Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija
description
Transcript of Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija
![Page 1: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/1.jpg)
Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija
2. lekcija
1
![Page 2: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/2.jpg)
Proteīni
Globulārie Fibrillārie
• Veido kompaktas, globulām līdzīgas struktūras
• Veido izstieptas, pavedienieniem vai plāksnēm līdzīgas struktūras
2
![Page 3: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/3.jpg)
Viendomēna un daudzdomēnu proteīni
• Tā kā daudzdomēnu proteīnos katra domēna struktūra var būt radikāli atšķirīga, parasti strukturāli klasificē individuālus domēnus
3
![Page 4: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/4.jpg)
Proteīnu domēni
spirāles saturošie
plāksnes saturošie
jauktie
4
![Page 5: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/5.jpg)
Alfa domēnu struktūras
5
![Page 6: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/6.jpg)
• spirāles ir ļoti bieži sastopamas proteīnos
• Vai spirāle var pastāvēt viena pati?
Izolētai spirālei nav hidrofobā kodola, tāpēc šķīdumā tā būtu ļoti nestabila
Divas (vai 3,4, utt) spirāles var pakoties kopā un veidot hidrofobo kodolu
Hidrofobais kodols
6
![Page 7: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/7.jpg)
Savītā spirāle (“leicīna rāvējslēdzis”)
• Vienkāršākais veids, kā savienot 2 spirāles
• Fibrillārajos proteīnos savītās spirāles var būt simtiem aminoskābju garas
• Globulārajos proteīnos savītās spirāles ir daudz īsākas (~10-30 atlikumu)
7
![Page 8: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/8.jpg)
Heptādes atkārtojumi
• d: Parasti Leu
• a: hidrofoba aminoskābe
• e, g: bieži lādēta aminoskābe
• b,c,f: lādēta vai polāra
a b c d e f g
Met Lys Gln Leu Glu Asp Lys
Val Glu Glu Leu Leu Ser Lys
Asn Tyr His Leu Glu Asn Glu
Val Ala Arg Leu Lys Lys Leu
1
8
15
22
2x3.5=7 (heptāde...)Leu rāvējslēdzī spirālē ir 3.5 (nevis 3.6) atlikumi vienā apgrizienā
8
![Page 9: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/9.jpg)
Leu pakojas pret Leu
Oriģinālais Leu rāvējslēdža koncepts (nepareizs!)
Eksperimentāli noteiktā struktūra
9
![Page 10: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/10.jpg)
Mijiedarbības savītajā spirālē
• Hidrofobajā kodolā mijiedarbojas leicīni un citi hidrofobi atlikumi
• Spirāļu sānus savieno pretēji lādēti atlikumi
• Uz ārpusi ir vērsti polāri un lādēti atlikumi 10
![Page 11: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/11.jpg)
«Kniedes caurumā» («knobs in holes») modelis savītajā spirālē
• Leicīns («kniede») no vienas spirāles pakojas starp 4 citiem atlikumiem no otras spirāles
Leu
Val
Leu
Val
Lys
11
![Page 12: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/12.jpg)
Četru spirāļu saišķis• Visizplatītākais spirāļu pakošanās veids
globulārajos proteīnos
12
![Page 13: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/13.jpg)
4-spirāļu saišķī spirāles var būt paralēlas vai anti-paralēlas
13
![Page 14: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/14.jpg)
spirāļu domēni var būt lieli un komplicēti
14
![Page 15: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/15.jpg)
Globīna folds
• Viena no vissvarīgākajām struktūrām
• Atrodas daudzos neradniecīgos proteīnos
• Cilvēkiem: mioglobīns & hemoglobīns
• Aļģēm: gaismas savākšanas komplekss
• Satur 8 spirāles, kuras veido liganda piesaistīšanās centra kabatu
15
![Page 16: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/16.jpg)
Mioglobīns
16
![Page 17: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/17.jpg)
Hemoglobīns
• Mioglobīns ir atrodams muskuļos kā skābekļa glabātuve
• Hemoglobīns transportē skābekli no plaušām uz pārējo organismu
• Mioglobīns ir monomērs• Hemoglobīns satur 4
monomērus: 2x un 2x • un ķēdes ir strukturāli
līdzīgas un tām ir globīna folds
17
![Page 18: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/18.jpg)
Sirpjveida anēmija: molekulāra slimība
• Veidojas, ja Glu 6 ķēdē mutējas par Val
18
![Page 19: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/19.jpg)
Hemoglobīna molekulu polimerizācija sirpjveida anēmijā
• Mutētais valīns ievietojas citas hemoglobīna molekulas hidrofobajā kabatā
19
![Page 20: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/20.jpg)
Mutantā hemoglobīna šķiedras eritrocītos
Sirpjveida eritrocīts
Normāls eritrocīts
• Mutantais hemoglobīns spēj transportēt skābekli tikpat labi, kā normālais
• Bet – sirpjveida eritrocītiem ir tendence veidot «sastrēgumus» kapilāros
20
![Page 21: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/21.jpg)
Kāpēc Glu 6 mutācija evolūcijas laikā nav eliminēta?
• Mutācija pārsvarā satopama Āfrikā• Homozigotiem indivīdiem ir nodrošināta
aizsardzību pret malāriju• Heterozigoti indivīdi ir asimptomātiski un viņiem
malārija ir vieglā formā 21
![Page 22: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/22.jpg)
Malārijas vēsturiskā izplatība
Sirpjveida anēmijas izplatība Āfrikā
Malārijas patreizējā izplatība
22
![Page 23: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/23.jpg)
Beta struktūras
Daudz mucu...
23
![Page 24: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/24.jpg)
Beta struktūru vispārējs raksturojums
• Funkcionāli, ļoti dažādi proteīni (antivielas, enzīmi, transportproteīni, utt)
• Otra lielākā proteīnu domēnu grupa (pēc )
24
![Page 25: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/25.jpg)
Beta struktūru kopīgās īpašības
• Veidotas no 4 līdz 18+ virknēm
• virknes pārsvarā ir novietotas antiparalēli (izņemot beta spirāli)
• Parasti sastāv no 2 beta plāksnēm, kuras ir novietotas viena pret otru, veidojot -mucu, “saspiestu” -mucu vai “sendviču”
• Dažu cilpu vietā var būt -spirāles
25
![Page 26: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/26.jpg)
β mucas
• Regulāras beta mucas sastāv no vienas beta plāksnes, kur pirmā (t.i., N-gala) beta virkne veido H-saites ar pēdējo (t.i, C-gala)
N- gala beta virkneC-gala beta
virkne
26
![Page 27: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/27.jpg)
Topoloģija
• Strukturālajā bioloģijā topoloģija ir veids, kādā savienoti otrējās struktūras elementi:
27
![Page 28: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/28.jpg)
• Visvienkāršākā topoloģija
Augšup-lejup mucas
28
![Page 29: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/29.jpg)
Augšup-lejup mucas piemērs: retinola piesaistīšanas proteīns (RBP)
• Retinols (vitamīns A) ir hidrofobs savienojums, kurš vāji šķīst ūdenī
• Organismā retinols cirkulē ar transportproteīnu RBP palīdzību
29
![Page 30: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/30.jpg)
RBP retinola piesaistīšanās centrs
• Hidrofobā daļa piesaistās hidrofobā kabatā
• Hidroksilgrupa ir eksponēta pret solventu
OH30
![Page 31: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/31.jpg)
Oscilējoša struktūra RBP aminoskābju sekvencē
• Katra otrā aminoskābe ir hidrofoba• Hidrofobās aminoskābes ir novietotas pret kodolu• Polārās, lādētās un dažas nelielas hidrobobas aminoskābes ir
eksponētas uz virsmas31
![Page 32: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/32.jpg)
-kristalīns
• Atrodas acu lēcās• Katrs domēns
sastāv no 2 grieķu atslēgas motīviem
• Abi motīvi ir savienoti ar vienu savienojumu
• Abas mucas ir saplacinātas
32
![Page 33: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/33.jpg)
Gēnu duplikācija -kristalīna evolūcijā
• Diviem domēniem ir aptuveni 40% sekvences identitāte
• Diviem viena domēna motīviem ir 20-30% identitāte
1.2.
x 2 x 233
![Page 34: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/34.jpg)
Ruletes (“Jelly roll”) -muca
• Ruletes -muca veidojas, satinoties 8 virkņu antiparalēlai beta matadatai 34
![Page 35: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/35.jpg)
Divas grieķu atslēgas ruletes -mucā
• Viens grieķu atslēgas motīvs ir ievietojes otra motīva cilpā
35
![Page 36: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/36.jpg)
Ruletes muca vīrusos• Ļoti bieži sastopams domēns dažādos sfēriskajos vīrusos• Vīrusos muca ir saplacināta un ar spirālēm dažu cilpu vietā• Piemērs: rinovīruss (t.i. iesnu vīruss)• Rinovīrusa daļiņa satur 180 monomērus ar ruletes mucas domēna struktūru
x180
36
![Page 37: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/37.jpg)
Visu klasisko 8 virkņu -mucu salīdzinājums
Augšup-lejup -kristalīna veida ruletes 37
![Page 38: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/38.jpg)
Vēl viena -muca – himotripsīna folds
• Himotripsīns – gremošanas traktā sastopama proteāze, kas sašķeļ barībā esošos proteīnus
• Himotripsīna, tripsīna un citu serīna proteāžu struktūra sastāv no diviem līdzīgiem domēniem
• Dažiem ne-proteāžu proteīniem arī ir līdzīga sruktūra• Viens grieķu atslēgas motīvs un viena -matadata (kopā
sešas -virknes) veido mucu• Aktīvais centrs atrodas starp abām mucām
38
![Page 39: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/39.jpg)
Himotripsīna struktūra
1. domēns
2. domēns
Grieķu atslēga
β matadat
a
Aktīvais centrs
39
![Page 40: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/40.jpg)
Zaļās fluorescences proteīns
• - muca sastāv no 11 virknēm, topoloģija atšķiras no visām iepriekš apskatītajām
40
![Page 41: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/41.jpg)
spirāle• Divi dažādi veidi – divu un trīs plākšņu spirāles
• Abi varianti ir novirzes no idealizētas vienas virknes spirāles
• Nejaukt ar spirāli, kura ir daudz šaurāka
• Atšķirībā no iepriekš apskatītajām struktūrām, veidota no paralēlām virknēm
Idealizēta -spirāle (realitātē neeksistē)
-spirāle
41
![Page 42: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/42.jpg)
Divu plākšņu spirāles struktūra un tās sekvence
X7
U8
X9X7
U8
X9
Gly-Gly-X-Gly-X-Asp-X-U-X
X=jebkura aminoskābe
U=bieži Leu
Starp cilpām ir Ca2+ joni42
![Page 43: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/43.jpg)
Trīs plākšņu spirāle
Ir novērotas gan labās, gan kreisās vītnes 3 plākšņu spirāles
Sekvences motīvs - heksapeptīds[LIV] [GAED] XX [STAV] X 43
![Page 44: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/44.jpg)
Pektāta liāzes struktūra
44
![Page 45: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/45.jpg)
struktūras
Mucas, plāksnes un pakavi
45
![Page 46: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/46.jpg)
Kopīgās iezīmes
• Paralēlas virknes ir izkārtotas plāksnēs vai mucās
• Individuālas virknes ir savienotas ar spirālēm
• motīvs ir galvenā sastāvdaļa
46
![Page 47: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/47.jpg)
TIM muca
Pirmo reizi novērots enzīmā Triozes fosfāta Izomerāzē47
![Page 48: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/48.jpg)
TIM mucas kodols
• Kodols ir piepakots ar hidrofobām aminoskābēm
• Sānu ķēdes izkārtotas 3 slāņos
48
![Page 49: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/49.jpg)
TIM muca kā domēns
• Daudzdomēnu proteīnos ar TIM mucu, enzimātiskā funkcija vienmēr lokalizējas TIM mucas domēnā
49
![Page 50: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/50.jpg)
Aktīvā centra novietojums TIM mucas enzīmos
• Aktīvais centrs ir novietots mucas augšpusē starp cilpām virkņu C-galā
50
![Page 51: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/51.jpg)
TIM mucas: enzīmu evolūcijas piemērs
• Mutējot aminoskābes aktīvā centra cilpās evolūcijas gaitā var rasties enzīmi ar pilnīgi jaunu funkciju
• Varētu būt, ka visi TIM mucu saturošie enzīmi ir evolucionāri radniecīgi
• Ir konstatētas TIM mucas ar līdzīgu sekvenci, bet ļoti atšķirīgām enzimātiskajām funkcijām
51
![Page 52: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/52.jpg)
-pakava folds
Parastais zirga pakavs pakavs
52
![Page 53: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/53.jpg)
pakava hidrofobais kodols
• Atrodas starp virknēm un spirālē, NEVIS pakava vidū
• Daudz leicīnu
53
![Page 54: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/54.jpg)
Leicīna bagātie atkārtojumi (LRR, leucine rich repeats)
pakava proteīnos
• a- alifātiska aminoskābe
• X- jebkura aminoskābe
• LRR sekvence ir pietiekoši konservatīva, lai pakava proteīnus varētu atpazīt tikai no aminoskābju sekvences
54
![Page 55: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/55.jpg)
atvērtā savērptā (open twisted) plāksne
• Paralēla vai jaukta plāksne ar spirālēm abās pusēs
• virkņu skaits var būt no 4 līdz 10• Saukts arī par Rosmana foldu
55
![Page 56: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/56.jpg)
Topoloģija
• TIM mucu un LRR proteīnos topoloģija ir fiksēta
• atvērtajā savērptajā plāksnē topoloģija var būt ļoti dažāda
TIM
piemēri atvērtajai savērptajai plāksnei 56
![Page 57: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/57.jpg)
Aktīvā centra novietojums atvērtajā savērptajā plāksnē
• Aktīvais centrs atrodas to divu -virkņu C-galos, no kurām cilpas iet uz pretējām plāksnes pusēm
57
![Page 58: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/58.jpg)
Parastie sendviči
Sendviči....
Proteīnu struktūru sendviči
58
![Page 59: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/59.jpg)
Proteīnu struktūru senviči
• Daudzslāņainas molekulas, katrs slānis ir veidots no vai struktūras
• Visbiežāk sastopamie: • dubultais sendvičs• trīskāršais sendvičs• trīskāršais sendvičs• dubultais sendvičs• atvērtā savērptā plāksne ir ...• Pareizi, trīskāršais sendvičs
59
![Page 60: Globulāro proteīnu struktūras un to klasifikācija](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012819/56813b6e550346895da4755f/html5/thumbnails/60.jpg)
Vai ir arī citi proteīni?
• Pastāv vēl ļoti daudz proteīnu foldu
• Lielākajai daļai to tiem ir ļoti maz pārstāvju, tādēļ tie sīkāk netiks apskatīti
60