �� � ����
�� �'������� �� ����� �� ��� ��������� �� �� �����
��������� #�� ���� ���� ����$��� ���� �� �'�����
�� �������� ��� ��� �� � �� ������� ��������
������������ ��� ���������� ���� ��� ����� ��� ��
�� 7189 �� ����� �� ����'�% ����� �� '�������� ���
������ ��� ����� ���� ������ �(�$� �� ���� )**1�
:��� ��� ����� )**8� ! ���� )**;"� �� �������
��� ���� .99 ���� 7189 ��<��� �� �� �������� ��
�������� ��������� ��� �� ����%�� �� ����'������
1; ���� ������� �:�2� ����� ������ ������ �����"�
�� ������ �� ���� ���� ������� ���� ����� ��
7189� $��� ��� ��0��$� ��� ������ ��� ��������
�� ���� �� ����� ���� ���� �� �������� �� ���
������������� ��� �������� ����$��� ��� ����
��� ����� -�������� 1�����'���� �-1/" ������ ��
��� -=76.� ��� ������� ��� ����'������ �� ������
� �� �/���� �� ���� )**8"� #�� ������� 1� ������� �� ���
����� �� ��� (���� ��� ��� �� ���������� �������� .������'���� ��.�/" ��� �������� .�� 8������'������.��8�/" ������ ��� (���� ����'������ �� ����������/�� ��� ��0����� )**1"� #��� �� �� �������
���� �� ������� � �� ��� ���� ���� ������� ���
��� � ���� $��� ���� � �� ��� ������ ����0� ��
��% ���� �����'������ �� � �� ����'����� ���������
�(�$� �� ���� )**1"� �� �.�/ $�� ���� ��� 7������
�-=768(&" ��� ��� ��� ���� �� ��� ���� ���� � $��
������%�� �(����� �� ���� )***"� �.��8�/ $�� ����
��� ����� ��� �� ��� ������ �� ��� -=768� �����
�/���� �� ���� )**."� #�� ���� �� � ! ��� $�� � �� ���
�� �������� 7189 ������ �� ��� �������� ����$���
���� ��$���� ��� ���� ���� ���� ��$�
(���� �� ��� ������ ���� ������� ��� ������������
�������� $�� � �� ������ �� � %������� �� 7189
������� �5������� )*+*"� ��� ��� ���������� ���
�������� ���� �3����� ��� ��0����� )**+� #�� �
��� /��� )**6"� 7-2 �������� $�� � ���� ���� ������
2� ����� &. >��� )***� ������ )) ? ���� )***� � ����� &+ ? ���� )***�@�� ��������� � ���' A1* +);) 6).++;������ ������B�$������������ ������"�
��� &���� '������ �)***" 7+�8"� ;))C;)+
�)*** (� 0$� ! ��� � D�� ;))
�� ����� ����� ��� �� ������ 7189 ����� �/���� �� ����
)**.� ! ����� ��� E��� )**+"� $�� ��$ ����� �� �� �
����� ��� �� ��� ��� � ����� �� ��� � ! �� 7189 ����
��� $������ �������
�� ���� ��� �� ��� %�� �� ����� ��� �� �����
�� � : � �� ����� � ! �� $�� � ������� ������
��������� �� ��� �������� ����$�� ��� �� ��� ��� �����
�'������� �� ������
8 ���
(�������� � � 5���� �)*� ������� ����+���
+����������% �, �����+ &� " ������
7������ ��� ���� � ������� $��� �������� $������ ����
���$�� ���� ��� �������� �� ������� �� ������ �� ���
���� #��� � ! �� � ������ $�� ��� ������ �� ���� $��� ���
�������� ��� ���A �" ��� ��� �� ���� $��� � ������
���� ��� ��"� ��������� �� ����� ��� $������
F2�����G ��� ������ � ������ �� � ! �� $�� ����� ��
�� ���� ���� ����������� ����� %�� ���� ����� &"�
���� ����� ���� ���������� ���� ���� ��� ���� �����
�� ������ �� ������ ���� �� ��� �3����� ��� ��0�����
)**+"� #���� $� ������ �2 � ���������� �������
��� ���� ���� ������ �� $������ ���� $��� ��� ��������
��� ��A ��� ������� $��� � ������ ���� �� ����� ��
���������� ������ �::�2#�7-2"�
#�� ::�2#�7-2 ����� � ������ ������ %�� ���
����������� �'������ ������ � �� ���� $�� ����
��%�� ��� �������� ?�� 7-2 ���� � �������� ����
��������� ����� � �� ��� ��� �� 0��$� ��0����� 7189
��<��� ��� �� ���� ������ ����$��� ��� ������� 7189
%������� ��� ���� � 8� ��� .� 7-2 ������ #�� ���
���������� �� -��::�6� ������ ."� ��������� ��� .�������� ����� ����� �� � 7189 : � ������� ��� ���
������������ ����� �� %�� ���� ���� �61 ����� � ���"
��� � )+;�� ���������� ������ #�� ����� $�� ��
� ���� � $��� ��� ��������� ���� �� ��� ����������
������ ���
��� ���� ��+ � ����� �, ������� � 5���� -% ))+.�
����� ��� ������� ��%��� ��� ���������� �'����
���� �� ��� �������� 7189 �������� #��� ��� ���� $��
������������ �� �������� ���������� �� )) ������ �� ��$�
���������� ��� �� ����� �� $������� /�����������
���� ���� ������� � ��������� �� ���� 2 � �����
-��::�6� : � ���� ������ � )�6 0� ���� ��� ������
�� ������ �� ��%��� $������ ���� ��� ������ $��� ���
�������� ��� ���A �" ��� ��� �� ���� ��� ������ $���
� ������ ���� �� ��� � �� #��� �� ������ $�� � �� ���
������ ��� �������� �� ������������ ����� ��� ��
���� ��� ������ 1"� -�� ��������� $��� � ! �� � ������ ���
������ � ��������� ��� ��'���� ��� �� ��� -��::�6�
���� ��� ���0�� �� ����� 1 ��� ���� �� ���� ������ 1"�
(�������� � ��� �/��+ �)*� ����� � ��� 5���� &� "
�)*�
�� ��� �������� �� ��� 8����� : � ���� ��� 8��2�-E�� ���<�� $�� ����� ���� ���� ���� ��� �% �����
�5!76C*� ��� E'�������� �� �����" ��� -��::�6�
$�� ���� ��� ���� �$� 7-2 ����� � )�1 0� �������
�-��#�H (�#�� ����� ." $�� ������� �� ������ ��
������� $��� ������� ������� #�� �������� �������
����� �������� ���� ��������� ����� � �� ��� ��� ��
0��$� ��0����� 7189 ��<��� ��� �� ���� ������ ����
$��� � ���� ����� ��� ������� ������������ ����� ���
����� ; E������� �������� �� ������� ��� ����������
����� 7 #��� ��� ����� � ! �� � ������ ��� ������ � �������� ��$������ ����� F2�����G�I���� �� ���� ��� ���� ��� 0"� ��������� �� ����� (�� �������������� � ������ �$����" ��� ������ ������ ����" ��������� ����� ���� �� 3����� ��� ��0���� �)**+"�
;)& 0���� ������� ��+ $��� #��1����
�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+
��� ���� � .� �������� �% 7-2 ���� �5!7*" �� �����
#������� ��� -��#�H (�#� ��� ��������� ��� 8�������� ����� ����� �� ��� $������ 7189 : � �1;9
����� � ���" ������� $��� � &.�� ����� �����
2, ������� � ��� 5���� &� " �)*� �� %����
#� �������� $�� � ��� ����� ������ �� �� ���� �� ���
������� ����� �� ��������� 7-2 $��� ���� ��� �%
����� �-��� !)/J2� ��� E'�������� �� �����" $��
������� ���� ������ ��� ����� �� ��� �������� 7189
����� ����� �-=7*.(&�?2�� ����� ." ���� ��� �����
�'������� �� �� ��=E!&" $������ �� ����� ��� �� ���
���������� 8� ������������ ���0��� ��<��� �� #��� $���� ����� �� ���� �� ���� ���� ��������� 8� ����������� ��<��� �� ��� ������ ����� ����� ������ ����
�'������� �� ����� �7����� �� ���� )**;"� � ! �� � ������
$�� ���� ��� �� �� ����� �� ����� ������ ��� �����
����� � I ! ) ��������� $��� -=7*.(&�?2� ��� ��� ��
�� ����� ���������� ��� ��� ������������� �����
����� � I ! ) ������ 8"� #�� ���� � $�� � $�� �����
��� ��������� � �2" �� � �������� $�� ������%�� ��
�������� ���" �� ��� �������� ������ ������� �� ��
����������� $��� �� �������� ������ ,��� ���
���� ���������� ��� �� ������� �� ����� ��� �E2�" ���
�<���������� �D�K" �� �� ��� �������� �� ��� ���� ����
�������� ������ �D�" ��� 6� 1��������'������� ����� ���
���$�"� #���� ����� ����������� ���� ��� �������
$������ 7189 : � ���� �� ��� ����� � ! ���
0�3����� � ��� 5���� &� " �)*� ����� �� ���������
#*0 ((
#�� ������� ��� �������� )�6 0� : � $��� � �����
���� ������ ���� �?2�" �� )8.;��� #�� ?2� ����
�� � ��������� �� 8)) ����� � �� ������� �� �
���� ��� ��� �� ���� �� 8+�& 0:�� #�� ���� ��
����� � �� ��<��� � �������� ��� ��� ��� �������
����� � ��� �� ��� ������������ ����� ��� ��� L��J
5"5'�:JE"#�#J!"M� $�� � �� ������� �� �� �������� ��
�'���� ������� ��� � ��������� ��������� �� �'�
�� ��� ��������� ������� �� �� ��� � ������
� � ����� ��� �� ��� 8� �������� ��� �� ���� ����-�������� �� ��� ���� �� ����� � �� ��<��� � $���
0��$� 7189 ��<��� �� ������ ���� ��� ������� : �
������ �� ��� -=7*. ������ 3������ ��� �������
: � �� ����� ��������� �� ��� � ���� ��������
��<��� � �� � �&!"��������� &�����'���� ��&/"
�-=7*.()� �0���� �� ���� )**+� 5��(��0 � ������ ���
�(99).+9" ��� � �� � �$�%�%������ ��������" $��� ��
�������� ���� �� ��� ������ �� 81N ������ ;"�
-����<����� ���� ��� $�� ����� -=7*.(& �:�
����� ������ ������ �����"� 7��������� �������
����� ��� ���� �� ����� � �� ��<��� �� �� � ���� ��
����� 5 !�<��� � ��� ��� �� 7189 ���������� �������� ��� $�������-������� ������O ��������� ��������� ��� ������ � ������ �'���� ������������ ��� ������������ ������
����� ) E'������� �� ��� ���� ����-��::�6� ���� ���� ��� �� ����������������� ��� �� ��� ����� �� $������������� $��� �������������
#������ �%������ (( ���� ��� 5���� �%���+� ;).
�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+
���� 7189� ������� �� ��� ������������� ���
�������� ����$�� �� ���$� �� ����� 6� �� ��� ���� ����
���� -=7*.(& �� ��� ����� �� ��� �&!"��������� &�
����'���� ���� �� ���� 7189��
%� �� ���
�� �� ����� ��������� ���� ��� ���� &99999
�� ����� ���������� ��� �'��� �� ����� ��� ���� ��
���� )9N ���� ���� ��� ������ �� ���� �:��� �� ����
)**1"� 3��� �� ����� ���� ����� �� �� � ����� ��
�������� ��������� ?�� ���� �� �������� �����
������ �� ��� ������� $�� � �� $��������� ���
$�� � � � ��� ��� �� ��� ��$�� �� ����� �����
���� ��� ��� ��� ��� �� ���� ���� ���� ���� �� � ��
������ ����� ��� ���� �����$���� )**1"� #��� ���
� � �� ���$ �������� �/������ )*6+"� ���������� ��
��$� �������� �5��� ��� 4����� )**)� ! ����
3�� ����� )*.;"� ���� ��� �� ��������� ������ �� ����
)*+;� 7���� �� ���� )*+;� 2������ �� ���� )*+;"� �����
�������� �� �������� ���� �C���� ����� �����
�/����� ��� 5���� )**1"� ���� ���� �������� ��
����� ��� ����� ����� �(�P �� �� ���� )**+"� ��� ��
����� ���� �� �3������� ��� 4����$���� )**1"�
(� ���� �� ��� ������� � �� �������� �� �� ��������
���� ��� �� ����� �� $�� � ���� �� ����� ��
������� �� ���� �������� ��� ����� �� ��� ������
��� ��� �� ��� ��� ���� � ��� ��� ��� �� ���
��� �� ���� #��� $�0 ��� ���� ��� %�� �� �����
����� ��� �'������� �� ��� � ! �� �����
���� � ::�2#�7-2 ������� $� ��� ������ %��
���������� �'������ ������ �� $�� � ��� $�� ������%��
�� � 7189 ��<��� � �-��::�6�"� ���� ���� 2 �� ��
�������� ��������� �� $������ ������ $�� ������� ��
����� �������� ������������ ��� ��� �� ���� ��� ��
���� $��� ��� �������� ��� ���A �"� �� � ������ ����
��� ��"� $�� � � 0 � ! �� � ������� �� ������������ $��
������ 3������ ��� ���� ���� �� ��� ���� ��� ����
����� ��$� ���������� ��������� �� ��� �������
������ � ������ ��� ������ � ��������� ���� �����
������ &"� #������� ��� ���� ���������� �� ���
-��::�6� : � ��� ��� �� �'������� ������ �'�
�� ��� �� � ! ���
#�� $������ 7189 ������ : � $�� �������� ����� 8�2�-E �� ���<�� ��� ���������� 7-2� �� �'�� ���� ���
������� 7189 : � ��<��� � ��� ���� ������� �� 7189
��<��� ��� ,��� �������� $��� 0��$� 7189 ���
������� ��� ���$�� � ���� ������� $��� -=7*.()� �
7189 ������� ��� �� ���������� ����������� �����
�� �� $�%�%������ ��������� #��� ��� $�� ������%�� ��
�� ��� �&!"��������� &�����'����� #�� �'������ ����
���� � ������� ��� �������� �� � ������ ��� &�
����'���������� �&�?/� �2" ��� �<���������� ���
�2� ���� ������ #�� ������ �� $�� ��� ����� ���
&�?/� �2 ���� � �� �������� �� ��� ���� ���� ������
����� ��0���� �� ���� )**+"� (� $4 �������� -��� ����
����� * 2���� ���������� �� ��� ������ ����� �� � ! �� : � ����'������ �� ������#�� : � ����� -=7*.(&�?2� $�� ���� ���� ����� �'������� �� ���=E!& �� I ! )�-=7*.(&�?2�"� E����� �'�� �� �� ������������������ �� I ! )" ��� ����� ��������� $��� -=7*.(& $�� ������� ������� ����� �� � ! �� � ������ ����� �)1-"���������� �� �������� ���������� $��� �������������
����� ? �������� �� -=7*.() ��� -=7*.(&�-������� ����� � ��� �� ���� ���� �� ������0� ��� ����������������������� �� ���� ���� �� �����
;)1 0���� ������� ��+ $��� #��1����
�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+
������� �� $� �� ������� ��� �� �� ���� )*+1"� �� �� ���
$� 0��$� ���� &�?/���������� ����� &�?/� �2" $�� ���
��� � ��������� �� -��� ���������� ������������
�4�� �� ��� ����� )*+6"� #������� $� �������� ����
-=7*.() ���� �� ��� �&!"��������� &�����'����
$�� � �� ������� �� ���� ����$��� �� ������� ������
����� �'������� �� ��� ��� -=7*.(& ��� ���� �� ����
���� ��� ���� ��� ��� ��������� ���� �� ��� ������
������ �� � ��� � �������� �� �� ��� ��� �2 $������
��� ���� � ��������� �� ��������� ������ ������ �����
E2� ��� D�K �� ��� ��������� �� �� ��� �������� �� ���
���� ���� �������� #��� ���� ��� ��� ������� ���� ���
���� $�� � $�� �� ������� $��� ��� ��������� ������
� ������ ��� ������� � �� ������� �� $������ �����
����� ��� %�� �� ����� ����� �� : � ����� �� � !
���
�� �������� � �� ���� �� ������ �� � ! �� ��� �&/�
���� ������ �� ��� ���� �� ��� �������������� ��
�0��� -/�-/ ����� ������� �� ��� �������� �� ���
���������� ����� ���� �3������ )**+"� �� $�� ���$�
���� ��� ����� ���� �� ��� ������ �� �� � ���������� ��
��� ����'����� ����������� ��� �� $�� ���$� ����
����� �$� �������� �� ����� ����� � ������ �� ?/
��� ��� ����I"�?/ ��� ��� �� ��� �������� ������'��
��������� -=7*.()" � ��� ����� ���� �� ��� �� ���
������� ���� ������� �� ����� ���� �� $��� ��� ���
��� ��� ��� ���������������� -=7*.(&" ��� � �
������ +"� � ����� ����� �� ��� �� ���� ���� ��� ��
��������� �� ��� �������� �� ����� �� -=7*.() ���
-=7*.(& ��� /��� ������ ������ �����"� � �����
�'�������� ��� ���� ����� �� ��� �� ���� �� ������ ��
� ! � �(��� �� )**9"�
!�<��� � ������� �� -=7*.(& $��� ���� -=7189�� ���
���� ��� ������ �� ��� -=7*. ��������� �������
������ ���������� �� ����� ��� ��� ��� ���� �� ��
� ! �� ���� ����� ."� �� ������ ��������� ������
����� 1 7��������� ������� �� ���� 7189 ������� �� ������������������� ����$���#�� ���������� ��� $�� �������� �� ��� ���� �� ��� ��'�� �� ���� ����� �������� $�� ��<��� �� �� 7189 ���� ������� �� ���������������� ��� �������� ����$��� #�� � ������ ������ ��-=76.�1 -����������� ������ �������� 1�����'���� �-1/" �Q.&8;."�-=76.�)& ������ ������� -1/ �,)**&&"� -=768�) &������ �%���+��������� .��8������'���� ��.��8�/" �Q&&818"� -=768�+ -����������������� �.��8�/ ��>9))+;&"� -=768(& &������ �%���+� �������� .������'���� ��.�/" ���)88.&&"� -=7+1�& �%�� ������� ���������������� 8�����'���� ��8/" ���)89++)"� -=7+1�. ��3��+�������%������� �8/ ���).*8.&"� -=7*.�) �� �. $�%���� ��, �:+.*;+� :+;.8)��� =)91*&"� -=7*.() $�%�%������ �������� �&!"��������� &�����'������&/" ��(99).+9"� -=7*.(& $������ ������ � ! �� ���)8;*6;"� -=7*.-)$�%���� ��, ���9&&1;&"� -=7*.-& $�%�%������ �������� ��(9&.;.;"�-=7*.-. -���� ��������� �>&1.+91"� -=7*.E) $�%���� ��, ���).81+8"�
����� @ 3����'��������� ��� �������������� �� ��������� ��������� �&!"��������� &�����'���� ��&/" ��� ������ �������� �� �� ! ��"����� ������#�� ������� �� ������ �� � ! �� ��� �&/ �� �����
#������ �%������ (( ���� ��� 5���� �%���+� ;)8
�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+
�� �� ����� �� )6 ����� � ���� $�� � �� �������� �� ���
���� ���������� ��� �������� �� ��� ������ �� ���
�� ����� ������� �3��0��� �� ���� )**1� !��� �� ����
)**9"� �� ���$�� �� ��� ���� ������� ������� � �����
����� �D77!7RRRR7" �� ��� ������ �=�����0� �� ����
)**."� ��������� ��� �'���� ������� �� 0�� ��5#:#�#J
!"" $�� ����� �� �� ����� ������� �� � -=7*.
������� #��� ������ ������ 0��$� �� L��J5"5'�:J
E"#�#J!"M� �� ������� �� �� �������� �� �'���� ������� ���
� ��������� #��� ���� ���� ���� ��� ���������� ����
���� � ������ �� ��� ��� ��� ������ 7189� �:��� ���
����� )**8"� #��� ���� �� �'�� ��� �� ������� ����
�����'���������� �! ���� )**;"� �� ��� ����� ���
7189 %������� �� ��� ���� ������� �����
�7�5R522R-75"� $�� � �� ����� ������� �� � 7189
������������ 7��������� ������� ���� ���� ���� � ! ��
��� �&/ �� ���� ����� ������ 6"� ��������� � ���
���������� ��� ��� �� ��� ���� �� � ! �� ��� ���
���� ������ �� ��� -=7*. ������ � ���������� $���
��� ���� 7189 ������� ��� ������������� ��� ���
�������� ����$�� �� ��� �� ��������
�� ������� $� ���� ���$� ���� -=7*.(& : �
�� ���� � ! �� �� 7189 �� ��� �������� ����$��
��������� �� ������ ��������"� #��� ������ ������
��� ���� �� � ���� �� �������� ������������ ���� ��
� ���� �� �� �������� S�� ���� �� ���� ����$�� ������
�� �������� ���������� �� � �� �������� �����������
�������� ������� �������� ��� ����� ��������� #����
���� ��$ 7189 ���� ����� �� ����� �� ��������
����� ��� �� ���� ��� ��������� �� ����� ���
������ �� ������� ��� � ! �� � ������� #�� ��� �
�������� �� ������ �������� �� �������� ���� �������
�� � ����� ��� �� ���� ��$ ��$� ���� ��� ��
������ � � $��� ���� �� � ����� �� ��� �� ����
������� �� �� ����� �'������� ��� ���� �������
������� �� ��� ���� ���� �� �� �������� ��������
��� ��� ��������� ��� ��� �� �������
9�������� �������
&���� ��������� %���� ������� ��+ �����+�
5����� �� ��%��� ����������� ��� ��������� ��A �" ��� ��������������� ��� ��������� �� ��" ���� �� $������ ������$�� �������� ��� ���������� ��� ��� ���� � ��������������� �#��� )� 3����� ��� ��0����� )**+� #�� � ��� /���)**6"� #�� ���� �� ������ F2�����G ���A �" $�� �������� ���#�� ��� �:� 4$�0�� ��� ��������"��� ���������� ���� �'�������� ��� ����� ����� � I! ) ���
��� �'������� �� �� �=E!& $�� ���� ����������� 5����������� ��������"�
(�������� ��+ ����%��� � 5*�
#��� 2 � ��� $������ ���� �� )) �������� ������ �� ������������� ������ &" $�� ������� � ����� �� 5������ �� ����)**." ����� &99�� �� ����� ���� ������� #�� �������� �� 2 ���� ��� ����� � �� : � $�� �� 0�� �� ������ �� �� ���������� ���� �������� ������ ��������� ����� ��� ��������)9 �� ���� 2 � �� ���" ����� ���������� ������ ��� ���/������ R �������� �������� (� ��� (���� �$����5�����" $�� ������� � ����� �� ������� �� ���<����!�����0 �� ���� )*+*"� .&7������� �� ����� $�� ������0������� 2��������� 4�� �������� (� ��"� 7����������������� ������������ $�� ������� �� 1&�- �� )9C);� �� 89N ��J�"��������� 8�!!7E� 8�:������G� �������� 9�8N �$J�" !:!��� )99���C) �������� ����� ���� : �� #�� ��������$�� $����� �$� � �� &�!!7E� 9�)N �$J�" !:! �� 1&�- ��)8���� �� � �� )�!!7E� 9�)N !:! �� ;8�- �� )9����K�����% ����� �� ��� ������������ ������ $�� ������� ������ ������������ �(�!)999� ��S�%�� 4�����$�� �0�����>����� ����$�� �� 0��� #� �� 2������� !�����������5�����"�
)��������� +�� ��% � �5*�
2����� ���� ������ $�� ������� $��� !���� ��� �� ��������� ������ �5�� � (2D� 7������ ,4" �� � ���� ����� �� &8 ����$��� ��� ������G� ����� ������ :��������� ������ ���������� �� ���������� ����� $�� ���� ��� � ����� �� ������� � �� D���� �� ��� �)**." $��� ���� ����� ��������� �����7189���� �% ������� ����� ��� ���� �� ���� ������#"����� �� ��� ���� �� ! ����� ��� E�� �)**+"� 2�����%��7-2 ���� �� $�� ���� ���� ��� �-2&�) �� �� ����� � #�-����� 4�� ����������"� 2������� �������� $�� ���E�� ���� �3������� ,!�"�
�/5�-2
$������ �������� �% ����� �5!76C*" $�� ���� �� ��� �����<��� � �� -��::�6� ��� $�� ���� �� � 8��2�-E $�� � $�� ���� ��� ��������� � ����� �� ��� ������ ���G� ����� ������ ����� ��� 0�� ��� 5�� ��(2D� #��� 2 � ��� ����� $������� ���� ��� ����� 5!76 �8���#-##-���5#5###--#-5�##-�.�" �� ��� ����� ���� ���% ����� ��� ������ ����������� ����� 8� �� ��� ������� #�# ���� � $�� ���� �� � �������
!��� ; :������� ���������� ��%��� $������ ���� ��� ������
$������ ����J ����� 5������� ?����
#�8+ ���A ��� #�� � ��� /�� �)**6"7���� �0� ��� ��� #�� � ��� /�� �)**6",���� ��� ��� #�� � ��� /�� �)**6"-���� ��� ��� #�� � ��� /�� �)**6"2����� ���A � #�� ���)16C)); ��� ��� #� 8+�!@
)16C))+ ��� ��� #� 8+�!@
)16C)&1 ���A � #� 8+�!@
)16C).6 ��� ��� #� 8+�!@
)16C).* ��� ��� #� 8+�!@
)16C)19 ���A � #� 8+�!@
)16C)1; ��� ��� #� 8+�!@
)16C)1+ ���A � #� 8+�!@
)16C)8* ��� ��� #� 8+�!@
@�!T ��� �������
;); 0���� ������� ��+ $��� #��1����
�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+
�� %������� 7-2 �� ��� ����� � �� ��� ������� �� �� �����5�� ��(2D" ��� 5!7+ �8����#55��-�-�-�-����#-#�--�.�"��� ��� �� ��� ���� 7-2� 8� �� ��� ������ %������� 7-2���� � $�� �����%�� $��� �,�7 �5�� ��(2D" ��� 5!7* �8��#-�--�-#5�5�5##-#-#-�#55�.�"�
)*� ��3������� ��+ ����%���
(��� ������ �� ��� : �� $�� ��<��� �� ����� � !�<������: � ��<��� ��� 0�� �������� (� ��"� L.8!M��#7 ��- �E� �$���� 5�����" ��� ��� �% ������ ������ ������3�5�(�?#E-/� E������� 5�����"� -������ ������� ����� : � ��� ������ ����� � �� ��<��� �� $�� ���� ��� �������� ?3�5� ����$�� �� 0��� �?'��� 3�� ��� ?'���� ,4"� ����� �������� ��� �������� �� ��<��� �� ������� ��� ���5��(��0� -D,!#�D� �#������� �� ���� )**1" $�� ���� ��� �������� $�� ��$� $��� ��� #2EEI�E� �7���� )**;" ������
������������ �, ������� �� %����
#�� ����� ����� �� -=7*.(& $�� ������� ���� ��� ����� �� ���=E!& �� ��� ���� �� ,��� �� ��� �)**1"� � %�� 7-2 $��������� �� ���� � �������� ������ �� ��� 7189 ?2� ���� ������� � 0�� ���������� 8� ���������� ��<��� ��� #�����$��� 7-2 ����� $�� ����O -��� !)/ �8�� ������� ��-�--�#5��#�-� -#--�.�" ��� -��� !)2 �8���5�#�5�--5�-#5--�#-��5���5-�.�"� #�� ��$�� ���� �������� � 6��/) ���� ���� ���� ���������� ���$�� �� ����#5 ���� ���� ��� ��� ��'� )9 ����� �� ��� ������ ����� #����$������ ���� $�� ��� �% �� ��� .� ���������� ����� ����� ����� #� �� ������ ��� ��� ����� �� ��� 7189 ���� ��� ������'������� �� ���� ��� ������ 2��2) ���� ��$������ �� ��������� �-2&�) ����������" $�� ����� #�� 7-2 ����% ����� $��������� $��� E'���� /��� ������� ������ ��' � ����� ����� ������ ���G� ����� ����� �(������� 3�������"�=���� ����� � I ! ) $�� ����� �� =75�� !5� ��� =75E
������� �� ��� ���� �� ,��� �� ��� �)**6"� #����������� $������ �� � ����%�� ������ � ����� ������ ����� 89 �� ���: � �5���� �� ���� )**&"� 3� ������ $�� ������ �� ��� ������������ �,��� �� ���� )**1"�
����% � #*0 (( ���%�� �������%
#�� ������� � ! �� ������ ������������ ������% ����� ������ ��� <�����% ����� ��� ������ ������������ $�� �������� �� ��� ���� �� 3����� ��� ��0���� �)**+"�
$����,������
�� $��� �0� �� ����0 -� ! ����� �D3, 3�P � ���" �� �� ��� �� ����� ��� 7189 ��� �% ::�2#�7-2 ��� �� /�� �5!� �������" �� ��� ������ ������� ��� �� ���� �� ��������� ��� $��� �� ����0 3� ��� ��� !� 5�P � �#, 3�P � ���" �������� ������ ����� �� ����� �'������� ��� :�2� ���� ������ -�������� �� !���������� -��� ���� 7189 ���� ������ ������ ��� 7189 ����� #��� $�0 $�� ���� �������� �� ���:���� �� ��� ������������ ���� �:�5"�
8����
$������ % � ���� $ � ���������� ' ��� A�2���� B �)*+1" EH ������� �H������ �G���� ���� ���������� ��� � ���� �� $�%�%�������������� D� &������ ��7+�������� &�%�����7�� ��� ;@� )69C)61�
$�� ��� ! � $���� ! ��� $���� � �)**+" ������% ����� �� � ��� ���� 7189 : � �� ����� �&!" ��������� &�����'���� �� � �� � �$�%�%������ �������� D� ���� ���"$�� � �������� � ������ �������� ��� ������ �������� ���#260 ����4 )5;� &+6C&*9�
6�C ��� ' � 6����� ' � '���� B � 8���� 6 ��� D���� $ �)**+"�������� ������� ��� ����� ������ �� ������ �����'������ ������ ��� ���� ������� �� �� ��� ��������� �� ���� ��������� �4 2���������8���� 51� )16C);.�
6��,��� � & � 6�"��� D ��� E��������� $ �)**1" 7��� ��� ���� 7189� &�%����������%� 51� )1*)C)89;�
6��� ��� > �)**9" 7��% ����� ��� ��� ��������� �� �������������� �� � &��'������������������ ���������� ����46������4 6�� �%�4 7@7� )8&C);9�
6��� ��� > � '���� F ��� ��� ����� ' �)*+)" -�������� ���������� �� ������� ������������ ��� ������ $��� �������� ������ ��� � ����� �� ������ �4 *���������45?�� 61&C689�
6�������� � � 6����(8,��� � � '������ ! $ ��� �� ��� B � �)***"�������� ��� ��� ��������� �� � �������� .������'���� : � ��� ���������� �� ��� /�) � �� �� 7������ �������&���� '4 ;4� 11)C18)�
%�� �� � � 6���� �� � � ������� B & ��� F���� % �)**1"��� ���� ��� �������� �� ���� ��� ���� 7189� ��&�����+���� � ��� ��� (������������ -�������� �-%�������� &� " �D� ���� 3�-� �� ���� ���"� D�����O >���D����� E����'�� ��� &.C.9�
%�� �� � ��� #� ��� % �)**8" :������� ��� �������� �� ����7189 ��� 7189 ��� ������ �� )��� ���������� ��+ )���(����������� �:���� �� ��� ?G4����� :�7�� ���"� D�����O ��������� )6)C)+6�
������� B > � F�� ��� D 9 � 8� �� > ��� B��� ���� F 6 �)*+;"�������� � �������� �� ��������� ����� �� 5�������������� �� ���� �������� ������ �� ������ *������ 57)�*9C*&�
���"� % � �� B��� $ � F��� � 8 $ ��� ���� ��� 8 ' �)**&"������� ������ �� ���� ��% ��� � ������������ �� ���� ������ ��� *���4 ���+� 5��4 7+� )1&8�
��������� � � 6������ � 9 ��� �������� & $ �)**." 2�������� �� �������� ������������ ����� ������ ����������� &����-���� *� .6*C.+6�
���"��"� � B �)*+*" #�� ��� �� ������ �� ��� ���� 7�189�� &��������4 5��4 )+� &1.C&++�
����� ! ��� D����� ! �)**)" !��0�� ��� ���0��� !���������� ����� ����� C I������� �� (�P ��������� ����84 -���4;+5� )6C..�
'������� B 6 �)*6+" #�� �� ������ ������� �� � ���$ ��$�������� �� ��%8��+����� ������� ���� ��� �� ���� -� �������&�%����������%� ;1� *)8C*)6�
'������� B 6 ��� ������ 8 B �)**1" ��������� ��� ���� ��� ����� #�������+�4 �+������ �� 5������� 0���� 9:�; �/������>�(�� ���"� D�����O -������ U /�� ��� 8+*C;)+�
'���� F ��� ��������� � �)**1" (����������� �� ���������� ����� #�������+�4 �+������ �� 5������� 0���� 9:�; �/������>�(�� ���"� D�����O -������ U /�� ��� 1**C8.;�
'������ ! $ � 6�������� � � > ��� % 8 � !������ 3 � '������ � % �������� B � ! � >�� � 3 � ������ 9 � ���� ��� ! F �������� �� 9 � �)**." -����� ��� �'������� �� ��� ����7189 ����� ������� ��$� ���� *������ 5??� &6;C&6*�
'��"� � � �����C ��� � ��� �����C ��� B �)**8" -�������� 1�����'���� ��� -����������� ������� ��� � ������� �� ������ ����� �'������� �� ���� ��� ���� 7189 ������� ������������ ������� $��� 7189 ��� ���� �� 2���������� �����#260 ����4 51)� .18C.89�
#������ �%������ (( ���� ��� 5���� �%���+� ;)6
�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+
D� ���� � ��� ����"� � �)*+6" (����������� �� ����'�� ����������'��O �������� ��������� �� ��� -��� ��������������'�� ��� �������'�� $��� �� ������ ��������� ���#��� %��� ���������� 3� ��������� �4 *���������4 )7��8)*C8&1�
D��� � � ��� ��� ����� ' �)*+6" ���� ���� ��� ��� ����������� � �:7/���������� ������ �������� ��� � ����� ���������� � *������������� )7�� .1.C.1+�
>����� & � $�������� > ��� &���� $ �)**." :���������� ��� ����� �� �� ����� �2 �� �� ����� �� ���������� ������O�%������� ��� ������������� *���4 ���+� 5��4 7;� .&;*C.&68�
��� ��� % �)**+" #�� ���� �������� �� �� ����� ������� �� ��� ����� 7189� -�� ������� 6������4 &�%����4 &��� -� ;7;�8C)1�
����� � � ��� ��������� � �)**+" 5����� ���� �� �������������� �� � ������ �� ��$�� �� $������ �������&�%����������%� )4� )*8.C)*8+�
�������� B�� 9 ��� D���� ,���� � �)**1" #�� ���� � �� ������������� �� �������� ������O ���� ������ �� �������������������� ��� �� �� �� ��� #�������+�4 �+������ ��5������� 0���� 9:�; �/������ >�(�� ���"� D�����O -������U /�� ��� ;)*C;8&�
��������� D � ������� D ��� G����� ! �)**1" #������������� ����� �� �� ����� ��� ���� 7189������%�� �� ��� ��������� ��� ��� �������� ������ '46������4 ;;?� );1C)68�
&��� 8 % � �)**;" �� ���� ����� �� ������ ���������� ������ ������ �������� -�� 4 � �4 6�����4 ;7� .86C.8+�
&������ % � >������ 6 � 6������ $ ��� H����� & �)**;" =�����'������� �� ����� ��� ���� 7189� �� ��������� ���'����������� ����4 2��%���4 717� 8)C;1�
&�� � # D � ��� �� B F ��� >���� � 8 �)*+;" � ���� �������������� ���� �� �'������� �� 5�������� �������� ��������������� 0������� 75� *66C*+9�
8������ B F � 6����� � � %I���I���� � $ � ��� � 8 F �D����� & > ��� 8���� 6 � �)*+;" ������� ���� ��'������� �� ��������� ����� �� 5��������4 *������ 575�;.&C;.8�
��������� B � ���� ��� 9 � ��� ������� � ! �)*+*" ���������-������4 � ���������% ������4 �$ =�0O -�� !���� /���D������� 7����
����� ! � ���������� � � ������� D ��� G����� ! �)**9" #�������������� ��� ���� ���� �������� ������� ����������� �� ��� ���� 7�189 �� �� ����� ��������2�6< '4 4� &.*)C&.*6�
�������� � 8 ��� 9��� B �)**+" ������% ����� �� �� �������� �� ��� ���� 7189� �� ������� �$�%���� ��, D�" ��������������� ������ �� �2 �� ���4 $��4 $����4 7*@� .)8C.&&�
�����(��������� 8 �)*.;" � ��� ���� � ����� �� ������������ �� ��� �� ��$� ���� '4 $����4 57� ))6C)69�
������� � $ �)**;" 7��� ��� ���� 7189 �����'���������-���4 5��4 &���� 0��4 ;*� &.8C&+1�
������ D � 9������� 8 ��� ��������� � �)*++" E�����-��� ��� 7�189������%� �� ���������� ��� ��� �0������P � ����������� .������'���� ��� ������������� �� ������ �������� 7������� &�%��� =�������>� 7@� &.6C&16�
!���� ��� B % � '����� � % B ��� ��� ��� ! B �)**1" -�����O�������� ��� ����������� �� ��������� ������ ��<��� ��������� ������ ��<��� � $��������� �������� ��� �% ����������� ��� $����� ����' ��� �� *���4 ���+� 5��4 7� 1;6.C1;+9�
!������ $ ��� '���� F �)**6" �������� � �� ��$� ��� ����������� �������� �� $������4 &���� 6���+4 ;;?� .66C.+)�
H����� & � F���(8�������� % � !�� ��� ' � � %�� �� � �8����� � � D�"���� � ��� &������ % �)**1"-��� ��������� �� � �������� ���� �������� 1�����'���� ���� �� �� ������ 4����� ��� ��� ���������� �� ��� ��S� ���� 7189 �� ��� �����������������$��� 2��4 '4 6������4 777� !�+1.C+89�
H����� & � �������� � � D�"���� � � %����� � ��� &������% �)**6" -������ ����� �'�������� ��� ��� ��������� �� ��� ������ �� �$� �������� ����� �����+� ��� �������� �:7/� ��� ���� 7189 ��� ����� $��� 7189 -=76.�8� '4 6���4 -���4717� )*)6;C)*)+;�
F����,��� 9 �)**1" ������ ��� �������� �� ��� #�������+�4�+������ �� 5������� 0���� 9:�; �/������ >�(�� ���"� D�����O-������ U /�� ��� &8*C..;�
3���"���� � � ����� D � ������� D � ���������� � � ������� D ���G����� ! �)**." ������� � �� ��� ������� � ��������$��� �������� �� ��<��� � �� ��� �������� �� �� � ���������� �� �� ����� ��� ���� 7�189�� '4 6������4;;)� ;8&C;86�
#�� �� ������ ��<��� � ������ �� ���� ���� ��� ���� ��������� �� ��� 5��(��0� ::(> ��� E3(D ��������� $��� ���
� ������ ����� ��)8;*6;�
;)+ 0���� ������� ��+ $��� #��1����
�(� 0$� ! ��� � D��� ��� &���� '������� �)***"� 7+� ;))C;)+