Mol Bio Homojenizasyon
-
Upload
havvanalca -
Category
Documents
-
view
223 -
download
0
Transcript of Mol Bio Homojenizasyon
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
1/64
MOLEKLER BYOLOJDEKULLANILAN YNTEMLER
II:PROTENLERN ZOLASYONU
VE ANALZ
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
2/64
MOLEKLER BYOLOJDE ANA KURAL veTEMEL ALIMA ALANLARI
GENOMK
YAPISALLEVSEL
(TRANSKRPTOMK)
DNA RNA PROTENMOLEKLLER
ARASIETKLEM
Nasl?
Neden?
Nasl?
Neden?
Nasl?
Neden?
PROTEOMK
YAPISALLEVSEL
(METABOLOMK)
Gen dizisi transkriptler primer protein rnlerifonksiyonel proteinler
(DNA) (mRNA)
Transkripsiyonelkontrol
Translasyonelkontrol
Translasyon sonrasKontrol (post-translasyonel
modifikasyonlar)
Nkleotid dizisininbelirlenmesi mRNA analizleri Protein yap analizleri Protein fonksiyon analizleri
Nkleik asitlerle ilgili teknikler Proteinlerle ilgili teknikler
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
3/64
ZETLE:
transkripsiyon translasyon modifikasyon-organizasyon
DNA RNA PROTEN
HCRESEL
LEVLER
ANA HEDEF :
Hcrenin molekler organizasyonunu,dolaysyla canlln molekler temellerini
anlamak !!!
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
4/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
5/64
NSANDA:
30.000 GEN 250.000500.000 PROTEN
AKTF BR PROTEN OLUURKEN400DEN FAZLA KMYASAL MODFKASYONUN
GEREKLEEBLECE NGRLMEKTEDR.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
6/64
SORULAR:
Nerede ve/yahangi proteinler var ?
Ne kadar var?
Yaps nedir?
Ne gibi zellikleri var?
Nasl i grr ?
Hangi molekllerle etkileir?
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
7/64
Bir proteinin nasl izole edileceine,hangi yntemle ve ne derece
saflatrlacana karar verirkengz nnde bulundurulan kriterler:
AMA;
MATERYALN VE ALIILACAK
PROTENN TP VE MKTARI; LEMLERN SRES VE MALYET;
ELDEK OLANAKLAR
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
8/64
LABORATUVAR ORTAMI
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
9/64
LABORATUVARDAKULLANDIIMIZ KMYASALLAR
Dnyada en az 65 milyon eit kimyasal bileik retiliyorve deiik saflk derecelerinde piyasaya srlyor....
Kalitesine ve miktarna gre farkl fiatlara satlyor.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
10/64
Kimyasallarn bazlar (zellikle ENZMLER)soutucularda (+4oC ve -20 veya -80oC derin
dondurucularda) saklanmaldr.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
11/64
LABORATUVARARA-GERELER
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
12/64
balonjoje
l kab pipet
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
13/64
Mikropipetler
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
14/64
Hamilton rngalar
http://orgchem.colorado.edu/hndbksupport/GC/images/syrlarge.jpg -
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
15/64
TERAZ pH-metre
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
16/64
HAVAN
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
17/64
KARITIRICILIHOMOJENZATR(Waring Blender)
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
18/64
MLLHOMOJENZATR(ultra turrax)
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
19/64
PSTONLU
HOMOJENZATR
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
20/64
BASINHCRES
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
21/64
BALSTK
HOMOJENZATR
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
22/64
ULTRASONKATR
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
23/64
FLTRASYON DZENEKLER
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
24/64
MEMBRANLI FLTRASYON
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
25/64
SANTRFJLER
P t i d t d
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
26/64
Protein denatrasyonundan veinaktivasyondan korunmak iin
almann her aamasndapH ve SICAKLIK kontrol altnda
tutulmaldr!Scakln olumsuz etkisi, ilemlerin SOUKTA(genelde 4oCda) gerekletirilmesiyle nlenir.
pH ise bu molekllerin fizikokimyasal gereksinimleridorultusunda hazrlanm tampon zeltilerin kullanm
ile istenen deerde tutulur.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
27/64
Ortam pHsnn 7 ve 7ye yakn
deerlerde olduu koulda engeni apta kullanlan tamponlartris ve fosfattamponlardr.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
28/64
YONK KUVVET
Bir tamponda yer alan iyonlarn deriimi veyk de protein almalarnda nem tar.
ci= iyonun molar konsantrasyonu
zi= iyonun yk (iareti dikkate alnmaz)
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
29/64
TAMPON SEMNDE DKKATEDLMES GEREKENLER:
alma pHs, Tamponun anyonik veya katyonik karakterde olmas, yonik kuvvet ve scaklk etkisiyle pH deiimi, Kimyasal etkinlik, Biyolojik etkinlik, Dier bileenlerle etkileim, Biyolojik membranlarn geirgenlii, Toksisite, 280 nm ve altndaki dalga boylarnda absorbsiyon, Maliyet, znrlk
B YOLOJ K MATERYALLER
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
30/64
B YOLOJ K MATERYALLER:MKROORGANZMALAR
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
31/64
HAYVANSAL RNEKLER
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
32/64
HAYVAN DOKU VE HCREKLTRLER
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
33/64
BTKLER VE BTK DOKU
KLTRLER
HOMOJEN VE HETEROJEN KARIIMLARI
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
34/64
HOMOJEN VE HETEROJEN KARIIMLARIAYIRMA VE SAFLATIRMA YNTEMLER
TEK FAZLI AYIRMAYNTEMLER
SANTRFJLEME
FLTRASYON
DALZ
K (OK) FAZLI AYIRMAYNTEMLER
Yardmc bir faz oluturarakayrma (EKSTRAKSYON,
KROMATOGARF,ELEKTROFOREZ)
Kimyasal reak. sonucu fazoluturma (KTRME)
Istma veya soutma ile fazoluturma(KRSTALZASYON,DESTLASYON,
SBLMASYON,EVAPORASYON)
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
35/64
HOMOJENZASYON:
allacak molekl grubunu ierendoku veya hcrelerin eper ve zaryaplarn paralama ilemi
Fiziksel ilemlerMekanik ilemlerUltrasonikasyonOzmotik ok
Dondurma-zme
Kimyasal ilemlerzclerin kullanlmasEnzimlerin kullanlmas
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
36/64
Mekanik lemler:ALETL HOMOJENZASYON
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
37/64
Mekanik lemler:OZMOTK OK
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
38/64
Mekanik lemler:DONDURMA-ZME
Souk-Scak-Souk-Scak.....
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
39/64
Kimyasal lemler:zclerin Kullanlmas
Organik zclerDeterjanlar,
Bazik zeltilerle...
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
40/64
BYOLOJK MOLEKLLERNZOLASYONU (EKSTRAKSYON) :
MASERASYON
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
41/64
PERKOLASYON
SREKL EKSTRAKSYON
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
42/64
SREKL EKSTRAKSYON(SOXHLET EKS.)
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
43/64
SIVI-SIVI EKSTRAKSYONU
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
44/64
Kimyasal lemler:Enzimlerin Kullanlmas
Lizozim,Tripsin,
Proteinaz K,Zimoliyaz gibi enzimlerle...
eitli materyallere uygulanabilecek baz
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
45/64
eitli materyallere uygulanabilecek bazparalama yntemleri
Teknik Materyal tipi
NazikOzmotik ok EritrositlerEnzim uygulamas Bakteriler, mayalarDeterjan uygulamas Doku kltr hcreleriHavan veya pistonluhomojenizatr Karacier vb yumuak dokularDier aletlerle paralama Kas vb. Dokular
Orta iddetteMilli homojenizatrle par. Hayvansal ve bitkisel dokularKum, alumina vb. ile ezme Bitkisel dokular, bakteriler
SertFransz basn hcresi Bitkisel dokular, bakterilerUltrasonikasyon Hcre sspansiyonlarBalistik paralama Hcre sspansiyonlar
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
46/64
Paralama (homojenizasyon)
yntemleri uygulanarak dokuveya hcrelerin eper ve zar
yaplar yok edilir.
Ele geen ve allacak
molekl grubunu ierenkarma HOMOJENATdenir.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
47/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
48/64
SZME (FLTRASYON)
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
49/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
50/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
51/64
Molekler biyolojide en okkullanlan filtre edici materyaller:
Mslin (tlbent veya gazl bez) Filtre kad (bkz. MBKY kitab Ek 15, s. 324)
Sinterli cam huni
Membran filtreler (bkz. MBKY kitab Ek 16, s.324)
M b filt l b l l
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
52/64
Membran filtreler veya membranlar zgl poraplarna sahip polimer filmlerden oluur.Porlardan geemeyecek byklkteki partikller ve
mikroorganizmalar iin fiziksel bir bariyer oluturur vebunlar zarn yzeyinde tutarlar.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
53/64
ULTRAFLTRASYON
Molekllerin boyut, biimve/veya yklerine gre
ayrlmasn salar.
Centricon tipi
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
54/64
Centricon tipiultrafiltrasyon
tp
(vakumdanyararlanlr)
Kapan hcresi
(basntanyararlanlr)
NMWC
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
55/64
NMWC
Nominal MolecularWeight Cut-off
Membrana zg bir deerdir.Membrandan geemeyen bir
molekln arlna e deerdir.
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
56/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
57/64
Santrifjleme sonundast faz (svfaz)spernatant
Alt faz (kelti)pellet
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
58/64
Santrifj kuvveti
F = m x
2
x rm = ken partikln ktlesi
= asal hzr = partikln dnm eksenine uzakl
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
59/64
Relative Centrifugal ForceSantrifj hz ile ilgili bir ifade (gdeeri)
RCF = 1.119 x 10-5x rpm2x r
rpm = dnm says (devir/dakika)
r = partikln dnm eksenine uzakl (cm)
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
60/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
61/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
62/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
63/64
-
8/12/2019 Mol Bio Homojenizasyon
64/64
Homojenattaki zar (membran)
paralarn, paralanmamdoku ve hcreleri
uzaklatrmak amacylauygulanan N AYIRMAilemlerinden sonra ele geensvya HAM ZTad verilir.