genetica de levaduras
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Saccharomyces cerevisiae
Tema 14. Genética de levaduras
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Saccharomyces cerevisiae
Schizosaccharomyces pombe
Formas de división
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EsporulaciónAscosporas
Formación de basidiosporas
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Saccharomyces cerevisiae
Schizosaccharomyces pombe
Esporulación
Ascosporas
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Saccharomyces cerevisiae
Pseudohifas e hifas
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Saccharomyces cerevisiae
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a
αaa
α
α
a/α cigoto
Asca con 4 esporas
Células haploides
-C -N
apareamiento
esporulación
germinación +C +N
Saccharomyces cerevisiae, ciclo de vida
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Saccharomyces cerevisiaeMorfogénesis y diferenciación en un organimos unicelular
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Schizosaccharomyces pombe
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Saccharomyces cerevisiae
Fermentación de la glucosa
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Saccharomyces cerevisiae
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Tamaño y composición de las células de S. cerevisiae
Célula haploide Célula diploideVolumen (µm3) 70 120Composición (10-12 g)• Peso húmedo 60 80• Peso seco 15 20• DNA 0,017 0,034• RNA 1,2 1,9• Proteína 6 8
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S. Cerevisiae: genoma
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S. cerevisiaecromosomas
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S. cerevisiaeElectroforesis de campo pulsante
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Centromeros
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Plásmidosartificiales
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S. cerevisiae, genoma
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Número de intrones
0102030405060708090100
0 1 >1
YeastFungiMammal
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Tamaño de los intrones
0
10
20
30
40
50
60
70
<100 <200 <1 kbp 1 to 5 >5
FungiVerterbrate
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Genética de levaduras
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Genética de levaduras
Cruce de dos mutantes con elmismo fenotipo y examen delfenotipo del diploide
X
ts-1 ts-2 ts-1 ts-2/
X
ts- TS+ ts- TS+/
Prueba de dominancia
Prueba de complementación
Cruce del mutante con elsilvestre y examen del fenotipodel diploide
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Genética de levadurasPrueba de complementación
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Genética de levaduras
Prueba de fenotipos no seleccionados
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Genética de levaduras
Análisis de tétradas
¿Se debe un fenotipo a la mutación de un solo gen?
Comprobación de que dos fenotipos se deben a la misma mutación
Test de reversión
Creación de dobles mutantes
Mapeo de los genes entre sí y respecto al centrómero
abcd
1 2 3 4 5 6 7 8
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Análisis de tétradas pormicromanipulación
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Análisis de tétradas por micromanipulación
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Genética de levadurasAnálisis de tétradas
¿Segrega el fenotipo 2:2 tras la meiosis?
NO: algo más ha ocurrido (más de una mutación no ligadas, mutación en plásmido o en el genoma mitocondrial)
Sí: el fenotipo se debe a la mutación de un solo gen
Segregación 2:2 Otro tipo de segregación
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Análisis de tétradas
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Genética de levadurasTerminología de ligamiento:
R = Resistente a una drogar = sensibleB = Blancob = azul
Tres posibles tipos de tétradas
espora genotiposa Rb RB RBb Rb RB Rbc rB rb rBd rB rb rb
PD NPD TDitipo
parentalDitipo
No parentalTetratipo
Ejemplo: Rb x rB
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Genética delevaduras
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Genética de levaduras
Ditipos parentales Ditipos no parentales TetratiposrB rb RBrB rb RbRb RB rbRb RB rB
No ligados 1 : 1 : 4Ligados >1 : <1Ligado al centrómero 1 : 1 : <4
Segregación durante la meiosis
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Algunos escrutinios
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gen2
gen1
GEN2
gen1
mutagénesis
No crece
Crece
Supresores extragénicos
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Supresores multicopiaun ejemplo
X X10 1
10x 11
silvestre mutantesupresor
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GEN2
gen1
GEN2
gen1
Supresores multicopia
genoteca 2µ
No crece
Crece
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GEN2
gen1
GEN2GEN1
Suprimidos multicopia
El plásmido puede perderse
Mutagénesis
GEN2
El plásmido no puede perderse
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Fenotipo por dosis alta
No crece en galactosa
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Ausencia de complementación
Suele indicar genes quecodifican subunidades de uncomplejo heteromultimético
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Mutantes letales sintéticos
Mutante viable
Segunda mutaciónMutante inviable
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gen2
gen1
GEN2
gen1
Mutantes letales sintéticos
mutagénesis
posible la segregación
NO es posible la segregación
GEN1
GEN1
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ade3ade2
ADE3 URA3
GEN X
ade3
mutXade2
ADE3 URA3
GEN X
UV
mutY
Colonias blancasCrecimiento en 5’-FOA
Colonias rojas sin sectoresSensibles a 5’-FOA
Mutantes letales sintéticos
mutXura3
ura3
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Genéticamolecular de
levaduras
Aislamiento de alelospor “gap repair”
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Genética molecular de levaduras
Reemplazamiento de genes
![Page 45: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/45.jpg)
Genética molecularde levaduras
Deleción
![Page 46: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/46.jpg)
Genética molecularde levaduras
Barajado de plásmidos
![Page 47: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/47.jpg)
Saccharomyces cerevisiae
![Page 48: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/48.jpg)
Saccharomyces cerevisiae
![Page 49: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/49.jpg)
Tipo sexual
![Page 50: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/50.jpg)
HMLα MATα HMRa
W X Yα ZL W X Yα Z X Ya ZRE EI I
W ~700 bpYa ~600 bpYα ~750 bpZL ~300 bpZR ~250 bp
CEN III
200 kb 150 kb
HO
HO corta en una secuencia de ~18 bp (α-inc)
Interconversión del tipo sexual
Evento no recíproco. Se pierde el casetteConversión génica, vía reparación de corte de doble cadena
![Page 51: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/51.jpg)
aa α
α
α α
α
Interconversión del tipo sexual
mother daughter
mother daughter
a o α pero no a/α cambianSólo las madres cambian
Nasmyth (1983)
HO está:Apagado en a/αApagado en hijasEncendido al final de G1
![Page 52: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/52.jpg)
Un linaje de célula madrecontrolado por los genes SWI
![Page 53: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/53.jpg)
Aislamiento delmutante ash1
![Page 54: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/54.jpg)
![Page 55: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/55.jpg)
![Page 56: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/56.jpg)
![Page 57: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/57.jpg)
Genética del ciclo celular
•Mutantes cdc•Aislamiento de ciclinas de G1 comosupresores de cdc28 por sobrexpresión
![Page 58: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/58.jpg)
Regulación del ciclo celular
![Page 59: genetica de levaduras](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022081505/553152724a7959372c8b49ef/html5/thumbnails/59.jpg)
Regulación del ciclo celular
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Regulación del ciclo celular