ISOLASI, IDENTIFIKASI DAN PEMURNIAN PIPERIN DARI BIJI LADA PUTIH (Piperis Albi Fructus) DARI TANAMAN Piper nigrum L.

KELOMPOK I-B :RINA DWIJAYANTI14082552A

PRAKTIKUM KIMIA PRODUK ALAMDOSEN PENGAMPU: MAMIK PONCO RAHAYU, S.Si.,Apt

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SETIA BUDISURAKARTA2011

PERCOBAAN IISOLASI, IDENTIFIKASI DAN PEMURNIAN PIPERIN DARI BIJI LADA PUTIH (Piperis Albi Fructus) DARI TANAMAN Piper nigrum L.

1. TUJUANDapat melakukan isolasi piperin dari biji lada putih.

2. DASAR TEORILada, sudah dikenal sebagai penyedap makanan,mengatasi baud an rasa makanan yang beraroma tak sedap, serta pengawet daging (Septiatin, 2008). Ada dua macam lada yang menjadi komoditi perdagangan yaitu lada hitam dan lada putih. Lada hitam diperoleh dengan memetik buah yang masih hijau, mengupasnya, difermentasi untuk menambah rasa lada, kemudian dikeringkan di bawah sinar matahari, dan rasanya lebih pedas. Sedangkan lada putih diperoleh dengan memetik biji masak merah,diremas perlahan-lahan dan direndam dalam air, kulit dan daging buah dibuang sebelum dikeringkan di sinar matahari (Septiatin, 2008). Lada mengandung minyak atsiri, pinena, kariofilena, lionena, filandrena alkaloid piperina, kavisina, piperitina, piperidina, zat pahit dan minyak lemak. Rasa pedas disebabkan oleh resin yang disebut kavisin. Kandungan piperine dapat merangsang cairan lambung dan air ludah. Selain itu lada bersifat pedas, menghangatkan dan melancarkan peredaran darah (Septiatin, 2008).Ladaataumericaadalahrempah-rempahberwujud bijian yang dihasilkan tanaman Piper nigrum L. Lada sangat penting dalam komponen masakan dunia dan dikenal luas sebagai komoditi perdagangan penting didunia.Piperin merupakan suatu senyawa yang sangat bermanfaat dalam kesehatan, misalnya piperin berkhasiat sebagai karminativa, bumbu masak, hepatoprotektor, imunomodulator, obat cacing, anti asma, anti nyeri. Piperin banyak ditemukan pada simplisia yang termasuk dalam keluarga Piperaceae, yaitu pada Piperis Nigri Fructus, Piperis Albi Fructus, Piperis Retrofracti Fructus, dan sebagainya. Tanaman yang termasuk dalam keluarga Piperaceae sangat banyak ditemukan hampir seluruh dataran rendah di Indonesia, karena tanaman ini tidak tahan dengan genangan air. Piperis nigri sangatlah mudah ditemukan di seluruh daerah di Indonesia dengan harga yang relatif murah. Pada umumnya kandungan piperin dalam Piperis nigri sebanyak 1,7- 7,4%.

Sistematika TanamanNama tanaman : Lada ; Merica; Pedes; Black/White PepperNama latin : Piper nigrum L.Suku :Piperaceae Sinonim : Piper globrispicum DC.Kingdom : Plantae (Tumbuhan)Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua / dikotilSub Kelas : MagnoliidaeOrdo : PiperalesFamili : Piperaceae (suku sirih-sirihan)Genus : PiperSpesies : Piper nigrum L. (http://lansida.blogspot.com/2010/06/lada-hitam-piper-nigrum-l.html)

3. METODE

i. Soxhletasi

Prinsip dari soxhletasi yaitu penyarian secara terus-menerus sehingga penyarian lebih sempurna dengan pelarut yang relative sedikit. Jika penyarian telah selesai maka pelarutnya diuapkan dan sisanya adalah zat yang tersari. Biasanya pelarut yang digunakan yaitu pelarut yang mudah menguap atau yang mempunyai titik didih rendah. Kelebihan dari soxhletasi yaitu, proses ekstraksi berjalan sempurna, pelarut sedikit, prosesnya lebih cepat. Sedangkan kelemahannya yaitu tidak dapat digunakan untuk isolasi senyawa yang termolabil atau bahan tambahan yang peka terhadap suhu, dan memerlukan energi listrik.ii. Isolasi

Karakter dasar berbagai alkaloid digunakan untuk mengisolasinya. Alkaloid diambil ke dalam larutan asam berair (umumnya asam hidroklorida, sitrat, atau tartarat) dan komponen netral atau bersifat asam dari campuran asal dipisahkan dengan ekstraksi pelarut. Setelah larutan berair dibasakan, maka alkaloid diperoleh dengan ekstraksi ke dalam pelarut yang sesuai(Sastrohamodjojo, 1996).

iii. Ekstraksi

Bahan tanaman, terutama biji dan daun, sering banyak mengandung lemak, lilin yang sangat non polar. Karena senyawa tersebut sering menimbulkan persoalan terbentuk emulsi, maka senyawa-senyawa tersebut dipisahkan dari bahan tanaman sebagai langkah awal dengan cara perkolasi dari bahan tanaman dengan proteleum eter (Sastrohamodjojo, 1996). Kebanyakan alkaloid tidak larut dalam proteleum eter. Namun demikian ekstrak harus di cek untuk mengetahui adanya alkaloid dengan menggunakan salah satu pereaksi pengendap alkaloid seperti disebutkan diatas. Bila sejumlah alkaloid larut dalam proteleum eter, maka bahan tanaman pada awal ditambah dengan asam berair untuk mengikat alkaloid sebagai garamnya (Sastrohamidjojo, 1996).

iv. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Preparasi perangkat KLTyang digunakan:Fase diam: silika gelFase gerak: toluen-etil asetatBlangko/ pembanding: piperin standarKLT dapat digunakan untuk memisahkan berbagai senyawa seperti ion anorganik, kompleks senyawa senyawa organik dengan anorganik, dan senyawa senyawa organik baik yang terdapat di alam dan senyawa senyawa organik sintetik. Kelebihan penggunaan kromatografi lapis tipis dibandingkan dengan kromatografi kertas ialah karena dapat dihasilkannya pemisahan yang lebih sempurna, kepekaan yang lebih tinggi, dan dapat dilaksanakan dengan lebih cepat. Banyak pemisahan yang memakan waktu berjam-jam bila dikerjakan dengan kromatografi kertas, tetapi dapat dilaksanakan hanya beberapa menit saja bila dikerjakan dengan KLT. Empat macam adsorben yang umum dipakai ialah silika gel, alumina, kieselguhr, dan selulosa. Sampel yang merupakan campuran senyawa yang akan dipisahkan, dilarutkan dalam zat pelarut yang mudah menguap, misalnya kloroform atau zat pelarut lain yang serupa, yang mempunyai titik didih antara 50-100 C. Tetesan sampel harus di usahakan sekecil mungkin dengan meneteskan berulang kali, dengan di biarkan mengering sebelum tetesan berikutnya dikerjakan. Pemilihan sistem pelarut yang dipakai didasarkan atas prinsip like dissolves like, yakni untuk memisahkan sampel yang bersifat non polar digunakan sistem pelarut yang bersifat non polar juga. Penggunaan sinar ultraviolet dapat memberikan fluoresensi pada plat yang mengandung unsur fosfor (Adnan, 1997).

4. ALAT DAN BAHAN

ALAT Perangkat penyari soxhlet Pembakar spirtus Beker glass Batang pengaduk Cawan porselen Corong Perangkat KLT (plat alumina, chamber, kertas saring) Glasswool

BAHAN Serbuk buah Piper nigrum L. Etanol 96% KOH-Etanolik 10% Silika gel GF 254 Benzen Etil asetat Anisaldehida-asam sulfat

5. GAMBAR ALATSOXHLET

6. CARA KERJA:

a. EKSTRAKSI

Masukkan dalam soxhlet + etanol 96 % sebanyak 1,5 x sirkulasi ad filtrat tak berwarnaampasfiltratbuangSisa diuapkan diatas penangas air ad kental+10 ml KOH-etanolik 10% aduk ad ada endapanPisahkan sari dengan bagian yg tak larut dengan glass wollSari jernih didiamkan dlm almari es sampai kristal optimumKristal dicuci dgn etanol 96 % dikeringkan dlm almari pengering pd suhu 40o selama 30-45 menit30 g serbuk merica bungkus kertas saringTerbentuk kristal3ml dl flakonAmati dan hitung randemennyaAmati titik leburnya

b. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kristal piperin dilarutkan dengan etil asetatKemudian ditotolkan pada kertas silika gel,totolkan juga Sari 1 sebelum penambahan KOH-etanolik dan standart piperinDielusi dengan fase gerak toluene : etil asetat (70 :30)Amati bercak dengan sinar tampak, uv 254 dan sinar uv 365.selanjutnya semprot bercak dengan pereaksi semprot anisaldehida-asam sulfat(110o)Hitung Rf-nya

7. DATA PERCOBAAN1. Metode SoxhletasiDigunakan serbuk biji lada putih berat 30 gram diekstraksi dengan soxhletBerat kertas timbang + ekstrak 0,834 gramBerat kertas timbang + sisa 0,467 gram +

Berat ekstrak 0,367 gram = 367 mg

2. Metode Kromatografi Lapis Tipis

Data hasil elusidasi antara ekstrak, sampel yang didapat dan standar piperin:

A (cm)B (cm)C (cm)

1. 3,22. 4,03,11. 3,22. 2,0

Perhitungan nilai RfRf =

x= jarak yang ditempuh solut; y= jarak yang ditempuh eluen sampai tanda batas

A. ; B. C. ; Ilustrasi Plat KLT

Keterangan:A= ekstrakB= sampelC= standar piperin

Organoleptis isolat :Warna : kuningBentuk: serbuk lengket/ tidak terjadi kristal jarumBau: menyengatRasa: pedasPerhitungan Rendemen:R= x 100%= x 100% = 1,22 %

8. PEMBAHASAN

a. EkstraksiEkstraksi merupakan proses penarikan, pemisahan dari bahan padat maupun cair dengan bantuan pelarut. Bahan tanaman, terutama biji dan daun, sering banyak mengandung lemak, lilin yang sangat non polar. Karena senyawa tersebut sering menimbulkan persoalan terbentuk emulsi, maka senyawa-senyawa tersebut dipisahkan dari bahan tanaman sebagai langkah awal dengan cara perkolasi dari bahan tanaman dengan petroleum eter (Sastrohamodjojo, 1996). Ekstraksi padat cair, dilakukan karena bahan yang dikehendaki dapat larut dalam solven pengekstraksi.. b. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)Menggunakan plat alumina (sebagai fase diam. Fase gerak yang digunakan toluen:etil asetat dijenuhkan dengan kertas saring di dalam chamber. Penotolan larutan ekstrak dan larutan standar/ blangko (piperin) dengan pipa kapiler arah tegak lurus, setelah ditotolkan dikering anginkan. Selanjutnya dideteksi pada sinar UV 254 nm, penandaan dilakukan jika terjadi peredaman (piperin+pelarut setelah ditotolkan berwarna agak kekuningan, dengan dideteksi sinar UV dapat terlihat dengan terdapat noda coklat yang menunjukkan interaksi antara fase diam-fase gerak-sampel). Pada 365 nm tidak menunjukkan adanya bercak noda, disini fraksi blangko sebagai awalan/ base line. Dengan ini, KLT mempunyai keuntungan yaitu: Waktu pemisahan yang cepat dan serbaguna (dapat digunakan berbagai senyawa tanaman). Mengetahui kemurnian suatu senyawa (suatu senyawa dielusi dengan eluen beberapa beda polaritas menghasilkan 1 bercak). Mendeteksi senyawa yang terkandung. Standarisasi sampel (dengan parameter Rf-nya)

Perhitungan Rf (tanpa satuan) untuk mengetahui : Seberapa jauh bercak terelusi (Rf idealnya tidak lebih dari 1 ( 0,2 0,8) Bagaimana sifat kelarutannya.

Ekstraksi dengan pelarut organik yang tidak campur air: kloroform, eter, metilen klorida dan toluen, dilakukan dengan perkolasi atau sokhletasi, dengan penambahan basa yang sesuai. Memakai pereaksi semprot jenis anisaldehid yang umum untuk mengetahui senyawa volatil/ minyak atsiri pada isolasi. Alkaloid kuartener dan N oksid larut dalam air.Ekstraksi dengan pelarut organik yang dapat campur dengan air seperti etanol dan metanol Dapat melarutkan alkaloid basa dan garam Ekstraksi dengan terlebih dulu dilakukan pengasaman Pengendapan alkaloid dengan reagen pengendap alkaloid Penggunaan kation exchange resin seperti pada penambahan KOH-etanolik.Kelompok kami tidak melakukan uji titik lebur dikarenakan kristal piperin tidak terjadi, yang terbentuk adalah ekstrak kental tidak berupa kristal jarum. Ini kontras jika ditinjau dari teorinya. Ini terjadi kemungkinan dari proses penyaringan resin yang kurang sempurna, atau bisa jadi bahan yang dikehendaki terhidrolisis oleh KOH-etanolik. Dengan masalah ini, kami membandingkan hasil yang kami dapat dengan kelompok praktikum untuk mengetahui letak kesalahan.

9. KESIMPULAN Ekstraksi biji lada putih (Piperis Albi Fructus) kelompok I-B menghasilkan rendemen piperin dari lada putih (Piperis Albi Fructus) sebanyak = 1,22 %. Dibanding dengan kelompok A piperin pada lada hitam sebanyak= 2,43 %. Jadi hasil % rendemen piperin terbanyak adalah pada biji lada hitam.

10. MENJAWAB SOAL1. Kandungan golongan senyawa yang umumnya terdapat pada tumbuhan sejenis dengan Piper nigrum L. adalah Alkaloid : piperin, kavisin, piperidin, piperitin, resinMinyak atsiri: kariofilen, pinen, lionen, felandrenProteinamilum2. Beda antara Piperis Nigri Fructus dengan Piperis Albi FructusHalPiperis Nigri FructusPiperis Albi Fructus

1. Pemanenan buah2. Proses pengolahan

3. Rasa

4. %Rendemen piperin yang didapatBuah dipetik sebelum masak/matangDifermentasi, lalu dikeringkan.

Lebih pedas dari lada putih.Lebih besar nilai % rendemennya.Sudah masak (merah)

Tidak difermentasi, cukup direndam selama beberapa hari, dihilangkan daging buah dan kulitnya.Kurang pedas dari lada hitam.Lebih kecil nilai % rendemennya.

3. Jika penambahan KOH-etanolik disertai dengan pemanasan maka akan terjadi hidrolisis dan terbentuk Kalium piperidin.Penambahan KOH-etanolik juga tidak boleh berlebihan selain dengan pemanasan, KOH-etanolik berfungsi sebagai pengendap resin, dalam hal ini resin adalah sebagai senyawa pengotor.

Reaksi:

4. Jalur biosintesis alkaloid

11. DAFTAR PUSTAKA

http://lansida.blogspot.com/2010/06/lada-hitam-piper-nigrum-l.html

http://www.google.co.id/url?sa=t&source=web&cd=13&ved=0CCIQFjACOAo&url=http%3A%2F%2Ffarmakonina.files.wordpress.com%2F2010%2F10%2Fv-alkaloid1.pptx&rct=j&q=jalur%20biosintesis%20alkaloid%20ppt&ei=8p-eTeaRIpCOvQOi4LCLBQ&usg=AFQjCNGJSiN7kapG1PlM6Lo-nv1QfwtQ-w&sig2=EvytmnP2LrhDvDZ18nsR3Q&cad=rja

Gambar 1. Biji lada hitam dan putihGambar 2. Elusidasi piperin

Gambar 3. Isolat piperin lada putih kelompok I-B

Gambar 4. Isolat piperin lada hitam kelompok A

Gambar 5. Deteksi piperin 254 nm

12. LAMPIRAN

12