کریپتوسپوریدیوم های معرفی روشی مناسب جهت جداسازی...
16
ن ش ر ی ه م ی ک ر ب ی و ل و ژ ی د ا م پ ز ش ک ی/ د و ر ه ه ش ت م، ش م ا ر ه د و م، 1 3 9 1 ، پ ی ا پ ی2 5 : 9 3 - 2 5 م ع ر ف ی ر و ش ی م ن ا س ب ج ه ت ج د ا س ا ز ی ا و و س ی س ت ه ا ی ک ر ی پ ت و س پ و ر ی د ی و م پ ا ر و و م ف ا ق د ب ا ک ت ر ی ا ز م د ف و ع ح ی و ا ن ا ت آ ل و د ه پ ر و ی ز ش ا ی ا ن1 * ، ز ی ن ب ا ص غ ر ی1 ، ا ل ه ه ا ب ر ا ه ی م ز ا د ه1 ، ز ه ر ا ا م ی د ی ا ن1 ، ف ی ص ل ض ر غ ا م ی1 1 - گ ر و ه ا ن گ ل ش ن ا س ی، د ا ن ش ک د ه د ا م پ ز ش ک ی، د ا ن ش گ ا ه ت ه ر ا ن، ت ه ر ا ن، ا ی ر ا ن ت ا ر ی خ د ر ی ا ف ت: 1 6 د ی6 3 9 6 ت ا ر ی خ پ ذ ی ر ش: 6 1 ب ه م ن6 3 9 6 چ ک ی د ه ک ر ی پ ت و س پ و ر ی د ی و م پ ا ر و و م ت ک ی ا خ ت ه ا ی م ش ت ر ک ب ی ن ا ن س ا ن و ح ی و ا ن م ی ب ا ش د، ک ه د ر ا ف ر ا د د چ ا ر ن ق ص ا ی م ن ی و ن و ز ا د ح ی و ا ن ا ت ب خ ص و ص گ و س ا ل ه ه ا ب ی م ا ر ی ز ا م ی ب ا ش د. ا و و س ی س ت ه ا ی د ف ع ش د ه ا ز د ا م ه ا ی آ ل و د ه ب ا ع ث آ ل و د گ ی م ح ی ط ب خ ص و ص م ن ا ب ع آ ب ه ا ی س ط ح ی م ی ش و ن د. ب ا ت و ج ه ب ه ا ی ن ک ه ح ت ی ت ع د ا د ک م ا و و س ی س ت م ی ت و ا ن د آ غ ا ز گ ر ب ی م ا ر ی ب ا ش د و ا ز ط ر ف د ی گ ر ا و و س ی س ت ه ا ب ه ض د ع ف و ن ی ک ن ن د ه ه ا ی م ت د ا و ل م ق ا و م ن د، ا ی ن ت ک ی ا خ ت ه م و ر د ت و ج ه م ح ق ق ی ن ق ر ا ر گ ر ف ت ه و ه م و ا ر ه ت ش ش د ه ا س ت ر و ش ه ا ی ج د ا س ا ز ی و ت خ ل ی ص ا و و س ی س ت ه ا ی ک ر ی پ ت و س پ و ر ی د ی و م ح ت ی د ر ن م و ن ه ه ا ی م ح ی ط ی د ا ر ا ی ت ع د ا د ک م ا و و س ی س ت ب ه ی ن ه ش و د و ا و و س ی س ت ه ا ی ی ک ا م خ ا ل ص و ع ا ر ی ا ز آ ل و د گ ی ه ا ی ب ا ک ت ر ی ا ی ی و س ا ی ر ن ا خ ا ل ص ی ه ا ب ه م ن ظ و ر م ط ا ل ع ا ت ا ی م ن و ل و ژ ی ک ی و م و ل ک و ل ی ف ر ا ه م گ ر د د. ر و ش ه ا ی م خ ت ل ف ی ک ه ت ا ک ن و ن ا س ت ف ا د ه ش د ه ا ن د ت ا ح د و د ی م و ف ق ی ت آ م ی ز ب و د ه ا ن د و ل ی ه ی چ ی ک ن ت و ا ن س ت ه ا ن د ب ه ا و و س ی س ت ع ا ر ی ا ز ب ا ک ت ر ی د س ت پ ی د ا ک ن ن د. ه د ف ا ز ا ی ن ت ح ق ی ق د س ت ی ا ب ی ب ه ا و و س ی س ت ع ا ر ی ا ز ب ا ک ت ر ی م ی ب ا ش د. د ر ا ی ن ت ح ق ی ق ب ه م ن ظ و ر ج د ا س ا ز ی ا و ل ی ه ا و و س ی س ت ه ا ی ک ر ی پ ت و س پ و ر ی د ی و م، ا ب ت د ا چ ه ا ر ر و ش ش ن ا و ر س ا ز ی ش ا م ل ا س ت ف ا د ه ا ز م ح ل و ل ن م ک ط ع ا م، م ح ل و ل س ا ک ا ر ز، ش ی ب غ ل ظ ت ی پ ل ک ا ن ی ف ا ی ک و ل و م ح ل و ل س ا ک ا ر ز5 5 د ر ص د ا س ت ف ا د ه گ ر د ی د. م ح ل و ل س ا ک ا ر ز5 5 د ر ص د ب ه ت ر ی ن ر و ش ب ر ا ی ج د ا س ا ز ی ا و ل ی ه ا و و س ی س ت ه ا ی ک ر ی پ ت و س پ و ر ی د ی و م ا ر ز ی ا ب ی گ ر د ی د. ج ه ت ح ذ ف ب ا ک ت ر ی و س ا ی ر ن ا خ ا ل ص ی ه ا ی ه م ر ا ه ا ز ف ی ل ت ر ن ی ت ر و س ل و ل ز( ب ا م ن ا ف ذ3 م ی ک ر و ن) ا س ت ف ا د ه گ ر د ی د. آ ن ا ل ی ز ا و و س ی س ت ه ا ی ا س ت خ ر ا ج ش د ه ن ش ا ن د ا د ک ه ا و و س ی س ت ه ا ی ح ا ص ل ا ز ف ی ل ت ر ا س ی و ن ع ا ر ی ا ز ه ر گ و ن ه ب ا ک ت ر ی ب و د و د ر ص د آ ن ه ا3 3 ا ر ز ی ا ب ی گ ر د ی د. ا گ ر چ ه ت ع د ا د ز ی ا د ی ا ز ا و و س ی س ت ه ا د ر ح ی ن ت خ ل ی ص ا ز د س ت ر ف ت ن د، ا م ا ا و و س ی س ت ه ا ی ت خ ل ی ص ش د ه ب ر ا ی آ ز م ا ی ش ا ت پ ر و ت ئ و م ی ک س ب س ی ا ر م ن ا س ب م ی ب ا ش ن د. ک ل م ا ت ک ل ی د ی: ک ر ی پ ت و س پ و ر ی د ی و م پ ا ر و م، ا و و س ی س ت، ش ن ا و ر س ا ز ی، ف ی ل ت ر ا س ی و ن ٭ ن و ی س ن د ه م س ئ و ل: پ ر و ی ز ش ا ی ا ن آ د ر س: گ ر و ه ا ن گ ل ش ن ا س ی، د ا ن ش ک د ه د ا م پ ز ش ک ی د ا ن ش گ ا ه ت ه ر ا ن، ت ه ر ا ن، ا ی ر ا ن. ت ل ف ن: 6 1 3 1 1 1 1 4 - 1 2 3 پ س ت ا ل ک ت ر و ن ی ک:
Transcript of کریپتوسپوریدیوم های معرفی روشی مناسب جهت جداسازی...
25-93 :25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبرکیم هیرشن
مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم هدولآ تاناویح عوفدم زا یرتکاب دقاف مووراپ
1یماغرض لصیف ،1نایدیما ارهز ،1هداز میهاربا ههلا ،1یرغصا بنیز ،*1نایاش زیورپ
ناریا ،نارهت ،نارهت هاگشناد ،یکشزپماد هدکشناد ،یسانش لگنا هورگ -1
6396 نمهب 61 :شریذپ خیرات 6396 ید 16 :تفایرد خیرات
هدیکچ تاناویح دازون و ینمیا صقن راچد دارفا رد هک ،دشاب یم ناویح و ناسنا نیب کرتشم یا هتخای کت مووراپ مویدیروپسوتپیرک
یاه بآ عبانم صوصخب طیحم یگدولآ ثعاب هدولآ یاه ماد زا هدش عفد یاه تسیسووا .دشاب یم ازیرامیب اه هلاسوگ صوصخب هب اه تسیسووا رگید فرط زا و دشاب یرامیب رگزاغآ دناوت یم تسیسووا مک دادعت یتح هک نیا هب هجوت اب .دنوش یم یحطس یاه شور تسا هدش شالت هراومه و هتفرگ رارق نیققحم هجوت دروم هتخای کت نیا ،دنمواقم لوادتم یاه هدننک ینوفعدض و دوش هنیهب تسیسووا مک دادعت یاراد یطیحم یاه هنومن رد یتح مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا صیلخت و یزاسادج یلوکلوم و یکیژولونمیا تاعلاطم روظنم هب اه یصلاخان ریاس و ییایرتکاب یاه یگدولآ زا یراع و صلاخ الماک ییاه تسیسووا تسیسووا هب دنا هتسناوتن کیچیه یلو دنا هدوب زیمآ تیقفوم یدودح ات دنا هدش هدافتسا نونک ات هک یفلتخم یاه شور .ددرگ مهارف روظنم هب قیقحت نیا رد .دشاب یم یرتکاب زا یراع تسیسووا هب یبای تسد قیقحت نیا زا فده .دننک ادیپ تسد یرتکاب زا یراع لولحم ،ماعط کمن لولحم زا هدافتسا لماش یزاسروانش شور راهچ ادتبا ،مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا هیلوا یزاسادج یارب شور نیرتهب دصرد 55 زراکاس لولحم .دیدرگ هدافتسا دصرد 55 زراکاس لولحم و لوکیاف یناکلپ یتظلغ بیش ،زراکاس رتلیف زا هارمه یاه یصلاخان ریاس و یرتکاب فذح تهج .دیدرگ یبایزرا مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا هیلوا یزاسادج نویسارتلیف زا لصاح یاه تسیسووا هک داد ناشن هدش جارختسا یاه تسیسووا زیلانآ .دیدرگ هدافتسا (نورکیم 3 ذفانم اب) زلولسورتین
تسد زا صیلخت نیح رد اه تسیسووا زا یدایز دادعت هچ رگا .دیدرگ یبایزرا 33 اه نآ دصرد و دوب یرتکاب هنوگره زا یراع .دنشاب یم بسانم رایسب سکیموئتورپ تاشیامزآ یارب هدش صیلخت یاه تسیسووا اما ،دنتفر نویسارتلیف ،یزاسروانش ،تسیسووا ،موراپ مویدیروپسوتپیرک :یدیلک تاملک
نایاش زیورپ :لوئسم هدنسیون ٭ 123-61311114 :نفلت .ناریا ،نارهت ،نارهت هاگشناد یکشزپماد هدکشناد ،یسانش لگنا هورگ :سردآ [email protected] :کینورتکلا تسپ
25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 76
همدقم اسکلپمک یپا هخاش زا یا هتخای کت مویدیروپسوتپیرک
هرهم رثکا یا هدور یاه لولس یکاوسم هیال هک تسا هب شیپ یدنچ ات .دهد یم رارق مجاهت دروم ار ناراد دوب حرطم لوادتمریغ بلط تصرف لگنا کی ناونع رد یا هدور یازیرامیب لماع کی ناونع هب نونکا یلو هب نایالتبم رد هژیوب ماد و ناسنا کرتشم یاه یرامیب .(2و1) تسا هتفرگ رارق هجوت دروم ینمیا صقن هلمج زا هدولآ یاه ماد طسوت هدش عفد یاه تسیسووا
عبانم دننام طیحم ندش هدولآ بجوم دناوت یم هلاسوگ مک دادعت هک تسا هدش شرازگ .دوش بآ یحطس رگزاغآ دناوت یم مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا
هب اه تسیسووا تمواقم هب هجوت اب .دشاب یگدولآ یعطق نامرد دوجو مدع و لوادتم یاه هدننک ینوفعدض تسیسووا صیخشت موزل ،مویدیروپسوتپیرک هیلع دادعت اب ییاه هنومن رد یتح مووراپ مویدیروپسوتپیرک و یلوکلوم تاقیقحت ماجنا .دراد دوجو مک دادعت هب مووراپ مویدیروپسوتپیرک یور رب سکیموئتورپ نونکات .(41) دراد زاین تسیسووا صلاخ و دایز ،(2) زراکاس لولحم زا هدافتسا دننام یفلتخم یاه شور ،(32) %55 زراکاس لولحم ،(1و 5) ماعط کمن لولحم یتظلغ بیش اب هارمه زراکاس عطقنمریغ یتظلغ بیش یاه تسیسووا صیلخت روظنم هب (41و6) لکرپ رب ینتبم یاه شور .تسا هدش هدافتسا روکذم هتخای کت یزاسادج تهج کیتنگمونمیا قیرط زا صیلخت شرازگ زین مووراپ مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا
کیتنگمونومیا شور رد هچ رگا .(8) تسا هدش نیا اما ،دنشاب یم یزاسادج لباق صلاخ یاه تسیسووا
هشیمه زاین دروم داوم هیهت ینارگ تلع هب شور اه تسیسووا دناوتب هک یشور اذل .دشاب یمن ریذپ ناکما
شقن ،دنک یزاسادج یصلاخان هنوگره زا نازرا ار
کت نیا هب طوبرم یسکیموئتورپ تاقیقحت رد ار یمهم .دومن دهاوخ افیا هتخای
راک شور و داوم
یاه تسیسووا هیلوا یزاسادج و هنومن یروآ عمج موراپ مویدیروپسوتپیرک
زویدیروپسوتپیرک هب کوکشم یلاهسا یاه هلاسوگ زا شیامزآ اب ،نارهت هاگشناد دابآ نیما یتاقیقحت هسسوم نآ مجح مه و دش یروآ عمج عوفدم هنومن لاتکر هاگشیامزآ هب و هفاضا دصرد 5/2 میساتپ تامورک یب اه هنومن .دیدرگ لقتنم یکشزپماد هدکشناد یسانش لگنا یرادهگن دارگ یتناس هجرد 6 رد شیامزآ نامز ات
هیهت شرتسگ عوفدم یاه هنومن زا هاگشیامزآ رد .دندش .دیدرگ یزیمآ گنر هدش حالصا نوسلن لیذ شور اب و ربارب 36 ییامن تشرد اب یزیمآ گنر زا سپ اه شرتسگ دوجو تروص رد و هدهاشم یرون پوکسورکیم موراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا 23 زا شیب یگدولآ صیلخت هب مادقا پکسورکیم دید نادیم ره رد زراکاس لولحم زا هدافتسا اب عوفدم زا اه تسیسووا .دیدرگ عابشا
مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا زا DNA جارختسا (PCR)زارمیلپ یا هریجنز شنکاو ماجنا و
دروم یاه تسیسووا هک نیا یلوکلوم دییات روظنم هب هدش حالصا نوسلن لیذ یزیمآ گنر رد ییاسانش زا DNA جارختسا ،دنشاب یم موراپ مویدیروپسوتپیرک DNA) تیک زا هدافتسا اب روکذم یاه تسیسووا
extraction kit, MBST, Iran) لمعلاروتسد ساسا رب شنکاو ماجنا یارب نآ زا سپ .تفریذپ ماجنا هدنزاس یصاصتخا یاهرمیارپ زا زارمیلپ یا هریجنز
F1=(5`aagctcgtagttggatttctg 3`) و R1=(5` taaggaacaacctccaatctc 3`) بعشنم
66 ...یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم
مویدیروپسوتپیرک سنج 18S ribosomal RNA نژ زا DNA زا رتیلورکیم کی روظنم نیا هب .دیدرگ هدافتسا 31 نازیم .دش هدافتسا ریثکت تهج هدش جارختسا dNTP (10 رتیلورکیم 10x PCR buffer، 2 رتیلورکیم
mM)، 3 رتیلورکیم (50 mM) MgCl2، 2 زارتیلورکیم ،Reverse (20 µM) و Forward (20 µM) رمیارپ ره بآ و (5U/μl) زارمیلپ Taq میزنآ رتیلورکیم 5/3 ییاهن مجح هک یا هزادنا هب لیرتسا هدشریطقت رابود هاگتسد رد و هدش هفاضا ،دشاب رتیلورکیم 331 شنکاو هجرد 51 همانرب اب (MWG Germany) رلکیسومرت
ود هیلوا تشرساو روظنم هب هقیقد 5 تدم هب دارگ یتناس دارگ یتناس هجرد 51 همانرب اب هخرچ DNA، 53 هتشر ،هیناث 56 تدم هب دارگ یتناس هجرد 85 ،هیناث 56 تدم هب
لیمکت تهج و ،هیناث 56 تدم هب دارگ یتناس هجرد 21 هقیقد هد تدم هب دارگ یتناس هجرد 21 تخاس ییاهن و نییعت تهج .تفریذپ ماجنا DNA ررکم ریثکت زراگآ لژ زا PCR لوصحم ادتبا مووراپ هنوگ صیخشت UV هعشا تحت دیامورب مویدیتا اب یزیمآ گنر زا سپ
PCR لوصحم همادا رد .دیدرگ صیلخت و جارختسا هنوگ یصاصتخا رمیارپ زا هدافتسا اب هدش صیلخت زا هک (`F2=5`catattactatttttttttttag 3) مووراپ هدش لیکشت یلبق رمیارپ ود زا هدش روصحم یفدارت یدیتوئلکون فدارت .تفرگ رارق یبایزرا دروم ،تسا رد و هدوب دوجوم مووراپ هنوگ رد طقف رمیارپ نیا
یدیتوئلکون فدارت زا نژ زا تمسق نیا رگید یاه هنوگ تحت DNA ررکم ریثکت .تسا هدش لیکشت یرگید هجرد 35 هب اهرگزاغآ لاصتا یامد) هدش رکذ طیارش ماجنا R1 و F2 یاه رمیارپ اب (تفای شهاک دارگ یتناس دصرد 5/1 زراگآ لژ یور رب PCR لوصحم .تفرگ دیامورب مویدیتا اب یزیمآ گنر زا سپ هدش زروفورتکلا .تفرگ رارق یبایزرا دروم UV هعشا تحت
مویدیروپسوتپیرک هب هلاسوگ یبرجت یزاس هدولآ موراپ
مویدیروپسوتپیرک یلوکلوم دییات و صیخشت زا سپ زا تسیسووا دایز دادعت هب یبایتسد روظنم هب ،مووراپ دلوتم هزات نیاتشلوه هلاسوگ سار کی ،دحاو عبنم کی
هسسوم زا مویدیروپسوتپیرکدض نتداپ دقاف ردام زا هدش و ردام واگ عوفدم زا .دش باختنا دابآ نیما یتاقیقحت دیدرگ هیهت شرتسگ یزاس هدولآ زا لبق هلاسوگ عوفدم دروم و یزیمآ گنر هدش حالصا نسلن لیذ شور هب و هک روطنامه) دوخ هک یا هلاسوگ .تفرگ رارق یبایزرا رد تسیسووا دوجو ظاحل زا شردام و (تفر یم راظتنا یراع یطیحم هب یبرجت یگدولآ یارب ،دوب یفنم عوفدم زوغآ زا رظن دروم هلاسوگ .دش هداد لاقتنا تسیسووا زا متسیس فیعضت تهج دلوت زا سپ تعاس 62 و مورحم لهچ .دیدرگ قیرزت نآ هب نوزاتمازگد mg/kg31 ینمیا
31 هلاسوگ هب دلوت زا سپ تعاس تشه و 4×31 و دش هدیناروخ مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا نازیم نامه هب زین دلوت زا سپ تعاس 34 اددجم زا یریگشیپ تهج .دیدرگ قیرزت نوزاتمازگد هب دلوت زا سپ تعاس 86 ییایرتکاب یاه یگدولآ قیرزت نیساسکولفورنا mg/Kg 31 نازیم هلاسوگ عوفدم ،لاهسا مئالع نیلوا زورب اب دعب زور جنپ .دیدرگ دصرد 5/2 میساتپ تامورکیب ترواجم رد و یروآ عمج و شرتسگ هیهت زا سپ .دیدرگ لقتنم هاگشیامزآ هب
رکذ یاه شور و هدش حالصا نوسلن لیذ یزیمآ گنر تسیسووا روضح الاب رد یلوکلوم هدش زور زا .دش دییات عوفدم رد مووراپ مویدیروپسوتپیرک یروآ عمج هب مادقا یگدولآ زا سپ زور 11 ات مجنپ رد دصرد 5/2 تامورکیب ترواجم رد و دیدرگ عوفدم زا هدافتسا اب اه تسیسووا .دش یرادهگن C°6 یامد
25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 76
صیلخت و جارختسا عوفدم زا فلتخم یاه شور عوفدم ،دوب الاب عوفدم یبرچ هک یدراوم رد .دیدرگ 5/2 میساتپ تامورکیب ترواجم رد هدش یروآ عمج .دندش هداد رارق رتا و دصرد تسیسووا یزاس صلاخ فلتخم یاه شور عوفدم زا مووراپ مویدیروپسوتپیرک
هههک یا هلاههسوگ زا هدههش یروآ عههمج عوفدههم هههنومن اههب دههش هدوههلآ زویدیروپههسوتپیرک هههب یههبرجت شور هههب
یاههه کههلا زا بههیترت هههب و طوههلخم بآ مههجح رههبارب 3 لوههههلحم .دههههش هداد روههههبع 351 ،331 ،56 هرامههههش ههههب ههههقیقد رد رود 3333 اهههب رهههخآ کهههلا زا لهههصاح صیهههلخت زا لهههبق .دهههش ژوفیرتناهههس ههههقیقد 31 تدهههم ماهههجنا LB طیهههحم رد ههههنومن زا ییاهههیرتکاب تهههشک رد .دههیدرگ شرامههش لههصاح یاههه ینوههلک و تفریذههپ یاههههه تههههسی سووا جارختههههسا روههههظنم هههههب تههههیاهن
دروهههم رهههیز یاهههه شور مووراهههپ مویدیروپهههسوتپیرک :تفرگ رارق هدافتسا
اب مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا یزاس صلاخ -1 :عابشا کمن بآ زا هدافتسا
زا مجح کی ،(1332) ناراکمه و ویل شور قباطم عابشا لولحم مجح 31 اب تسیسووا یواح عوفدم هنومن
هب بآ مجح کی و طولخم (ماعط کمن) میدس دیرلک و هقیقد 31 تدم هب .دش هداد رارق نآ یور یمارآ
×g3311 بآ ریز هیال ) ینایم تمسق .دیدرگ ژوفیرتناس یواح (عابشا کمن بآ لولحم یالاب و رطقم و =pH 2/1 اب PBS اب هک دوب هدش ادج یاه تسیسووا دیدرگ ژوفیرتناس هقیقد هد تدم هب g3311× تحت رتموتیسومه جردم مال یور رب اه تسیسووا دادعت .(22) و شرامش یرون پوکسورکیم ربارب 36 ییامنتشرد اب
مجح × هدش شرامش یاه تسیسووا نازیم) لومرف قبط
زا تیاهن رد .دیدرگ هبساحم (رازه هد × رظن دروم هنومن لیذ شور هب و هیهت شرتسگ هدش ادج یاه تسیسووا زا سپ .دیدرگ یزیمآ گنر مرگ و هدش حالصا نوسلن ماجنا LB طیحم رد هنومن ییایرتکاب تشک ،صیلخت .دیدرگ شرامش لصاح یاه ینولک و تفریذپ
اب مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا یزاس صلاخ -2 :عابشا زراکاس زا هدافتسا
رتیل یلیم 5 ،(3111) ناراکمه و تنرک شور قباطم لولحم رتیل یلیم 33 اب تسیسووا یواح بوسر زا
هب g3351× تحت و طولخم یبوخ هب عابشا زراکاس راب راهچ لمع نیا .دیدرگ ژوفیرتناس هقیقد 32 تدم یور ار رطقم بآ رتیل یلیم کی راب ره و دیدرگ رارکت اب لولحم حطس زا اه تسیسووا و هتخیر زراکاس لولحم PBS (pH=7.2) نورد ،یروآ عمج روتساپ تپیپ g3332× تحت و هقیقد هدزناپ تدم هب و دش هتخیر شور رد هچنآ دننام تیاهن رد .(2) دیدرگ ژوفیرتناس .دیدرگ شرامش اه تسیسووا ،دش نایب عابشا کمن بآ لیذ شور هب و هیهت شرتسگ هدش ادج یاه تسیسووا زا زا سپ .دیدرگ یزیمآ گنر مرگ و هدش حالصا نوسلن ماجنا LB طیحم رد هنومن ییایرتکاب تشک ،صیلخت .دیدرگ شرامش لصاح یاه ینولک و تفریذپ
اب مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا یزاس صلاخ -3 :لکیاف یناکلپ یتظلغ بیش زا هدافتسا
یاه مجح ،(8811)ناراکمه و بمال شور قباطم زا بیترت هب ،دصرد 4 و 6 ،2 ،1 ،5/3 لوکیاف زا ربارب
عیام مجح کی یور دصرد 4 ات دصرد 5/3 تظلغ بیترت نیدب و دش هداد رارق یمارآ هب تسیسووا یواح سپس .دیدرگ داجیا یناکلپ یتظلغ بیش اب نوتس کی ژوفیرتناس قاتا یامد رد هقیقد 34 تدم هب g331× تحت
دناب دصرد 5/3 لوکیاف هیال رد اه تسیسووا .دیدرگ و یروآ عمج اه هیال هناگادج روط هب هک دنداد لیکشت
76 ...یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم
لیرتسا PBS اب هناگادج هیال ره و .دیدرگ یسررب راب هس و ژوفیرتناس g3331× تحت =pH 2/1 یاراد شور رد هچنآ دننام تیاهن رد .(31) دش هداد وشتسش .دیدرگ شرامش اه تسیسووا دش نایب عابشا کمن بآ لیذ شور هب و هیهت شرتسگ هدش ادج یاه تسیسووا زا زا سپ .دیدرگ یزیمآ گنر مرگ و هدش حالصا نوسلن ماجنا LB طیحم رد هنومن ییایرتکاب تشک ،صیلخت .دیدرگ شرامش لصاح یاه ینولک و تفریذپ
اب مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا یزاس صلاخ -6 :هدش حالصا دصرد 55 زراکاس لولحم زا هدافتسا
اب (3332) ناراکمه و رتنیو شور زا روظنم نیا یارب اب راب هس ات ود عوفدم هنومن .دش هدافتسا تارییغت یمک
PBS (pH=7.2) تحت ×g333 هقیقد هد تدم هب 3 35 نوکلاف رد ،یبرچ ندودز یارب سپس .دش ژوفیرتناس هوالعب رتا مجح کی اب هنومن زا رتیل یلیم31 ،یرتیل یلیم .دش طولخم بوخ دصرد 1 میدس تانبرک یب مجح هسg333× تحت هقیقد 31 تدم هب هیال .دیدرگ ژوفیرتناس 3
و دش هتخیر رود فرظ یالاب تمسق رد دوجوم یبرچ ندوب برچ تروص رد .دش هتشاد هگن بوسر هیال رتا ندودز یارب .دش یم رارکت هرابود هلحرم نیا عوفدم تهج Tris-EDTA رفاب زا هدنام یقاب یبرچ ندودز وg333× تحت و هدافتسا وشتسش هقیقد هد تدم هب 3 .(11) دش رارکت هلحرم نیمه هرابود و ژوفیرتناس
36 اب هلصاح تسیسووا یواح عیام زا رتیل یلیم 5 طولخم بوخ ،کنخ دصرد 55 زراکاس رتیل یلیم یمارآ هب کنخ رایسب رطقم بآ رتیل یلیم 31 و دیدرگ فرظ .دش لیکشت ادج تمسق ود و دش هتخیر نآ یورg333× تحت ژوفیرتناس رد یمارآ هب هقیقد 32 تدم هب 3 بآ هیال لماش ادج الماک تمسق هس .دش هداد رارق یاه تسیسووا لماش ینایم هیال ،الاب تمسق رد رطقم ره .دش لیکشت هلول هت رد بوسر هیال و هدش روانش
PBS (pH=7.2) اب هناگادج روط هب اه تمسق زا مادکg333× تحت .(32) دش ژوفیرتناس هقیقد هد تدم هب 3 هناگادج تروص هب تمسق ره یاه تسیسووا
کمن بآ شور رد هچنآ دننام تیاهن رد و یروآ عمج زا .دندیدرگ شرامش اه تسیسووا ،دش نایب عابشا لیذ شور هب و هیهت شرتسگ هدش ادج یاه تسیسووا زا سپ .دیدرگ یزیمآ گنر مرگ و هدش حالصا نوسلن ماجنا LB طیحم رد هنومن ییایرتکاب تشک ،صیلخت .دیدرگ شرامش لصاح یاه ینولک و تفریذپ
شهاک تهج یلیمکت یاه شور زا هدافتسا -5 مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا اب هارمه یاه یرتکاب :مووراپ
یاه تسیسووا اب هارمه یاه یرتکاب شهاکروظنم هب رفاب زا هدافتسا شور هس زا مووراپ مویدیروپسوتپیرک و رثوم کیتویب یتنآ زا هدافتسا ،یرتکاب هدننک زیل رفاب زا هدافتسا شور رد .دش هدافتسا نویسارتلیف تسیسووا یواح بوسر یزاسروانش زا لبق هدننکزیل
قیقر میدس تیرلکوپیه اب مووراپ مویدیروپسوتپیرک راب هس هقیقد 31 زا دعب و رواجم 31 هب 1 تبسن هب هدش اب بوسر نگمه طولخم سپس .دیدرگ ماجنا وشتسش تکرش تخاس یرتکاب هدننکزیل رفاب رتیلورکیم 335
MBST رتیلورکیم 52 و TritonX رتیلورکیم 32 و 13 یرام نب رد هقیقد 33 تدم هب (10mg/ml) موزوزیل
رتیل یلیم 6 همادا رد .دش هداد رارق دارگ یتناس هجرد نگمه طولخم زا رتیل یلیم 2 یور یمارآ هب لوکیاف g3341× تحت هقیقد 33 تدم هب و دش هداد رارق
ره .دوب هیال هس لماش لصاح لولحم .دیدرگ ژوفیرتناس PBS (pH=7.2) اب هناگادج روط هب اه هیال زا مادک رب هدش یروآ عمج یاه تسیسووا .دش هداد وشتسش .دیدرگ هبساحم و شرامش رتموتیسومه جردم مال یور یزیمآ گنر تهج یکی شرتسگود اه تسیسووا نیا زا
25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 87
مرگ یزیمآ گنر یرگید و هدش حالصا نوسلن لیذ هب .دوب کیتویب یتنآ زا هدافتسا رگید شور .دیدرگ هیهت یتنآ و تشک تسیسووا یواح لولحم زا روظنم نیا (Disk diffusion) نژوفید کسید شور هب مارگویب یتنآ .تفرگ ماجنا یسانش بورکیم هاگشیامزآ طسوت نوسکایرتفس لماش هدافتسا دروم یاه کیتویب(Ceftriaxone)، نیساسکولفورپیس (Ciprofloxacin) و ناونع هب نوسکایرتفس .دوب (Ceftazidime) میدیزاتفس رطقم بآ رتیل یلیم 1 .دش باختنا ساسح کیتویب یتنآ کیتویب یتنآ ردوپ یمرگ کی لایو اب ار لیرتسا
نایح نبرباج یزاسوراد تکرش تخاس سکارتفس یواح لولحم زا رتیلورکیم 352 دودح و طولخم هب کرحتم هحفص یور و هدرک هفاضا نآ هب تسیسووا .دش هداد رارق هاگشیامزآ یامد رد بش کی تدم زا هلحرم نیا زا دعب و لبق و دش ماجنا وشتسش سپس یزیمآ گنر و هیهت شرتسگ تسیسووا یواح لولحم
موس شور .تفرگ تروص ییایرتکاب تشک و مرگ .دوب نویسارتلیف زا هدافتسا هنومن زا یرتکاب ندودز تهج و رتنیو شور زا هدافتسا اب هیلوا یزاس صلاخ زا سپ .دش هدافتسا زلولسورتین رتلیف زا (3332) ناراکمه قیقر PBS (pH=7.2) رتیل یلیم 31 رد اه تسیسووا
هدش سکیف نآ هدنرادهگن رد هک رتلیف زا و هدیدرگ زا PBS (pH=7.2) رتیل یلیم 35 .دش هداد روبع ،دوب ناش هزادنا هطساو هب اه تسیسووا ،دش هداد روبع رتلیف .دندرک روبع اه یرتکاب و دندنام رتلیف یور و PBS (pH=7.2) کمک هب رتلیف یور یاه تسیسووا
روبع عیام .دش یروآ عمج تقد اب و یمارآ هب رلپمس یلیم 31 اب مه رتلیف .دیدرگ یروآ عمج زین رتلیف زا هدرک یور لیرتسا فرظ کی رد PBS (pH=7.2) رتیل
زا اه تسیسووا هدنام یقاب ات دش هداد رارق نازرل هحفص هکنیا زا نانیمطا یارب سپس .دنوش ادج رتلیف
ار رتلیف دننامن یقاب رتلیف یاه ذفنم رد اه تسیسووا PBS اب و هداد رارق هدنرادهگن رد لبق تلاح سکعرب
(pH=7.2) دادعت .دیدرگ ماجنا سوکعم یوشتسش مال یور رب هلحرم ره زا هدش یروآ عمج یاه تسیسووا نیا زا .دیدرگ هبساحم و شرامش رتموتیسومه جردم لیذ یزیمآ گنر تهج یکی شرتسگود اه تسیسووا هیهت مرگ یزیمآ گنر یرگید و هدش حالصا نوسلن
.دیدرگ
جیاتن هب کوکشم یلاهسا یاه هلاسوگ عوفدم یاه هنومن زا
شرتسگ یسانش لگنا هاگشیامزآرد زویدیروپسوتپیرک یزیمآ گنر هدش حالصا نوسلن لیذ شور هب و هیهت
6 داعبا هب یورک ماسجا تروص هب اه تسیسووا .دیدرگ دیدرگ هدهاشم زبس هنیمز رد زمرق گنر هب نورکیم 4 ات یاه هنومن زا اه تسیسووا جارختسا .(1 هرامش ریوصت) گرزب اب پوکسورکیم دید نادیم ره رد هک یتبثم ،دندوب تسیسووا ددع 6-5 یاراد ،ربارب دص ییامن رمیارپ ود اب DNA یا هریجنز شنکاو رد .دیدرگ ماجنا
F1 و R1 18 نژ زا هکS rRNA دندوب هدش یحارط زا هک دمآ تسد هب زاب تفج 216 هزادنا هب یلوصحم یلاوت زا هلکشتم یاهدیتوئلکون دادعت اب هزادنا ظاحل نییعت یارب .تشاد یربارب اهنآ نیب هعطق و اهرمیارپ
اب DNA ررکم ریثکت شور زا مویدیروپسوتپیرک هنوگ نیا هجیتن هک دیدرگ هدافتسا R1 و F2 رمیارپ ود ریوصت) دوب زاب تفج 653 هزادنا هب یلوصحم ،شنکاو
.(2 هرامش
مووراپ مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا قیرط نیا هب هداد صیخشت روکذم تاشیامزآ ماجنا اب ناریا هیادج مجنپ زور زا یبرجت شور هب هدش هدولآ هلاسوگ .دش تسیسووا عفد هب عورش یزاس هدولآ زا سپ
17 ...یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم
زور تفه لوط رد و دومن مووراپ مویدیروپسوتپیرک هلاسوگ عوفدم زا تسیسووا نویلیم 338 دودح یلاوتم
زا هدش صیلخت یاه تسیسووا .دیدرگ یروآ عمج یبایزرا دروم یکیتنژ لرتنک تهج هدش هدولآ هلاسوگ روط نامه و تفرگ رارق PCR شور اب یلوکلوم ددجم هک دش هداد ناشن و دییات یلبق جیاتن تفر یم راظتنا هک مویدیروپسوتپیرک هب طوبرم هدش عفد یاه تسیسووا .دندوب مووراپ
یزاس صلاخ فلتخم یاه شور رضاح قیقحت رد یاه شور لماش مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا یتظلغ بیش ،عابشا زراکاس ،عابشا کمن بآ زا هدافتسا دصرد 55 زراکاس اب یزاس روانش و ،لکیاف یناکلپ ندوب الاب هب هجوت اب .دیدرگ هدافتسا هدش حالصا
،یسررب دروم عوفدم یاه هنومن رد ییایرتکاب یگدولآ هارمه یاه یرتکاب شهاک تهج دیدرگ شالت زیل رفاب زا هدافتسا دننام یلیمکت شور زا اه تسیسووا
و بسانم کیتویب یتنآ زا هدافتسا ،یرتکاب هدننک نورکیم 3 ذفانم زیاس اب یزلولسورتین رتلیف زا هدافتسا
.دوش هدافتسا اه تسیسووا صیلخت و یزاسادج تهج اه تسیسووا زا یدادعت عابشا کمن بآ شور رد
زین هدش روانش یاه تسیسووا هارمه و دندشن روانش .تشاد دوجو یرتکاب و لولس یدایز نازیم گنر شور ود ره رد نآ زا هدمآ تسدب یاه تسیسووا
داوم و اه یرتکاب هب الاب یگدولآ نازیم یاراد یزیمآ و هدش روانش یاه تسیسووا دادعت نیگنایم .دندوب دئاز رارکت هس رد رتموتیسومه مال یور رب هدش شرامش31 یلاوتم دادعت .دوب رتیل یلیم کی رد 83/1 × 4 دندشن روانش و هدنام یقاب بوسر رد هک ییاه تسیسووا
31 یرتکاب یاه ینولک دادعت .دوب رتیل یلیم رد 5 × 4 تقر رد و ددع 3431 ،33331:1 تقر رد هدش شرامش .دوب ددع 633 ،333331:1
اه تسیسووا زا یدادعت عابشا زراکاس شور رد یهجوت لباق نازیم بوسر هارمه و دندشن روانش یرتکاب یدایز نازیم نینچمه .دش هدهاشم تسیسووا .دش هدهاشم هدش روانش یاه تسیسووا هارمه گنر شور ود ره رد نآ زا هدمآ تسدب یاه تسیسووا
داوم و اه یرتکاب هب الاب یگدولآ نازیم یاراد یزیمآ و هدش روانش یاه تسیسووا دادعت نیگنایم .دندوب دئاز رارکت هس رد رتموتیسومه مال یور رب هدش شرامش31 یلاوتم .دوب رتیل یلیم کی رد 4 × 4
دروم هیال رد لکیاف یناکلپ یتظلغ بیش شور رد هارمه هب (لکیاف دصرد 5/3 تقر هیال) رظن دوجو یدایز یلولس یاه هدوت و یرتکاب ،اه تسیسووا
،رایسب یرتکاب رب هوالع مه بوسر تمسق رد .تشاد نیا رد .تشاد دوجو تسیسووا یهجوت لباق نازیم و یلولس یاه هدوت زا اه تسیسووا هیال کیکفت شور نیا زا هدمآ تسدب یاه تسیسووا .دوب راوشد اه یرتکاب
یگدولآ نازیم یاراد یزیمآ گنر شور ود ره رد شور اب هسیاقم رد دئاز داوم و اه یرتکاب هب یرتمک دادعت .دندوب عابشا کمن بآ و عابشا زراکاس رد رتموتیسومه مال یور رب هدش شرامش یاه تسیسووا
31 یلاوتم رارکت ود دوب رتیل یلیم کی رد 31 × 4 .(1 هرامش ریوصت)
دندش روانش یبوخ هب اه تسیسووا زراکاس شور رد یهجوت لباق تسیسووا نآ بوسر رد هک یروط هب یاه تسیسووا اب هارمه یرتکاب نازیم .دیدرگن هدهاشم
دوب اه شور ریاس زا رتمک شور نیا زا هدش یروآ عمج هدوت ،اه یرتکاب .دیدرگن هدهاشم یلولس یاه هدوت و ییازجم یاه هیال رد مادک ره اه تسیسووا و یلولس ره رد نآ زا هدمآ تسدب یاه تسیسووا .دندش روانش هب یگدولآ نازیم نیرتمک یاراد یزیمآ گنر شور ود .دندوب لبق شور هس اب هسیاقم رد دئاز داوم و اه یرتکاب
25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 87
شرامش و هدش روانش یاه تسیسووا دادعت نیگنایم31 یلاوتم رارکت شش رد رتموتیسومه مال یور رب هدش 4 یرتکاب یاه ینولک دادعت .دوب رتیل یلیم کی رد 36 × ریوصت) دوب ددع کی 33331:1 تقر رد هدش شرامش .(1 هرامش
یاه تسیسووا اب هارمه یاه یرتکاب شهاک روظنم هب زیل رفاب زا هدافتسا دننام یبناج یاه شور زا هدش صیلخت
هدافتسا نویسارتلیف و کیتویب یتنآ زا هدافتسا ،هدننک نتفر نیب زا ثعاب دنچ ره هدننک زیل رفاب زا هدافتسا .دش ناکما صیلخت لحارم یط رد اما دش اه یرتکاب
شور رد .دشن رسیم اه تسیسووا زا اهنآ هشال یزاسادج یاه شرتسگ رد ،سکارتفس کیتویب یتنآ زا هدافتسا
،کیتویب یتنآ زا هدافتسا زا دعب و لبق هدش یزیمآ گنر
کیتویب یتنآ زا هدافتسا زا سپ اه یرتکاب لکش رییغت هیلوا هزادنا زا یمک اه تسیسووا و دوب حضاو پوکسورکیم یسررب رد و دندوب هدش رت کچوک اه تسیسووا رادج لکش رییغت و بیرخت ینورتکلا رد یپوکسورکیم نورتکلا شیامزآ) دیدرگ هدهاشم ناملآ خینوم هاگشناد یکشزپ مولع هدکشناد هاگشیامزآ شور رد .(دش ماجنا ییابیکش یدهم رتکد رظن ریز اه تسیسووا یگدولآ نازیم رظن زا نویسارتلیف زا هدافتسا ،یرتکاب زا یراع رتلیف یور یاه تسیسووا ،یرتکاب هب
رتلیف سوکعم یوشتسش زا لصاح یاه تسیسووا و دادعت شور نیا رد .دنتشاد یرتکاب هب طسوتم یگدولآ زاب دصرد و هداتفا ریگ رتلیف نورد اه تسیسووا زا یدایز .دش هبساحم دصرد 33 اه تسیسووا تفای
.لکیاف یناکلپ یتظلغ بیش و دصرد 55 زراکاس شور هب مووراپ مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا جارختسا هسیاقم :1 ریوصت تسیسووا اب هارمه یاه یرتکاب یسررب روظنم هب دصرد 5/3 لکیاف هیال مرگ یزیمآ گنر -2 .یزاس صلاخ زا لبق عوفدم هنومن زا هدش حالصا نسلن لیذ یزیمآ گنر -1 و هدشن روانش هک دنتسه ییاه تسیسووا گنر یب ای و گنرمک یتروص گنر هب یورک مارجا ،لکیاف شور زا لصاح بوسر مرگ یزیمآ گنر -3 .مووراپ مویدیروپسوتپیرک زا هدش حالصا نسلن لیذ یزیمآ گنر -5 .دهد یم ناشن ار لکیاف شور زا لصاح تسیسووا یواح هیال زا هدش حالصا نسلن لیذ یزیمآ گنر -6 .دنوش یم هدهاشم بوسر رد یواح هیال زا هدش حالصا نسلن لیذ یزیمآ گنر -1 .دصرد 55 زراکاس شور زا لصاح بوسر زا هدش حالصا نسلن لیذ یزیمآ گنر -4 .لکیاف شور زا لصاح بوسر .رتلیف قیرط زا صیلخت زا دعب تسیسووا -8 .دشاب یم %55 زراکاس شور زا لصاح تسیسووا
87 ...یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم
سپس و (8 دناب) دندش هداد ریثکت (F1, R1) یصاصتخا یاهرمیارپ اب ادتبا مووراپ مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا زا هدش جارختسا DNA :8 ریوصت
.دشاب یم DNA 100bp رکام 1 دناب .(8 دناب) دش هداد ریثکت (F2, R1) یاهرمیارپ اب PCR لوصحم مووراپ مویدیروپسوتپیرک هنوگ نییعت تهج
یریگ هجیتن و ثحب یپا هخاش زا یا هتخای کت مویدیروپسوتپیرک
رثکا یا هدور یاه لولس یکاوسم هیال هک تسا اسکلپمک .دهد یم رارق مجاهت دروم ار ناراد هرهم صقن یاراد دارفا و ناکدوک رد زویدیروپسوتپیرک همه 3111 لاس رد .دراد رایسب تیمها ینمیا متسیس دودح هک داد خر هدحتم تالایا یکاولیم رهش رد یریگ هدولآ رهش یندیماشآ بآ متسیس قیرط زا رفن رازه 336 .(41 و 8) دیدرگ شرازگ گرم دروم 311 و دندش یشان ریم و گرم نازیم (5332) ناراکمه و اکسنیزاک ینمیا متسیس صقن اب دارفا رد سیزویدیروپسوتپیرک زا
مووراپ مویدیروپسوتپیرک .دندرک رکذ دصرد 35 ار رد هک تسا اذغ و بآ قیرط زا هلقتنم یا هتخای کت .(1) دراد یدایز تیمها یکشزپماد و یکشزپ
تاراسخ اه یرادواگ رد سیزویدیروپسوتپیرک هب هدش دلوتم هزات یاه هلاسوگ .دنک یم داجیا یدایز عوفدم هارمه تسیسووا نویلیب 33 ات و دنساسح تنوفع لاس رد ناراکمه و تاکسا هعلاطم رد .دننک یم عفد یاهواگ عوفدم مرگ ره رد تسیسووا 33381 ات 6111 اه تسیسووا عفد .تسا هدش شرازگ ملاس رهاظ هب غلاب لاقتنا و یحطس بآ عبانم و طیحم یگدولآ ثعاب
تاعلاطم .دش دهاوخ ناسنا و اه ماد ریاس هب یگدولآ رد تسیسووا کدنا رایسب دادعت ییاسانش تهج یدایز یحطس یاه بآ عبانم صوصخ هب طیحم و اه ماد عوفدم مواقم و تخس تیهام .(1) تسا هدش ماجنا ینوفعدض رثکا هب هک مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا
هجوت لباق ریداقم عفد ،دنمواقم لوادتم یاه هدننک هک ملاس رهاظ هب یتح ای رامیب یاه ماد طسوت تسیسووا نامرد دوجو مدع و دوش یم طیحم یزاس هدولآ هب رجنم
25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 87
رارق نیققحم هجوت زکرم رد ار هتخای کت نیا یعطق یاه شور یور رب تاقیقحت هکنیا مغریلع .تسا هداد مووراپ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا جارختسا فلتخم عورش لبق اه لاس زا یطیحم یاه هنومن ریاس و عوفدم زا
هک ییاه شور هب یبای تسد تهج اه شالت ،تسا هدش هب جتنم ،تسیسووا یالاب دادعت تفایزاب رب هوالع نانچمه دوش یرتکاب زا یراع ییاه تسیسووا جارختسا هتخای کت تشک ماجنا روظنم هب .دراد همادا
یبای تسد سکیموئتورپ تاعلاطم و مویدیروپسوتپیرک ریاس و یرتکاب زا یراع تسیسووا یدایز دادعت هب دادعت شهاک نینچمه .دشاب یم یرورض اه یصلاخان یاه تسیسووا تدم ینالوط یرادهگن هب اه یرتکاب
هک نیا هب هجوت اب .دنک یم کمک مویدیروپسوتپیرک هنومن زا هدش جارختسا مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا ،دنشاب یم هارمه یدایز یاه یگدولآ اب هراومه عوفدم نیا فذح هب رداق دیاب هدافتسا دروم شور اذل
.دشاب اه یگدولآ لوصح یارب تسا هداد ناشن دوجوم تاعلاطم
تاعلاطم تهج بسانم تیفیک و تیمک اب ییاه نیئتورپ31 لقادح مویدیروپسوتپیرک سکیموئتورپ 4×2 تیفیک .(41) تسا زاین دروم صلاخ الماک تسیسووا هدافتسا رب هوالع عوفدم زا هدش صیلخت یاه تسیسووا هنومن هیلوا یگدولآ نازیم هب صیلخت بسانم شور زا یگتسب هدولآ هلاسوگ زا یرادرب هنومن شور و عوفدم هدولآ شور زا دیاب تاقیقحت رد روظنم نیا هب .دراد رد کیتویب یتنآ زیوجت اب هارمه هلاسوگ یبرجت یزاس تسیسووا یالاب دادعت هب یبایتسد روظنم هب زیمت یطیحم اب دیاب هدولآ هلاسوگ زا هنومن ذخا .دومن هدافتسا
ماجنا فارطا طیحم اب سامت نودب و لاتکر شیامزآ رب دوجوم عوفدم یاه هنومن یروآ عمج زا یتسیاب .دوش قیقحت نیارد .دوش یراددوخ تدش هب نیمز حطس یور
هلاسوگ یبرجت یزاس هدولآ نیلوا رایسب شالت مغریلع عفد هب رجنم یرادهگن طیحم یگدولآ لیلد هب رد .دیدرگ یرتکاب هب الاب یگدولآ اب هارمه تسیسووا
سولیساب یرتکاب نیا هنوگ و سنج یبورکیم تشک صیخشت (Bacillus licheniformis) سیمروفینچیل
دشر هسایرتکابورتنا هداوناخ زا یرتکاب چیه و دش هداد رب میساتپ تامورک یب رثا لیلد هب الامتحا هک درکن سولیساب یرتکاب تمواقم و هسایرتکابورتنا یاه یرتکاب اه شالت .تسا هدوب میساتپ تامورک یب هب سیمروفیچیل
تیقفوم اب تسیسووا هنومن رد یرتکاب نیا فذح تهج نتفر نیب زا تروص رد هک ارچ دوبن هارمه یلوبق لباق هدافتسا دننام ییاه شور طسوت اه هنومن نیا رد یرتکاب درک یم رییغت زین تسیسووا لکش ،رثوم کیتویب یتنآ زا
،یرتکاب نتفر نیب زا تروص رد یتح نآ رب هوالع و .دیدرگن ادج تسیسووا زا یشور چیه اب اه نآ هشال لکشم سکیموئتورپ تاقیقحت رد یرتکاب هشال روضح .دوب دهاوخ زاس
نیهههققحم طهههسوت یهههفلتخم یاهههه شور نوهههنک اهههت تهههههسیسووا ی زاهههههسادج روهههههظنم ههههههب فهههههلتخم رتیههش . تههسا هدههش ماههجنا عوفدههم زا مویدیروپههسوتپیرک رتیهههش لوهههلحم زا هدافتهههسا اهههب یزاهههسروانش (3211) 1 و رهههطقم بآ رهههتیل یهههلیم 323 ،رکهههش مرهههگ 335) و ایهههسراگ .(51 ) درهههک یهههفرعم ار (لهههنف رهههتیل یهههلیم لوههههلحم اههههب یزاههههسروانش شور (3811) ناراههههکمه صیخهههشت یارهههب شور نیرهههتهب ناوهههنع ههههب ار رتیهههش ههههههب یزدهههههیا ناراهههههمیب رد سیزویدیروپهههههسوتپیرک و نمدهههلاو .(51) دهههنا هدوهههمن هیهههصوت اهههه هاگهههشیامزآ یزاهههههسادج تههههههج لهههههکرپ زا (4811)ناراهههههکمه .(21) دندرک هدافتسا اه تسیسووا
یزاس صلاخ دندرک نایب (1811)ناراکمه و دوورآ شور زا هدافتسا اب مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا
57 ...یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم
شخب تیاضر بلغا رتیش لولحم اب یزاسروانش نیا رد هدش ادج یاه تسیسووا دادعت هچ رگا .دشاب یمن
و یرتکاب یدایز نازیم اب هارمه اهنآ اما دوب الاب شور یفاضا هلحرم دنمزاین و یعوفدم یاه یصلاخان ریاس نامزمه صیلخت شور زا اه نآ اذل .دندوب یزاس صلاخ و دندرک هدافتسا لکرپ و زراکاس عطقنم یتظلغ بیش هب اه تسیسووا لک دصرد 63 زا شیب دندومن مالعا
و دندش ادج لکرپ یتظلغ بیش هلحرم رد صلاخ لکش یاه یگدولآ زا یراع و از تنوفع اه تسیسووا نیا .(6) دندوب یبرکیم
زا یدادعت عابشا زراکاس شور رد رضاح هعلاطم رد لباق نازیم ،بوسر هارمه و دندشن روانش اه تسیسووا یدایز نازیم نینچمه .دش هدهاشم تسیسووا یهجوت هدهاشم هدش روانش یاه تسیسووا هارمه یرتکاب
ود ره رد نآ زا هدمآ تسدب یاه تسیسووا .دیدرگ هب الاب یگدولآ نازیم یاراد یزیمآ گنر شور .دندوب دئاز داوم و اه یرتکاب
یزاسروانش زا هدافتسا اب (1811) ناراکمه و ینالیک لکرپ تنایدارگ و دیارلک میزس یتظلغ بیش کمک هب عوفدم هنومن زا ار مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا بیش زا لصاح یاه تسیسووا اه نآ .دندومن صیلخت و یلوکلوم تاشیامزآ تهج ار لکرپ یتظلغ تهج ار دیارلک میزس زا لصاح یاه تسیسووا
دندرک یفرعم یکیژولونومیا و ییایمیشویب تاشیامزآ دیارلک میزس زا هدافتسا لیلد هب شور نیا .(5 و 3)
نیا رد نیا رب هوالع .تسین هفرص هب نورقم و هدوب نارگ نکمم هک هدش هدافتسا الاب رود یاهژوفیرتناس زا شور .دنشابن سرتسد رد هشیمه تسا
بیش زا هدافتسا اب (4111) نوسدلانود و دوورآ الاب رود ژوفیرتناس ماجنا و دیارلک میزس یتظلغ(×g33341) هجرد 6 یامد رد تعاس کی تدم هب
نیا رد .(61)دندرک اه تسیسووا یزاس صلاخ هب مادقا دیدرگ جارختسا یرتکاب زا یراع یاه تسیسووا هعلاطم یبایزرا بسانم یکیژولونومیا تاعلاطم تهج هک .دندش
111) نوسپمات و ینولم لوکیاف یتظلغ بیش زا (4 هدافتسا شوم عوفدم زا اه تسیسووا یزاس صلاخ یارب
ره زا اه شوم یبرجت یزاس هدولآ زا سپ اه نآ .دندرک تسیسووا نویلیم 3-4 یزاس صلاخ یط شوم یاه تسیسووا تشک تهج و هدرک جارختسا
.(11) دندرب هرهب نآ زا مووراپ مویدیروپسوتپیرک یناکلپ یتظلغ بیش شور رد رضاح هعلاطم رد
(لکیاف دصرد 5/3 تقر هیال) رظن دروم هیال رد لکیاف یدایز یلولس یاه هدوت و یرتکاب ،اه تسیسووا هارمه هب
یرتکاب رب هوالع مه بوسر تمسق رد .تشاد دوجو رد .تشاد دوجو تسیسووا یهجوت لباق نازیم ،رایسب یلولس یاه هدوت زا اه تسیسووا هیال کیکفت شور نیا
زا هدمآ تسدب یاه تسیسووا .دوب راوشد اه یرتکاب و یگدولآ نازیم یاراد یزیمآ گنر شور ود ره رد نیا
شور اب هسیاقم رد دئاز داوم و اه یرتکاب هب یرتمک .دندوب عابشا کمن بآ و عابشا زراکاس
عابشا زراکاس هلیسوب یزاس قلعم زا (1111) نوتپآ تشک رد اهنآ زا و درب هرهب اه تسیسووا جارختسا رد .(41) دومن هدافتسا مووراپ مویدیروپسوتپیرک یلولس و هدوب عیرس رایسب شور نیا تسا دقتعم (3831) ریاف و دوش یم تسیسووا زا یدایز نازیم تفایزاب هب رجنم زا هدش یروآ عمج یاه تسیسووا دصرد شیازفا یارب
بسانم یحطس یاه بآ نویسارتلیف بقاعتم اه بوسر .(2) دشاب یم
11) ناراکمه و بمال یزاسروانش شور زا (88 هدافتسا اه تسیسووا صیلخت یارب کمن لولحم طسوت یارب یلاگچ بیش ژوفیرتناس زا اه نآ .(31) دندومن
25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 77
رد ام هعلاطم جیاتن .دندرک هدافتسا اه تسیسووا تفایزاب جیاتن اب عابشا ماعط کمن لولحم زا هدافتسا شور یروط هب ،تشادن تقباطم ناراکمه و بمال تاعلاطم هارمه و دندشن روانش اه تسیسووا زا یدادعت هک و لولس یدایز نازیم زین هدش روانش یاه تسیسووا نآ زا هدمآ تسدب یاه تسیسووا .تشاد دوجو یرتکاب
الاب یگدولآ نازیم یاراد یزیمآ گنر شور ود ره رد .دندوب دئاز داوم و اه یرتکاب هب
شور زا هدافتسا اب (3332) ناراکمه و رتنیو هدش درس دصرد 55 زراکاس لولحم طسوت یزاسروانش اتبسن نازیم صیلخت هب قفوم (12/1 صوصخم نزو اب) هعلاطم رد شور نیا .(32) دندش اه تسیسووا زا ییالاب
31 صیلخت هب رجنم و دش هدافتسا زین رضاح 4×36 زراکاس شور رد .دیدرگ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا
رد هک یروط هب دندش روانش یبوخ هب اه تسیسووا %55 .دیدرگن هدهاشم یهجوت لباق تسیسووا نآ بوسر زا هدش یروآ عمج یاه تسیسووا اب هارمه یرتکاب نازیم یلولس یاه هدوت و دوب اه شور ریاس زا رتمک شور نیا اه تسیسووا و یلولس هدوت ،اه یرتکاب .دیدرگن هدهاشم .دندش روانش ییازجم یاه هیال رد اتبسن مادک ره
میساتپ یتظلغ بیش زا (3332) ناراکمه و الارتنا تسیسووا صیلخت تهج ( %82 و 41% ،4% ) دیامرب هب ار دیامرب میساتپ دوخ هعلاطم رد اهنآ .دندرب هرهب
و دندرک یفرعم نازرا و سرتسد رد یا هدام ناونع رد یتخس رب هوالع دیارلک میزس و لکرپ دندومن ناونع .(5) دنشاب یم زین نارگ ،ماجنا
تسیسووا صیلخت تهج (4332) ناراکمه و گنارت .دنتخادرپ شور 4 هسیاقم هب مویدیروپسوتپیرک ،زراکاس اب یزاسروانش ،زراکاس نویسناپسوس یاه شور میزس ،زراکاس اب یزاسروانش هارمه لکرپ تنایدارگ عطقنم تنایدارگ شور ،لوکیاف تنایدارگ ،دیارلک
اه نآ هعلاطم دروم یاه شور لکرپ تنایدارگ و زراکاس تشک و یرتموتیاسولف جیاتن ساسا رب اه نآ .دندوب
زراکاس نویسناپسوس یاه شور ،دندومن مالعا لولس ییاسانش شور اب تسیسووا تفایزاب دصرد 55/14) تنایدارگ و زراکاس اب یزاسروانش ،(یرتموتیاسولف دصرد 12/33) زراکاس اب یزاسروانش هارمه لکرپ هب (یرتموتیاسولف ییاسانش شور اب تسیسووا تفایزاب اه نآ .دنراد ار تسیسووا تفایزاب نیرتالاب بیترت
بیش ،دیارلک میزس یاه شور هک دندومن شرازگ بیش و لکرپ یتظلغ بیش و زراکاس عطقنم یتظلغ تسیسووا یمک دادعت صیلخت ییاناوت لوکیاف یتظلغ یتظلغ بیش شور رد یرتکاب یگدولآ نازیم .دنراد ار زراکاس اب یزاسروانش هارمه لکرپ
31 2×14/3±31 زراکاس اب یزاسروانش ،33/3×231 4×51/3±31 زراکاس نویسناپسوس ،31/4×431 4×21/3±31 دیارلک میزس ،31/21×431 4×43/3±31 یاه تسیسووا .دیدرگ رکذ 22/61×4
هارمه لکرپ یتظلغ بیش شور هب هدش صیلخت ار یرتکاب هب یگدولآ نیرتمک زراکاس اب یزاسروانش یرتکاب تشک دروم رد ام هعلاطم جیاتن .(41) دنداد ناشن هک تشادن یناوخ مه ناراکمه و گنارت تاقیقحت اب رد میساتپ تامورک یب زا هدافتسا رطاخ هب الامتحا .دشاب یم ام هعلاطم
اب یزاسروانش زا هدافتسا اب (1332) ناراکمه و نربُاا رد مرگ 343 ،21/1 صوصخم نزو) ماعط کمن لولحم ،دنتشاد یمک هیلوا یگدولآ هک ییاه هنومن یور رب (رتیل31 دادعت 1×1/3 ±31 تسیسووا 1/1 × 1
رامیت زا لبق .دندروآ تسد هب مووراپ مویدیروپسوتپیرک31 دادعت رتا اب یرتکاب ینولک رتیل یلیم ره رد 5/2 ×6
دشر یرتکاب رتا اب رامیت زا سپ یلو دیدرگ شرامش هیهت عبنم دراوم رتشیب رد هک نیا هب هجوت اب .درکن
67 ...یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم
اب هارمه الومعم هک دشاب یم عوفدم هنومن تسیسووا رد یدربراک ،شور نیا تسا یرتکاب هب ییالاب یگدولآ اب ام تاعلاطم جیاتن .(21) تشاد دهاوخن اه هنومن نیا تلع هب دناوت یم هک تشادن یناوخ مه هعلاطم نیا جیاتن دروم عوفدم هنومن ییایرتکاب یگدولآ ندوب رتالاب .دشاب ام قیقحت رد هدافتسا
ناراکمه و دوورآ هتفای اب رضاح قیقحت یاه هتفای ناراکمه و ایسراگ رظن اب و دراد تقباطم (1811) تیاضر ار رتیش لولحم اب یزاسروانش شور هک (3811) بیش شور .درادن تقباطم دندرک فیصوت شخب
یبولطم جیاتن تسیسووا صولخ رظن زا لکیاف یتظلغ زا رت نارگ یا هدام لوکیاف هک نیا نمض تشادن یپ رد سرتسد رد یهاگشیامزآ ره رد هشیمه و تسا زراکاس نمض دصرد 55 زراکاس زا هدافتسا شور .دشاب یمن
نیرت صلاخ تسیسووا یدایز دادعت یزاسروانش .درک داجیا اه شور ریاس اب هسیاقم رد ار تسیسووا
اب یزاسروانش زا (1332) ناراکمه و گنوپاپموک شور اب نآ هسیاقم و (81/1 صوصخم نزو) زراکاس هدافتسا اه تسیسووا صیلخت تهج کیتنگمونومیا
ار نآ و داهنشیپ ار زراکاس اب یزاسروانش اه نآ .دندرک نارگ ار گنیتنگمونومیا شور و یفرعم بسانم و نازرا
دض یداب یتنآ کیتنگمونمیا شور رد .(8) دندرک رکذ مویدیروپسوتپیرک تسیسووا یحطس یاه نژ یتنآ اه تسیسووا و دوش یم لصتم یسیطانغم تارذ هب مووراپ تارذ تیفیک .دنوش یم ادج لولحم زا تنگم کمک هب لگنا هب اه یداب یتنآ یبیکرت لیم و یگژیو و رتسب ره .دشاب شور نیا رد هدننکدودحم لماوع زا دناوت یم
هب ،رتسب هب هدش لصتم یداب یتنآ یبیکرت لیم هچ هب یرتشیب تردق اب تسیسووا دشاب رتشیب تسیسووا لاصتا تردق نیا تسا نکمم و دوش یم لصتم رتسب ییاهن یزاسادج هلحرم رد تسیسووا ندش اهر عنام
تسا نکمم نداد ناکت شور و رتسب تارذ هزادنا .دوش .دشاب هتشاد رثا نآ هب تسیسووا لاصتا نازیم رب بجوم ار تسیسووا تفایزاب نیرتالاب یقفا یاه ناکت
تارذ عمجت ثعاب یا هریاد ناکت هک یتروص رد هدش تسیسووا اب سامت حطس شهاک و زکرم رد یسیطانغم .(8) دوش یم
راهچ زا کی چیه دیدرگ صخشم قیقحت نیا رد لماک یزاسادج و صیلخت ییاناوت هدش ماجنا شور ،تشادن ار اه یصلاخان ریاس و یرتکاب زا اه تسیسووا هیهت روظنم هب صلاخ تسیسووا هب یبای تسد یارب اذل
نیرتهب .دیدرگ هدافتسا نویسارتلیف شور زا نژ یتنآ شور قیقحت نیا رد هسیاقم شور راهچ رد هجیتن روط هب هک دیدرگ یبایزرا دصرد 55 زراکاس زا هدافتسا یلیم رد تسیسووا نویلیم 36 صیلخت هب رجنم طسوتم اب هارمه ییایرتکاب یگدولآ نیرتمک و دیدرگ رتیل هدهاشم شور نیا رد هدش صیلخت یاه تسیسووا
یایازم زا زراکاس ندوب سرتسدرد و نازرا .دیدرگ یدایز دادعت دیدرگ بجوم هک تسا شور نیا رگید .دنوش یزاسادج مک هنیزه اب زیمت اتبسن تسیسووا و یبرچ شهاک رد Tris-EDTA رفاب و رتا زا هدافتسا مدق رد اذل .تشاد ییازسب شقن عوفدم یزاس نگمه 55 زراکاس لولحم زا هدافتسا اب هعلاطم نیا رد لوا
هیلوا صیلخت هب مادقا عوفدم هنومن یور رب دصرد نیا زا لصاح یاه تسیسووا و دیدرگ اه تسیسووا
رتلیف زا اه یرتکاب رتشیب هچ ره ندودز تهج شور دروم لیاسو و اه لولحم .دش هداد روبع یزلولسورتین لامتحا ات دیدرگ لیرتسا نویسارتلیف لحارم رد هدافتسا
زا سپ .دوش فذح یجراخ یاه یگدولآ روضح رتلیف یور اه تسیسووا زا ریغ یمرج چیه نویسارتلیف و هدش نگمه یاه مرج و اه یرتکاب هشال .دنتشادن رارق
تشک رد .دندرک روبع ینورکیم 3 ذفنم زا هدش درخ
25 یپایپ ،1391 ،مود هرامش ،متشه هرود /یکشزپماد یژولویبورکیم هیرشن 77
شور هب هدش صیلخت تسیسووا هنومن ییایرتکاب هشال دنچره ،درکن دشر یرتکاب چیه دصرد 55 زراکاس هدهاشم یرون پوکسورکیم ریز حوضو هب اه یرتکاب
تامورک یب زا هدافتسا دناوت یم رما نیا تلع دیدرگ شور رد رتا و عوفدم هدنرادهگن ناونع هب میساتپ راظتنا هک روط نامه .دشاب هدافتسا دروم صیلخت صیلخت تسیسووا هنومن ییایرتکاب تشک رد تفر یم .درکن دشر یرتکاب چیه زین نویسارتلیف شور هب هدش
صیهههلخت تههههج ههههک داد ناهههشن رهههضاح ههههعلاطم ی اهه ههنومن زا موو راهپ مویدیروپسوتپیرک یاه تسیسووا
رههب یزاههسروانش شور ،تههسیسووا داههیز رادههقم یواههح یههلیمکت شور و دههصرد 55 زراکاههس لوههلحم ساههسا دهناوت یهم نورهکیم 3 یزلولهسورتین ی اهه رتلیف زا هدافتسا ههک یی اهه ههنومن رد ههک دوهش یهم داهنهشیپ .دشاب بسانم یهبرچ تههج رهتا زا اهمتح ،دهنراد ییالاهب یهبرچ نازیم روهظنم هب نینچمه .ددرگ هدافتسا یزاس نگمه و ییادز یههمک رادههقم یواههح ی اهه هههنومن زا تههسیسووا صیهلخت هههیلوا یزاههسادج روههظنم هههب تههسا رههتهب تههسیسووا ناوهنع ههب و دهصرد 55 زراکاهس لوهلحم زا اه تسیسووا
دهههههننام هتفرهههههشیپ یاهههههه شور زا یهههههلیمکت شور تهسیسووا رتشیب تفایزاب دصرد اب یفارگوتامورکونومیا .دومن هدافتسا
رکشت
حرط تارابتعا لحم زا هعلاطم نیا یارجا یاه هنیزه بطق حرط و نایزبآ و رویط ،ماد نسکاو یلم نالک نیققحم هلیسونیدب ،دیدرگ نیمات یژولوتاپونومیا یملع زاربا هطوبرم نیلوئسم زا ار دوخ رکشت هعلاطم نیا .دنراد یم
عبانم نیئتورپ هیهت و ییاسانش .(4831) .ا ،هداز میهاربا .1
یارتکد هلاسر .مووراپ مویدیروپسوتپیرک p23 بیکرتون یکشزپماد هدکشناد .412 هرامش ،یسانش لگنا یصصخت .نارهت هاگشناد
.ت ،یناگرزابروپ یقت رظن ریز .م ،یناگی همجرت .ر ،ریاف .2 و مویدیروپسوتپیرک .(3831) .ر.غ ،یمزر و .نارهت ،شخبرون تاراشتنا .لوا پاچ .زویدیروپسوتپیرک
3. Arrowood, M.J., Donaldson, K. (1996). Improved purification methods for calf derived Cryptosporidium parvum oocysts using discontinuous sucrose and cesium chloride gradients. Journal of Eukaryot Microbiology 43 : 89.
4. Arrowood, J.M., Sterling, R.CH. (1987). Isolation of Cryptosporidium oocysts and sporoziote using discontinous sucrose and isopycnic percoll gradients. Journal of Parasitology 73: 314-9.
5. Entrala, E., Molina-Molina, J., Rosales-Lombardo, M., Sanchez-Moreno, M., Mascaro-Ilazcano, C. (2000). Cryptosporidium parvum: oocysts purification using potassium bromide discountinuos gradient. Veterinary Parasitology 92: 223-6.
6. Garcia, L.S., Bruckner, D.A., Brewer, T.C., Shimizu, R.Y. (1983). Techniques for the recovery and identification of Cryptosporidium oocysts from stool specimens. Journal of Clinical Microbiology 18: 185–90.
7. Kuczynska, E., Shelton, D.R., Pachepsky, Y. (2005). Effect of bovine manure on Cryptosporidium parvum oocyst attachment to soil. Applied and Environmental Microbiology 71: 6394-7.
8. Kilani, R.T., Sekla, L. (1987). Purification of Cryptosporidium oocysts and sporozoites by cesium choloride and percoll gradient. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene 36: 505-8.
77 ...یاه تسیسووا یزاسادج تهج بسانم یشور یفرعم
9. Koompapong, K., Sutthikornchai, C.H., Sukthana, Y. (2009). Cryptosporidium oocyst detection in water samples: Flotation technique enhanced with immunofluorescence is as effective as immunomagnetic sepration method. Korean Journal of Parasitology 47: 353-7.
10. Liao, S.H.F., DU, C.H., Yang, S.H., Healey, M.C. (2001). Alteration of Cryptosporidium parvum (Apicomplexa: Eucoccidiorida) oocyst antigens following bleach treatment. Acta Protozoologica 40: 273-9.
11. Lumb, R., Lanser, J.A., O'Donoghue, P.J. (1988). Electrophoretic and immunoblot analysis of Cryptosporidium oocysts. Immunology and Cell Biology 66: 369-76.
12. McCuin, R.M., Clancy, J.L. (2005). Methods for the recovery, isolation and detection of Cryptosporidium oocysts in wastewaters. Journal of Microbiological Methods 63: 73-88.
13. Meloni, B.P., Thompson, R.C. (1996). Simplified methods for obtaining purified oocysts from mice and for growing Cryptosporidium parvum in vitro. Journal of Parasitology 82: 757-62.
14. Merry, R.J. (1997). Viability of Cryptosporidium parvum during ensilage of perennial ryegrass. Journal of Applied Microbiology 82: 115–20.
15. O’Brien, C.N., Jenkins, M.C. (2007). A rapid method for producing highly purified Cryptosporidium parvum oocysts. Journal of Parasitology 93: 434–6.
16. Rosales, M.J., Lazcano, C.M., Arnedo, T., Castilla, J.J. (1994). Isolation and identification of Cryptosporidium parvum oocysts with continuous percoll gradients and combined alcian blue-giemsa staining. Acta Tropica 56: 371-3.
17. Scott, C.A. Smith, H.V., Gibbs, H.A. (1994). Excretion of Cryptosporidium parvum oocysts by a herd of beef suckler cows. Veterinary Record 134: 172.
18. Sheather, A.L. (1923). The detection of intestinal protozoa and mange parasites by a flotation technique. Journal of Comparative Pathology 36: 266-275.
19. Truong, Q., Ferrari, B.C. (2006). Quantitative and qualitative comparisons of Cryptosporidium faecal purification procedures for the isolation of oocysts suitable for proteomic analysis. International Journal for Parasitology 36: 811-9.
20. Upton, S.J. (1997). In vitro cultivation. In: Fayer, R. (Ed.) Cryptosporidium and Cryptosporidiosis. CRC Press, Boca Raton, FL: 181–207.
21. Waldman, E., Tzipori, S., Forsyth, J.R. (1986). Separation of Cryptosporidium species oocysts from feces by using a percoll discontinuous density gradient. Journal of Clinical Microbiology 23: 199-200.
22. Winter, G., Andrew, A.G., Williams, L.K., Slade, M.B. (2000). Characterization of a major sporozoite surface glycoprotein of Cryptosporidium parvum. Functional and Integrative Genomics 1: 207-17.
23. Wooley, R.E., Jones, M.S. (1983). Action of EDTA-TRIS and antimicrobial agent combination on selected pathogenic Bacteria. Veterinary Microbiology 8: 271-80.
Journal of Veterinary Microbiology, Volume 8, Issue 2, 2012
Presenting an Appropriate Method for Isolation of Bacteria Free
Cryptosporidium parvum Oocysts
Shayan, P.1*, Asghari, Z.1, Ebrahimzadeh, E.1, Omidian, Z.1, Zarghami, F.1
1- Department of Parasitology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran
Received Date: 5 Jan 2013 Accepted Date: 9 Feb 2013
Abstract Cryptosporidium parvum is a zoonotic protozoan which causes disease in immunocompromised patients and newborn animals especially calves. The oocysts excreted by infected animals are introduced into the environment and water. Since the low number of oocyst can cause infection and there is no effective disinfectant against cryptosporidium, the investigation dealing with the cryptosporidiosis is of growing interest among many researchers. Therefore, they try to improve the existing isolation methods of C. parvum oocysts even in environmental samples with small number of oocysts, to obtain much purified oocysts for immunological and molecular studies. Different methods have gained some success on the isolation of cryptosporidium, but they didn’t result in obtaining completely pure oocysts. The aim of the present study was to try to develop an isolating system for bacteria free oocysts. For this aim, four flotation methods have been used to isolate the C. parvum oocysts from the feces, including NaCl floatation, sucrose floatation, ficoll gradient and 55% sucrose floatation. A floatation method based on 55% sucrose was evaluated as the best method for the primary isolation of Cryptosporidium oocytes. The nitrocellulose filter (with 3µm pore size) was used to remove bacteria and other contaminants. Our results suggest that the oocysts isolated using filtration were free of bacteria and the amount of pure oocysts was 30%. Although the amount of isolated oocysts was limited, the isolated pure oocysts can be used for proteomics studies. Keywords: Cryptosporidium parvum, Oocyst, Floatation, Filtration
*Corresponding author: Shayan, P. Address: Department of Parasitology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran. Tel:021-61117094 Email: [email protected]
