Kromozomlara dayalı toksisite testleri

• = Mutagenik aktivite

• = Genotoksisite (genotoksik aktivite)

• Mutagenik (genotoksik) bileşik

• Mutagenler potansiyel karsinogenlerdir.

Mutagenlerin metabolik aktivasyonu

PROMUTAGENAKTİF

MUTAGEN

DNA da değişim

MUTASYON

enzimler

akti

vasy

on

TUMOR

karaciğer

Genotoksisite testleri

• Moleküler

• Gen

• Kromozom düzeyinde olabilir.

Comet assay

• Elektroforezle nukleustan çıkan DNA parçalarını gözleme• İsole nukleuslar gele konur • DNA fragmenti varsa “comet tail” görülür.

– +

Comet assay

comet assay

Normal

DNA fragmentli nukleus

Comet assay değerlendirmesi

Comet assay – computer analizi

Ames test (Gen düzeyinde)

Bruce Ames (born 1928)

Ames test

His–

bacteri

Normal besiyerinde

ölürler

Histidinİçeren

besiyeri

Normalbesiyeri

His+

bacteriReverse mutasyon

Mutagen

Ames test

COMPOUND

CONFIRMED

MUTAGENIC

COMPOUND

0 Negative kontrol

Positive kontrol

TEST BİLEŞİĞİ

GENOTOKSİSİTE

TAYİNİ

SPONTAN

REVERTANTS

TEST CONTROLU

Ames test sonucu

Ames test – otomatik değerlendirme

Kromozomal testler• Mikronukleus testi

– Mikronukleus – asentrik ve delesyon parçaları

• Kromozom anormallik frekansı– Lab. Hayvanları, lökosit kültürü, soğan kökü vb.

• SCE – sister kromatid değişimi

Mikronukleus testi

Kromozom analizi

Kromozom anormalikleri Sonuç

% 2’den az Normal

% 2 – 4 Sınır değerler

% 4’den fazla Mutagenik

Sister Kromatid Değişimi

Normal kromozom SCE

Yüksek SCE frekansı – yüksek mutagenik activite.

TUNEL

Apoptotik hücrelerde TUNEL

TUNEL

Kanser

mutagen mutagen

apoptosis

tamir

İlk mutasyon

İkinci mutasyon

Bölünen tümör

hücresi

normal hücre

normal hücre

sınır

Karsinogenite testleri

• Laboratuar testleri

– Hayvanlarda

– Kültür hücrelerinde in vitro transformasyon

– Epidemiyolojik çalışmalar

IARC database • International Agency

for Research of Cancer

• Direct connection to „Monographs“:

http://monographs.iarc.fr/index.php

IARC sınıflaması

• Grup 1: Karsinogenik

• Grup 2A: Olası karsinogenik

• Grup 2B: Olası karsinogenik

• Grup 3: Karsinogenite kesinleşmemiş

• Grup 4:Olası karsinogenik değil