Reactive Oxygen SpeciesROS 活 性 氧 研 究

生物體在接受到外界環境刺激，例如UV照射或在進行有氧代謝的過程中會產

生帶有自由電子的活性氧類(Reactive oxygen species, ROS)。活性氧類在細胞

中可扮演調節訊息傳遞的角色，亦可幫助生物體對抗外來的病原菌。

然而，細胞內的活性氧類亦會攻擊蛋白質、DNA、脂質等，導致膜脂、蛋

白質和核酸的損傷，引發細胞凋亡(apoptosis)現象。因而在生物體中，有

相對應的抗氧化系統用以對抗這些存在於細胞中的活性氧類。當活性氧類

與抗氧化系統失去平衡時即會對細胞產生氧化應激(Oxidative Stress)。

來自美國的GeneCopoeia 公司及來自日本的Goryo公司、Dojindo公司具一系列

用於ROS研究的相關產品。

Reactive Oxygen Species

contentsROS Production

ROS Detection

Defense mechanism

Damaging Effects

04

06

07

11

Metal Ions ROS

ROS+

Not oxidized by

Inte

nsit

y

Detects only Cul

none none0

0.5

1

CollMnll H2O2 OCI- +OHZnllNill Fell Cul Cull0

0.5

1

ROS Production

● Hypoxia detection

缺氧(hypoxia)為眾多導致ROS激增的原因之一，傳統偵測細胞是

否處於缺氧狀態的方式是偵測HIF-1α的表現量或是使用

pimonidazole，然而此兩種方法都存在著操作程序繁複的缺點。

來自日本的Groyo公司為您呈現更快速、簡便的方法：Hypoxia

detection probe – MAR，僅需簡單的洗滌(wash)、孵育

(incubation)，不需固定細胞，即可獲得缺氧活細胞影像，並且

可使用流式細胞儀進行分析。

Hypoxia螢光探針MAR

★可進行活細胞影像分析

★靈敏度等同於pimonidazole ★可使用流式細胞儀進行分析

A549細胞在不同氧氣濃度環境下的MAR活細胞染色影像

使用MAR或Pimonidazole進行染色的A549細胞在不同缺氧環境條件

下的螢光強度。

使用MAR搭配流式細胞儀分析在缺氧環境下的A549細胞。

使用Mito-FerroGreen偵測在HeLa細胞粒線體中的

亞鐵離子。

A : ControlB : 處理Ammonium iron (II) sulfateC : 處理Ammonium iron (II) sulfate和Deferoxamine

Mito-FerroGreen僅會專一性地與亞鐵離子反應。

PO2 20% 8% 5% 1% 0.1%

λex : 498 nm λem : 520 nmA101-01 25 μg x 5

● Metal Ions Detection Probe

Mito-FerroGreen為Dojindo的新型綠色螢光探針，可專一性地偵測粒線體中的亞鐵離子(Fe2+)，用於活細胞影像成像，為研究亞鐵離子對

細胞影響的得力幫手。

亞鐵或銅離子會經由fenton reaction促使羥自由基(hydroxyl free radicals， • OH)產生，被認為與細胞損傷和死亡有關。日本Goryo公司和

Dojindo公司的亞鐵離子和銅離子螢光探針可用於觀察活細胞內的亞鐵離子或銅離子。

Mito-FerroGreen

★高專一性

★可用於活細胞影像分析

M489 1 set (50 μg x 2)

Mito-FerroGreen

Mitochondria

Cell-permeable

Cell-permeable

Fe2+

Mito-FerroGreen可穿透細胞膜，進到細胞內後與亞鐵離子反應，發出螢光並座落於

粒線體中。

Ni2+

Na+

K+

Zn2+

Cu2+

Ca2+

Cu+

Mg2+

Fe2+

Mn2+

Co2+

Fe3+

no meta

l

F/ F

0

35

30

25

20

15

10

5

0

Metal ions

A B C

Goryo的亞鐵離子螢光探針-- FeRhoNox™-1，可坐落在Golgi中並與

Fe2+反應發出紅色螢光。FeRhoNox™-1可專一性的跟亞鐵離子反應，

並且可用於活細胞影像分析。

Fe2+螢光探針– FeRhoNox™-1

★高專一性 ★可用於活細胞 影像實驗

★可特異性的與copper(I)反應，且不會受到ROS攻擊氧化

★高訊噪比(S/N)—與copper(I) 反應後螢光訊號可增強100倍 ★可用於活性胞影像分析

FeRhoNox™-1僅會專一性地與亞鐵離子反應。FeRhoNox™-1會坐落在Golgi中，並與Fe2+反應發出紅色螢光。

CopperGREEN為無色物質，當其與一價銅螯合後，很容易被水解並且發出

強烈的綠色螢光。

CopperGREEN 僅會在有Cu'金屬存在時發出強烈螢光。

使用CopperGREEN 觀察HeLa 細胞中的copper(I)。

使用FeRhoNox™-1 偵測 HepG2細胞裡面

的亞鐵離子。

GC901 50μg × 10

一價銅螢光探針 – CopperGREEN GC 902 50 nmol × 5

fluorescentno

fluorescent

CopperGREEN

Cu'

FeRhoNox™-1

N NN+

Fe2+

N NN+

C

Ni2+

Na+

K+

Zn2+

Cu2+

Ca2+

Cu+

Mg2+

Fe2+

Mn2+

Co2+

Fe3+

no meta

l

F/ F

0

35

30

25

20

15

10

5

0

Metal ions

λex : 505 nm λem : 535 nm

λex : 540 nm λem : 575 nm

λex : 440-490 nm λem : 510 nm

0504

ROS

Prod

uctio

nRO

S D

etec

tion

Def

ense

mec

hani

smD

amag

ing

Effec

ts

ROS

Prod

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nRO

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hani

smD

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ing

Effec

ts

Defense mechanism

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)為生物體內重要的抗

氧化酵素，可將超氧陰離子(Superoxide, O2.-) 歧化(dismutation)

成過氧化氫(hydrogen peroxide, H2O2)或單分子的氧。為了偵測

SOD的活性，現今已發展出數種直接或間接的方法。在這些方法

之中，最常使用的為利用nitroblue tetrazolium (NBT)，因其非常

方便且使用簡單。然而， NBT的產物為水溶性較差的formazan

dye，且NBT會與還原態的anthine oxidase反應，導致檢測結果失

去專一性。另一個常被用來檢測SOD活性的方法為cytochrome

C，然而cytochrome C與O2.-反應的能力過強，低活性單位的SOD

無法成功與其競爭O2.-，因此cytochrome C法有靈敏度較低的缺

點。Dojindo SOD Assay Kit-WST為便利且具高靈敏度的SOD分析

套組。套組使用高水溶性的tetrazolium salt，WST-1。WST-1在與

O2.-反應還原後會產生水溶性並在450 nm具有吸光波峰的

formazan dye。WST-1被O2.-還原的比例與xanthine oxidase活性呈

線性相關且會被SOD抑制。因此，SOD 或 SOD-like 物質的IC50

(50% inhibition concentration)可經由比色法來決定。

Superoxide dismutase ( SOD ) Assay Kit-WST

Dojindo SOD Assay Kit-WST原理：

利用高水溶性的WST-1，並在待測樣品內加入Xanthine及Xanthine Oxidase。Xanthine及Xanthine Oxidase反應產生O2

.-，生成的O2.-會將

WST-1還原成WST-1 formazan (在450 nm具吸光值)。同時，待測樣品中的

SOD會歧化O2.-，抑制WST-1 formazan形成。因此待測樣品中SOD活性越

高，可偵測到的O.D. 450 nm讀值越低。

* Kit Component

★使用高水溶性的WST-1

★微孔盤比色法分析

★測量讀值為100%的SOD抑制結果

★不須調整pH值即可得知 IC50

★背景值及雜訊低

★靈敏度高

Assay Procedure

References

樣品在經過不同孵育

時間後所獲得的抑制

曲線。

Add 20 μl sample solution or H2O to each well.

1

Add WST working solution, dilution buffer, and enzyme working solution to each well as indicated.

2

Incubate the plate at 37ºC for 20 minutes.

3

Read O.D. at 450nm.

4

SOD Assay Kit-WST

S311 500 testsSOD or SOD-like activity detection

THP-1 cells monosodium urate (MSU)

Samples from ReferencesTreatments

Jhang, J.J., et al., Monosodium urate crystals trigger Nrf2- and heme oxygenase-1-dependent inflammation in THP-1 cells. Cell Mol Immunol, 2015. 12(4): p. 424-34.

C. elegans B12-deficient Bito, T., et al., Vitamin B12 deficiency results in severe oxidative stress, leading to memory retention impairment in Caenorhabditis elegans. Redox Biol, 2016. 11: p. 21-29.

Arabidopsis thaliana

CSD1 overexpression and knockout of NADPH oxidase genes

Wu, J., et al., Deficient plastidic fatty acid synthesis triggers cell death by modulating mitochondrial reactive oxygen species. Cell Res, 2015. 25(5): p. 621-33.

HPF730120

65826

17<7

ROS1200560

360096

<1<12

<1

APF74006600

862661

190150710

2000

DCFHOH

ONOOOCl1O2

O2

H2O2

NOROO

Autoxidation

ROS Detection

傳統的DCFH-DA染劑即使是在缺乏ROS的環境中，也容易在光照後發生自體氧化、產生螢光，缺乏專一性。

HPF及APF在光照後較不易發生自體氧化現象，且可專一性的偵測hROS。

Hydroxyphenyl Fluorescein (HPF) & Aminophenyl Fluorescein (APF)

其他ROS螢光探針

細胞在黑暗中，分別與DCFH-DA及HPF一起孵育

30分鐘，接著接受雷射光照10秒。DCFH-DA產生

了強烈的自體氧化現象（圖A）。

HPF及APF可專一性的與hROS反應，並且不易發生自

體氧化現象。

GeneCopoeia、Goryo和Dojindo提供一系列用於偵測細胞內不同ROS的螢光探針。

強檔推薦

SK3001-01

SK3001-02 490/515

Hydroxyphenyl Fluorescein (HPF)

Hydroxyphenyl Fluorescein (HPF) Solid type

1mg (0.47mL DMF Solution)

1mg

490/515 For measurements of hROS (・OH, ONOO－) by green fluorescence.

Cat. No.Brand Ex/Em (nm)Product Name Application fluorescenceSize

SK3002-01

SK3002-02 490/515

Aminophenyl Fluorescein (APF)

Aminophenyl Fluorescein (APF) Solid type

For measurements of hROS (・OH, ONOO－,HClO) by green fluorescence.

1mg (0.47mL DMF Solution)

1mg

490/515

C260

C261

C262

C263

C264

A057

C291

C3004-01

GC3006-01

GC3007-01

GC3008-01

SK3003-01

MT05

DHE

DHR 123

DHR 6G

H2DCFDA

Carboxy-H2DCFDA

ROS Assay Kit

Amplex Red

OxiORANGE™

HySOx

HYDROP (Cell Permeable)

HYDROP-EX

NiSPY-3

Si-DMA

1 mg

2 µg

490/515

600/685

25 mg

10 mg

25 mg

50 mg

25 mg

1,000 assays

10 mg

100 nmol ×5

20 μg×5

30nmol×3

30nmol×3

300/610

507/529

528/551

495/529

495/529

495/529

571/585

553/577

553/574

492/518

492/516

Superoxide indicator

ROS indicator

ROS indicator

ROS indicator

ROS indicator

ROS indicator

HRP (Horseradish Peroxidase) Substrate

For measurements of hROS (・OH, HClO) by orange fluorescence.

For measurements of intracellular hypochlorous acid (HClO).

For measurements of intracellular hydrogen peroxide (H2O2)

For detection and quantification of hydrogen peroxide in solutions

For measurements of peroxynitrite (ONOO-)

For Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging

Cat. No.Brand Ex/Em (nm)Product Name ApplicationSize fluorescence

0706

ROS

Prod

uctio

nRO

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tion

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Effec

ts

ROS

Prod

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nRO

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Effec

ts

Glutathione (GSH)為動物組織、植物組織、細菌和酵母菌中最豐富的巰基(thiol，SH)化合物。GSH具多種不同角色，包括對抗活性氧類

(Reactive Oxygen Species，ROS)、維持蛋白質的巰基基團等，在這些反應中，GSH會轉變成Glutathione Disulfide (GSSG:氧化態的GSH)，

而GSSG又可被Glutathione Reductase還原成GSH。在有機生物中，Glutathione通常以還原態(GSH)存在，GSH會因氧化壓力的刺激轉變

成氧化態(GSSG)，因此GSH和GSSG的比例常被當成氧化壓力的指標。Dojindo提供兩種不同的Glutathione定量套組，Total Glutathione

Quantification Kit (Cat# T419)使用DTNB，可偵測樣品內Total Glutathione (GSH+GSSG)含量。GSSG/GSH Quantification Kit (Cat# G257)使用

DTNB搭配GSH遮蔽試劑，可以單獨偵測GSSG及Total Glutathione，並藉由兩者的量推算出樣品中GSH的含量。

傳統在偵測Glutathione時，常因樣品中Glutathione含量太低而導致實

驗失敗。Dojindo利用DTNB搭配Glutathione Reductase所建立的

DTNB-Based Recycling System克服了此項挑戰。DTNB可和GSH反應產

生GS-TNB和黃色的TNB (在412 nm具吸光波峰)，而生成的GS-TNB又會

經由Glutathione Reductase的作用再次轉成GSH，新生成的GSH可再進

入下一個循環。如此的循環反應可大幅提升偵測靈敏度，且僅需簡單

地測量在412 nm的吸光值即可了解樣品中Total Glutathione的濃度。此

套組依標準方法，可定量從1 μM 到 100 μM的Total Glutathione。若樣

品中Glutathione濃度很低，例如血液樣品，則需要較久的孵育時間。

● Metal Ions Detection Probe

Total Glutathione Quantification Kit

DTNB-Based Recycling System：

在待測樣品中加入DTNB和Glutathione Reductase。DTNB會被GSH還原

成黃色的TNB，而生成的GS-TNB會再經由Glutathione Reductase作用還

原成GSH並進入下一個循環。

八個不同樣品在經過不同孵育

時間後的吸光值變化。

GSSG/GSH Quantification kit 原理：使用DTNB-Based Recycling System搭配不會影響GSSG反應的GSH遮蔽試劑。GSH遮蔽試劑可讓GSH失活，因而只能偵測到

GSSG。若要偵測Total Glutathione則不需在待測樣品中加入GSH遮蔽試劑。GSH的量可藉由Total Glutathione減去GSSG而得知。

FAQ

有顏色的樣品也可以使用嗎?Q1Q1

可以使用此套組各別獨立偵測

Mn-SOD 和 Cu/Zn-SOD嗎?Q2Q2

可以使用此套組來偵測超氧陰離

子(superoxide anion，O2.-)嗎?Q3Q3

可以，建議稀釋樣品讓干擾降至最低。將樣品O.D.讀值減去背景控制組O.D.讀值

即可消除樣品本身的顏色影響。然而，若樣品中SOD活性太低則有可能導致偵測

失敗。

可以。若要獨立偵測Mn-SOD活性可在分析過程中使用potassium cyanide (KCN)

阻斷Cu/Zn-SOD；若要獨立偵測Cu/Zn-SOD活性，則可藉由將總SOD活性扣除

Mn-SOD活性來得知。

不行，然而您可以簡單的使用WST-1而非整組套組來偵測超氧陰離子。由於超氧

陰離子不穩定且易與多種物質反應，因此要偵測系統所產生的總超氧陰離子量是

很困難的。使用WST-1來定量超氧陰離子需要有標準品，本套組中的

xanthine-xanthine oxidase 系統可用來當作超氧陰離子相關產量的標準。

僅需偵測Total Glutathione (GSH+GSSG)濃度?

GSSG/GSH Quantification kit使用與Total Glutathione Quantification Kit一樣的DTNB-Based Recycling System，唯套組中另附有GSH遮蔽試

劑，樣品中的GSH可在加入GSH遮蔽試劑後被去活化。因此，只有GSSG可將DTNB還原生成在412 nm具吸光值的產物。若要偵測Total

Glutathione (GSH+GSSG)可選擇不在樣品中加入GSH遮蔽試劑，而GSH的量則可藉由Total Glutathione減去GSSG而得知。套組的測量限

制為：GSH/GSSG 濃度從 0.5 μM 到 50 μM ； GSSG濃度從0.5 μM到25 μM。

GSSG/GSH Quantification Kit

選我!! 選我!!

選我!! 選我!!

需偵測Total Glutathione (GSH+GSSG)、GSH及GSSG濃度?

★簡易快速 – 微孔盤比色法測量

★靈敏度高 – 採用DTNB-Based Recycling System

★偵測範圍廣 – 可從 1 μM 到 100 μM

★簡易快速 – 微孔盤比色法測量

★靈敏度高 – 採用DTNB-Based Recycling System

★偵測範圍廣 – GSH遮蔽試劑不影響GSSG，可專一且精確地

偵測GSH、GSSG和Total Glutathione

Total Glutathione Quantification Kit

T419 100 testsTotal glutathione detection

GSSG/GSH Quantification Kit

G257 200 testsTotal glutathione, GSH, GSSG detection

Assay Procedure Assay Data

Add enzyme and co-enzyme soIutions to each well.

Add GSH standard soIn or sample soIution to each well and incubate at 37°C for 10 min.

Add substrate soIution to each well and incubate at 37ºC for 5-15 min.

Read O.D. at 450 or 415 nm.

1 2

3 40 5 10 15 20 25 30

Time(min)

3.0

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

0

Abso

rban

ce a

t 405

nm

▲▲

▲▲

▲▲

▲ ▲

●

■♦

●

● ■

■

■

■

♦♦

♦♦

♦♦

♦

GSSGGSH

5-Mercapto-2-nitrobenzoic acid

HOOC

TNB

GSH

DTNB

O2N

S-

(λmax: 412 nm)

HOOC

O2N

SCOOHS

NO2

Glutathione reductase

Glutathione reductase

* Kit Component

GSSG

GSH

5-Mercapto-2-nitrobenzoic acid

HOOC

TNB

GSH

DTNB

O2N

S-

(λmax: 412 nm)

HOOC

O2N

SCOOHS

NO2

Glutathione reductase

GSH Masking

GSSG measurement

Masking reagent

Glutathione reductase

* Kit Component

Sample

0908

ROS

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ROS

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Damaging Effects

DNA與活性氧類(ROS)，尤其是氫氧自由基（hydroxyl radical,‧OH）

間的相互作用會使DNA產生氧化損傷。氫氧自由基對DNA的攻擊將導

致DNA產生鏈斷裂、各種糖修飾以及鹼基的遺失等。AP位點(

Apurinic/apyrimidinic sites, AP sites)為DNA中缺乏嘌呤或嘧啶的位點，

其為DNA受到活性氧類攻擊後所產生的主要損傷類型之一。Dojindo

DNA Damage Quantification Kit利用帶有生物素(Biotin)的醛反應性探針

(Aldehyde Reactive Probe，ARP) 特異性地與AP位點上的醛基反應結

合。接著再利用avidin-biotin assay，使用比色法來對這些帶有生物素

標籤的AP位點進行計數檢測。

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting -

★可偵測genomic DNA的abasic sites數目

★微孔盤比色法分析

★偵測範圍：1-40 abasic sites / 1x105 DNA鹼基對

★附六管不同AP Sites數量DNA標準液

Assay Procedure

Add ARP solution to a sample DNA solution. Incubate at 37°C for 1 hr.

1

Add HRP-streptavidin solution to each well and incubate at 37°C for 1 hr.

5

Transfer the ARP reaction mixture to a filtration tube and spin the tube to purify ARP-labeled DNA.

2

Discard the solutions and wash well with washing buffer.

6

Add the ARP-DNA standard or ARP-labeled sample DNA to each well. Add DNA binding solution, and leave the plate at RT overnight.

3

Add Substrate solution to each well and incubate at 37°C for 1 hr.

7

Discard the solutions and wash wells with washing buffer.

4

Read the O.D. at 650 nm.

8

-Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting

DK02-10 5 samplesDK02-12 20 samplesAbasic Site Quantification in Genomic DNA

TMB

HRP-Streptavidine

AP site

Biotin

ARP (Aldehyde Reactive Probe)

DNA

● DNA Damage Assay

FAQ

什麼樣的東西會干擾Glutathione

分析?Q1Q1還原劑，例如ascorbic acid、beta-mercaptoethanol、dithiothreitol和cysteine等及巰

基反應物(thiol reactive compounds)，例如maleimides等會干擾Glutathione分析。因

此避免在樣品製備時使用到還原劑及巰基反應物。

一般使用的GSH遮蔽試劑2-Vinylpyridine (2-VP) 會影響到GSSG的測

量反應。GSSG Standard在加入2-VP後，反應O.D.讀值明顯下降。

Dojindo 的GSH遮蔽試劑避免了此問題，不會對GSSG的測量反應

產生影響，因而可精確地得知樣品中的GSSG和GSH的比例。

Selective Quantification

ReferencesPurpose References

Miyake, M., et al., Skeletal muscle-specific eukaryotic translation initiation factor 2alpha phosphorylation controls amino acid metabolism and fibroblast growth factor 21-mediated non-cell-autonomous energy metabolism. FASEB J, 2016. 30(2): p. 798-812.

Determine the glutathione (GSH) concentrations in skeletal muscle homogenates

Measure the reduction activities in Liver tissues

To quantify total intracellular glutathione in osteoblast cell

Bito, T., et al., Vitamin B12 deficiency results in severe oxidative stress, leading to memory retention impairment in Caenorhabditis elegans. Redox Biol, 2016. 11: p. 21-29.

To quantify total GSH in unirradiated control 0FR cells and 31FR cells

Shimura, T., et al., Mitochondrial reactive oxygen species perturb AKT/cyclin D1 cell cycle signaling via oxidative inactivation of PP2A in lowdose irradiated human fibroblasts. Oncotarget, 2016. 7(3): p. 3559-70.

Wu, J., et al., Deficient plastidic fatty acid synthesis triggers cell death by modulating mitochondrial reactive oxygen species. Cell Res, 2015. 25(5): p. 621-33.

Assay Procedure

Add GSSG, GSH standard sol. and Sample A or Sample B, thenadd buffer solution.

1

Incubate at 37ºC for 1hr.

2

Add substrate, enzyme and coenzyme working solution.

3

After incubate at 37ºC for 10 min and measure the O.D. at 405nm.

4

1110

ROS

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Effec

ts

Fluorescent images of HeLa cells after stimulation with rotenone.

FAQ

樣品可否是ssDNA或RNA？Q1Q1 由於ssDNA或RNA於微孔盤的結合效率與dsDNA不同，因此此試劑盒不適合用於確

認ssDNA或RNA的AP位點數目。

如何製備DNA樣品？Q2Q2 您可以使用平常使用的方法。然而，在DNA萃取過程中，通常每1×105個鹼基對會

產生2到4個AP位點。因此，使用相同方法製備每個DNA樣品。

MitoPeDPP是一種細胞膜滲透探針，可定位於線粒體中，

用於活細胞中的親脂性過氧化物成像。

For lipophilic peroxide imaging in mitochondria of living cells

References

Hippocampal cells methyl-methane sulfonate (MMS)

Samples from ReferencesTreatments

Bravard, A., et al., The prion protein is critical for DNA repair and cell survival after genotoxic stress. Nucleic Acids Res, 2015. 43(2): p. 904-16.

Huh-7 cells SIRT3 or HBx expressing Ren, J.H., et al., Protective Role of Sirtuin3 (SIRT3) in Oxidative Stress Mediated by Hepatitis B Virus X Protein Expression. PLoS One, 2016. 11(3): p. e0150961.

C127I cells doxycycline (Dox) Jennifer L.I., et al., Tumor-associated APE1 variant exhibits reduced complementation efficiency but does not Promote cancer cell phenotypes. Environmental and Molecular Mutagenesis, 2017, 58(2): p. 84-98

● Lipid Peroxide

MitoPeDPP λex : 452 nm λem : 470 nmM466 5 µg x 3

Liperfluo是由Dojindo設計和開發，可以特異性檢測脂質過氧化物的螢光探針。由於氧化型Liperfluo的激發波長和發射波長分別為524

nm和535 nm，因此可將對樣品的傷害和樣品的自發性螢光降至最低。Liperfluo 可用於螢光顯微鏡和流式細胞儀，進行脂質過氧化物

分析。

For lipid peroxides detection with fluorescence microscopy and flow cytometry

Liperfluo λex : 524 nm λem : 535 nmL248 50 μg x 5

Spy-LHP是一種新開發的用於磷脂過氧化物 (phospholipid peroxide)活細胞成像的螢光探針。Spy-LHP本身為低螢光化合物，在被脂氫過

氧化物 (lipid hydroperoxide)氧化後，才會發出高度螢光。不同於類似的化合物 -- DPPP需要以紫外光激發，Spy-LHP使用524nm激發，

在535 nm處具有最大波峰的光譜特性，對活細胞的損傷較小。

For live cell imaging of phospholipid peroxide

Spy-LHP λex : 524 nm λem : 535 nmS343 1 mg

DPPP是一種非螢光化合物，它與氫過氧化物

(hydroperoxide)反應後會產生可發出螢光的DPPP氧化

物，可搭配Post-column HPLC法偵測樣品溶液中的

phospholipid peroxide。

For ipid peroxides detection with HPLC

DPPP λex :352 nm λem : 380 nmD350 10 mg

Innocurate SH-SY5Y cells(6.0 x 105 cells/well) to a 6-well plate.Incubate the plate at 37 ºC for overnight.Add Liperfluo, DMSO solution(final conc. 20 μM) and incubate at 37 ºC for 15 min.Add either Cumene Hydroperoxide(final conc. 100 μM) or AIPH*(final conc. 6 mM).Incubate at 37 ºC for 2 hours.Observe fluorescent by microscope.

1.2.3.4.5.6.

Fluorescent image

Cum

ene

AIP

HC

ontr

ol

Bright-field image

Lipid peroxide

Live cell imaging of lipid peroxide

1312

ROS

Prod

uctio

nRO

S D

etec

tion

Def

ense

mec

hani

smD

amag

ing

Effec

ts

ROS

Prod

uctio

nRO

S D

etec

tion

Def

ense

mec

hani

smD

amag

ing

Effec

ts

過量又未即時清除的活性氧物質會促使細胞走向細胞凋亡 (Apoptosis)，GeneCopoeia提供細胞凋亡四個階段的分析工具： Annexin V

binding assays、Caspase activity assays、Mitochondrial membrane potential assays及DNA fragmentation and morphology assays kit

在細胞凋亡的早期，原本在細胞膜內側的磷脂酰絲氨酸

(Phosphatidylserine, PS)會從內側翻轉到細胞膜外側。透過

可與PS高親和力、特異性結合的螢光標定Annexin V，即可

簡單、快速地檢測出細胞早期凋亡情況。

● Apoptosis Assay

Annexin V Assay

Apoptotic cell

Plasma membrane

Mitochondrium

Nucleus

Annexin V

PS

Ca2+

Cytoplasm

Cytochrome cSmac/DIABLO

Caspase cascadeDNA fragmentation

★靈敏度高—使用Andy Fluor™ 標記，明亮的信號

★靈活性—具多種顏色螢光可選擇，有利於多重染色實驗

★操作簡單—僅需30分鐘即可完成檢測

A029AA029B

A027

A028

A030

A031

A032

A033

A034

A035

A036

A037

A038

A039

A041

Annexin V, recombinant

eGFP Annexin V, 100 assays

Biotin-X Annexin V, 100 assays

Andy Fluor™ 350 Annexin V, 100 assays

FITC Annexin V, 100 assays

Andy Fluor™ 488 Annexin V, 100 assays

Andy Fluor™ 555 Annexin V, 100 assays

Andy Fluor™ 568 Annexin V, 100 assays

Andy Fluor™ 594 Annexin V, 100 assays

Andy Fluor™ 647 Annexin V, 100 assays

Andy Fluor™ 680 Annexin V, 100 assays

5X Annexin V Binding Buffer

0.5 mg1.0 mg

25 μg

25 μg

25 μg

25 μg

25 μg

25 μg

25 μg

25 μg

25 μg

25 μg

50 mL

Cat. No.Brand Product Name fluorescenceSize

Order Information

Caspase的活化為細胞凋亡初期的另一項特徵，其參與了最終導致細

胞凋亡的受質蛋白剪切。GeneCopoeia的Caspase 偵測套組使用

Caspase 3/7的特異性螢光受質，操作簡單，非常適合高通量實驗。

Caspase Assay

細胞凋亡時，粒線體所發生的膜電位變化可使用JC-1 螢光探針來做

偵測。JC-1在健康細胞中會因粒線體的高膜電位聚集在粒線體中，形

成多聚體，發出紅色螢光。而在凋亡或疾病細胞中，線粒體膜電位

下降，JC-1會以單體形式出現於細胞質中，發出綠色螢光。

Mitochondrial Membrane Potential Assays

在細胞凋亡發生的後期，DNA會產生裂解現象(DNA

fragmentation)，此現象可用TUNEL (terminal deoxynucleotidyl

transferase dUTP nick end-labeling)來進行分析。脫氧核糖核苷酸

末端轉移酶 (TdT)可將生物素 (biotin)標記的dUTP接到斷裂DNA的

3'-末端，接著再使用螢光或酵素標定的streptavidin，即可觀察

DNA裂解現象的發生與否。GeneCopoeia提供不同螢光顏色或比

色法的TUNEL偵測套組，套組可廣泛地用於石蠟包埋組織切片、

冷凍組織切片或細胞。

TUNEL Assay Kit

★特異性高—針對caspase-3/7特異性螢光底物

★簡單的操作流程—可用於細胞裂解液

★快速檢測—適用於高通量測試

★操作簡單—只需加JC-1探針到活細胞中， 無需裂解或洗滌

★檢測靈活—適用於流式細胞儀、螢光顯微鏡、 微量盤分析儀

★快速—只需30分鐘

★適用性廣—可用於石蠟包埋組織切片、冷凍組織切片及細胞

★靈敏度高—可檢測出極少量的凋亡細胞

★多色螢光可供選擇

使用TUNEL Andy Fluor™ 488 Apoptosis Detection Kit 和TUNEL Chromogenic Apoptosis Detection Kit 觀察小鼠組織切片中的DNA裂解現象

A044

A043A

A043B

Caspase-3/7 Z-DEVD-R110 Assay Kit

Caspase-3/7 Inhibitor Ac-DEVD-CHO

496/520

–

–

100 assays

1 mg

5 mg

Cat. No.Brand Ex/Em (nm)Product Name fluorescenceSize

Order Information

A049

A050

A051

A052

TUNEL Chromogenic Apoptosis Detection Kit

TUNEL Andy Fluor™ 488 Apoptosis Detection Kit

TUNEL Andy Fluor™ 594 Apoptosis Detection Kit

TUNEL Andy Fluor™ 647 Apoptosis Detection Kit

50 assay

50 assay

50 assay

50 assay

–

495/520

590/615

650/665

Cat. No.Brand Ex/Em (nm)Product Name fluorescenceSize

Order Information

A048 JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit 100 assays 514/529,590

Cat. No.Brand Ex/Em (nm)Product Name fluorescenceSize

Order Information

A025

A026

eGFP Annexin V and PI Apoptosis Kit

FITC Annexin V and PI Apoptosis Kit

Andy Fluor™ 488 Annexin V and PI Apoptosis Kit

Apoptotic, Necrotic, and Healthy Cells Detection Kit

100 assays

100 assays

100 assays

50 assays

475/509

–

347/440

490/519

495/520

553/565

578/602

590/615

650/665

680/700

–

Ex/Em (nm)

PI: 535/617 Andy Fluor™ 488: 495/520

PI: 535/617 Andy Fluor™ 488: 495/520 Hoechst 33342: 350/460

PI: 535/617 eGFP: 475/509

PI: 535/617 FITC: 495/519

1514

ROS

Prod

uctio

nRO

S D

etec

tion

Def

ense

mec

hani

smD

amag

ing

Effec

ts

ROS

Prod

uctio

nRO

S D

etec

tion

Def

ense

mec

hani

smD

amag

ing

Effec

ts

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