PG FH1 29 apr 2010BIOTRANSFORMACIJA LEKOVA METABOLIČKA STABILNOST LEKOVA
Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt
-
Upload
amina-djug -
Category
Documents
-
view
151 -
download
17
description
Transcript of Hromatografija u kontroli lekova _M.Zecevic.ppt
1
HHROMATOGRAFIJA ROMATOGRAFIJA U ANALIZI I KONTROLI U ANALIZI I KONTROLI
LEKOVALEKOVA
HHROMATOGRAFIJA ROMATOGRAFIJA U ANALIZI I KONTROLI U ANALIZI I KONTROLI
LEKOVALEKOVAMira L. ZečevićMira L. Zečević
2
Separacione metode analize
3
Razdvajanje
KomponenteSmeša
Analitička Identifikacija Određivanje Preparativna Koncentrisanje Prečišćavanje
Šta je hromatografija?
Hromatografija je fizičko-hemijska metoda separaciona pre svega, a sliži u ....
cilj
4
… razdvajanje komponenata se
postiže procesom stalne raspodele
molekula ili jona između pokretne
(mobilne) i neopokretne (stac.) faze.
5
prema fizičkoj prirodi mobilne i stacionarne faze,
prema obliku stacionarne faze,
prema mehanizmu razdvajanja i
prema tehnici rada
Podela hromatografskih metoda
6
Prema fizičkoj prirodi mobilne i stacionarne faze
stacionarna faza mobilna faza
čvrsta tečna
čvrsta gas
tečna tečna
tečna gas
7
… nezavisno od agregatnog stanja pojedinih faza
ili prirode sila koje prouzrokuju razdvajanje…
a) kolonska hr. (gasna, tečna i hromatografija sa
jonskim izmenjivačima)
b) planarna hr. (papirna, tankoslojna i elektroforeza)
Prema obliku stacionarne faze
8
Hromatografija se zasniva na različitim
ravnotežnim procesima (mehanizmima):
adsorpciji (adsorpciona hr.)
različitoj rastvorljivosti (particiona ili podeona hr.)
jonskoj izmeni (jonoizmenjivačka hr.) i
penetraciji kroz pore razl. vel. (gel ekskluziona hr.)
Prema mehanizmima razdvajanja:
9
Adsorpcija - interakcija ili vezivanje komponenti
uzorka na čvrstoj površini (na aktivnim mestima).
adsorpcija desorpcija
raspodela (razdvajanje)
Apsorpcija-Particija-(raspodela)-proces
raspodeljivanja, pri čemu komp. uzorka grade
homogene rastvore u svakoj od faza.
10
Jonska izmena - ravnotežna reakcija
stehiometrijske izmene jona između jona
fiksiranih za smolu i jona u rastvoru.
Penetracija kroz pore - ekskluzija
stac. faza je čvrsta porozna supstanca, najčešće gel
solvatisani molekuli većeg promera od pora ne
penetriraju kroz gel, a manji penetriraju
brzinom zavisnom od veličine
(gel-filtraciona ili gel-ekskluziona hr.)
11
hromatografija eluiranjem
Eluacija – proces u kome mobilna faza ispira sastojke
sa stacionarne faze.
Eluens – rastvarač (ili smeša) koji nosi komponente
smeše kroz stacionarnu fazu.
Eluat – rastvor koji izlazi iz kolone.
Prema tehnici rada
12
hromatografija istiskivanjem
… na stacionarnu fazu se nanosi rastvor uzorka, a zatim
dodaje rastvor pogodne supstance koja istiskuje
komponente uzorka i tako ubrzava njihovo kretanje.
frontalna analiza
… na stacionarnu fazu se stalno dodaje rastvor
uzorka tako da se samo komponenta koja se najbrže
kreće dobija u čistom stanju.
13
Adsorpciona hromatografija
• Tečno-čvrsta (hrom. na koloni i TLC)
• Gasno-čvrsta (GC)• Jonoizmenjivačka• Gel filtracija• HPLC
14
Adsorbciona hromatografija- Koeficijent
raspodele
Koeficijent raspodele
m
s
c
cK
cs – količina adsorbovane supst. po 1g stacionarne faze cm – koncentracija supstance u mobilnoj fazi
Linearna adsorpcina izoterma I dinamička ravnoteža
15
u idealnom slučaju K je const. u širokom opsegu
koncentracija – linearna hr. - Slika 1 (b) – simetričan pik
u praksi linearnost postoji samo sa nižim koncentracijama
supst. Nelinearnost K - Slika 1 (a) i (c)
(a) (b) (c)
k-nije konstantan: Cm›Cs, asimet.pik
k-nije konstantan
Cs›Cm, asimet.pik
k- konstantan
Cm=Cs
16
Kolonska hromatografija
tečna hromatografija stac. f. smeštena u cevi (koloni),
primenjena tehnika eluiranje
kretanje mobilne faze: pod uticajem zemljine teže
ili pod p
preparativna i analitička - kolone
17
Slika 2 - (a) Razdvajanje
smeše sastojaka A i B
eluacionom hrom. na koloni
(b) Izlazni zapis odgovora
detektora na različitim
stupnjevima eluacije
brzina kretanja komponenti = f(koeficijenti raspodele)
18
U osnovi hromatografskog razdvajanja je
razlika u osobinama komponenti smeše što
uslovljava kretanje različitim brzinama i
različitu raspodelu u stacionarnoj i mobilnoj
fazi.
... po kinetičkoj teoriji!
19
• K = 1, (50% supst. U mf i 50% supst. U sf.
• K =9, 90% supst. U sf. A 10% u mf.
• Supstanca sa većim K se zadržava duže u koloni
20
Da bi se supst. uspešno razdvajale neophodna je
dovoljna razlika u K dve supstance koji pokazuje
afinitet supstanci prema stacionarnoj fazi!
stepen adsorpcije zavisi od gustine i jačine aktivnih
mesta na površini adsorbensa kao i od veličine
površine
adsorpcija desorpcija
dinamička ravnoteža - raspodela između faza
21
Često se sve supstance ne mogu eluirati jednim
rastvaračem; drugi rastvarač ili smeše povećavaju
snagu eluacije!
razdvajanje (zone ili trake)..…analiza - detekcija
vizuelno, IR, VIS, UV spektrofotometrija, MS, NMR
intenzitet signala = f(koncentracija komponente)
povećanje pređenog puta bolje razdvajanje
povećanje pređenog puta širenje traka
(ne može se izbeći!)
22
Protok m.f. pospešuje razdvajanje traka i ono je brže od
njihovog širenja. Komponente se uspešno razdvajaju, pod
uslovom da je kolona dovoljno duga, tj. da ima dovoljan
broj teorijskih platoa. “Sposobnost” kolone da daje uske i oštre pikova
efikasnost kolone
broja teorijskih platoa (N)broja teorijskih platoa (N)visina ekvivalentna teorijskom platou (HEPT) visina ekvivalentna teorijskom platou (HEPT) ili (H)ili (H)redukovana visina hredukovana visina hasimetrija pika (As)asimetrija pika (As)
23
a površina pika kvantifikacija
kalibraciona kriva za svaku komponentu
sastav standarda približan sastavu uzorka
kontrolisani eksperimentalni uslovi
sertifikovani standardni materijali
metoda unutrašnjeg standarda
položaj pika detekcija -identifikacija
24
Podeona hromatografija
• Tečno-tečna (hrom. na papiru,TLC)
• HPLC (na koloni)• GC
25
Podeona hromatografija –
koeficijent raspodele• Razdvajanje na osnovu
različite rastvorljivosti komponenata smeše u dve tečne faze koje se ne mešaju - definisano podeonim koeficijentom
• Efikasnost i brzina razdvajanja zavisi od broja teorijskih platoa sf.
26
• Mehanizam interakcije između sf i komponente nije sasvim definisan.
• Moguće su sve međumolekulske sile: Van Der Waalsove, dipol-dipol, jon-jon, jon-dipol, H-veza, što znači da je osim različite rastvorljivosti prisutan i
• proces adsorpcije.