DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes...
Transcript of DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes...
![Page 1: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/1.jpg)
LA COLORATION
DR A.LOUCIF
![Page 2: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/2.jpg)
LA COLORATION
Les colorations histologiques sont très
nombreuses et variées mais se résument
schématiquement en trois types de
coloration:
![Page 3: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/3.jpg)
1. Les colorations topographiques.
2. Les colorations histochimiques .
3. Les colorations structurales.
Spéciale
s
![Page 4: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/4.jpg)
Les colorations topographiques :
Ce sont des colorations standards associant à
la fois :
une coloration nucléaire :l’hématoxyline est le
colorant nucléaire fondamental de la
technique histologique.
Il colore les noyaux en bleu violet foncé.
![Page 5: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/5.jpg)
et une coloration cytoplasmique dite de
fond (faite à l’aide de colorants acides :
Eosine, érythrosine et Orange G)
Le cytoplasme est éosinophile
![Page 6: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/6.jpg)
![Page 7: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/8.jpg)
Les colorations histochimiques :
Elles visent à mettre en évidence dans le
tissu examiné : glycogène, mucus, graisse,
pigments ferriques, mélaniques…
![Page 9: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/9.jpg)
Les colorations structurales :
Elles mettent en évidence les
composants intimes de certaines structures
tissulaires : fibres élastiques, fibres
réticulaires, névroglie.
![Page 10: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/10.jpg)
D’une manière générale la qualité des
colorants dépend de plusieurs facteurs :
La nature de la pièce : les tissus très cellulaires
se colorent plus rapidement que les moins
cellulaires.
L’épaisseur de la coupe : les coupes fines se
colorent rapidement.
![Page 11: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/11.jpg)
La fixation : les pièces qui ont séjourné
longtemps dans les fixateurs dits
« oxydants » perdent rapidement leurs
affinités tinctoriales.
La qualité du produit colorant : la présence
d’impuretés dans un colorant influe d’une
manière importante sur la coloration.
![Page 12: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/12.jpg)
Le degré de maturation de certaines solutions
colorantes. L’hématoxyline n’acquiert ses
qualités tinctoriales optimum qu’après
plusieurs jours, alors que d’autres doivent être
utilisées immédiatement.
La fréquence d’utilisation et l’âge des
solutions colorantes : plus l’utilisation est
fréquente et plus les temps doivent être
allongés.
![Page 13: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/13.jpg)
La température ambiante du laboratoire :
il est connu que la chaleur active les
colorations. A l’inverse, quand
l’atmosphère est froide, il faut allonger les
temps.
![Page 14: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/14.jpg)
La coloration standard, (de routine)
universellement adoptée en anatomie
pathologique, est celle dite « Hemalin-Eosine »
dont la technique est la suivante :
![Page 15: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/15.jpg)
Technique :
1) Xylène……………………………10 mn pour déparaffiner
2) Xylène……………………………10 min
3) Alcool 100°………………………5 mn
4) Alcool 100°………………………passage
5) Alcool 100°………………………passage
6) Eau courante……………………blanchissement (faire disparaître la couleur jaune des lames)
7) Hemalun (hématoxyline de Harris)………..10 à 20 s (allonger le temps avec une utilisation accrue du produit)
![Page 16: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/16.jpg)
8) Eau courante ……………………bleuissement (les lames deviennent bleu pâle)
9) Eosine……………………………5 mn
10) Eau courante…………………….jusqu’à la disparition de la couleur rouge sur les bords des lames.
11) Alcool 100°………………………….passage
12) Alcool 100°………………………….passage
13) Xylène……………………………….passage
14) Xylène……………………………….passage éclaircissement des lames
15) Xylène……………………………….10 mn
16) Montage (EukittR ou EtelanR)
![Page 17: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/17.jpg)
Réactifs :
Hémalum (hématoxyline de Harris) est
vendue prête à l’emploi. C’est une
composition de : Hématoxyline, Alun
potassique, Acide acétique et Eau.
Eosine: Orange G (20 g) + Eosine pure (10
g) + 100cc eau.
Résultats :
Noyau bleu violet (basophile)
Cytoplasme rose (éosinophile)
![Page 18: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/19.jpg)
COLORATION SPECIALE :
Les colorations spéciales se comptent
par dizaines. Elles mettent en évidence
certaines substances ou des
constituants tissulaires.
Nous proposons, pour illustration,
quelques unes des plus utilisées.
![Page 20: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/20.jpg)
Trichome de Masson.
Noir de soudan .
PAS .
ZIEHL NEELSON.
GIEMSA.
Rouge congo.
Coloration de perls.
Fontana.
![Page 21: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/21.jpg)
LES COLORATIONS TRICHROMIQUES :
La coloration de trichrome de Masson
utilise trois colorants différents :
Un colorant des noyaux.
Un colorant du cytoplasme.
Un colorant des structures de soutien, tissu
conjonctif en particulier.
![Page 22: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/22.jpg)
Résultats :
Noyaux : noirs
Cytoplasme : rose violacé
Muscles : rose rouge
Tissus conjonctif : bleu ou vert
![Page 23: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/23.jpg)
![Page 24: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/24.jpg)
Les lipides :
La coloration la plus utilisée est le noir
SoudanB.
![Page 25: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/25.jpg)
Les polysaccharides :
La coloration classique qui met en évidence les polysaccharides est le P.A.S (Periodic – acid – Schiff) HIO4, réaction introduite par Mc. Manus (1946) et Hotchkiss (1948).
Le matériel PAS positif est coloré en magenta (rouge pourpre).
Les substances PAS + sont :
Polysaccharides : glycogène.
Mucopolysaccharides neutres.
Mucoprotéines = (mucine, sécrétions mucoïdes du tractus intestinal, TSH, les cylindres hyalins protéiques du rein, corps de Russel).
Glycoprotéines, les membranes basales, la réticuline, le collagène. Glycolipides.
La coloration classiquement utilisées est appelée réaction du P.A.S (Periodic Acid Schiff).
![Page 26: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/26.jpg)
Résultats :
Le matériel P.A.S positif est coloré en
rouge pourpre.
Une autre coloration hautement
spécifique pour la mise en évidence du
glycogène est le Carmen de Best; elle le
colore en rouge.
![Page 27: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/30.jpg)
Méthode de Giemsa :
C’est une coloration très efficace pour mettre en évidence les mastocytes.
Résultats :
Mastocytes et éosinophiles : rouges briques.
Noyaux : violets.
Cytoplasme basophile : bleu ciel à bleu foncé.
Granulations neutrophiles : violacées ;basophiles (bleu violet foncé).
![Page 31: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/31.jpg)
Coloration de ZIEHL NEELSON modifiée (pour la mise en évidence des BK dans les tissus) :
Bacille BK : rouge vif.
Tissu en bleu.
Caséum en gris bleu très pâle.
Les globules rouges doivent présenter une teinte rougeâtre très claire et sont un bon témoin de décoloration trop poussée.
![Page 32: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/33.jpg)
Substances amyloïdes :
Substance homogène, hyaline semi-translucide et de distribution extracellulaire au cours de certains états pathologiques.
La substance amyloïde primitive est constituée par :
Une fraction glucidique.
Des constituants protéiques.
Des groupements sulfatés.
Les fixateurs de choix sont les fixateurs alcooliques (liquide de Carnoy, Ethanol absolu).
Les meilleurs résultats sont obtenus sur coupe à congélation.
![Page 34: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/34.jpg)
Rouge Congo :
Résultats :
Substance amyloïde : rose vif à rouge.
Collagène : rose.
![Page 35: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/36.jpg)
Coloration du fer :
Coloration de Perls (la plus utilisée) :
Résultat :
Fer ferrique (Fe+++) se colore en bleu vert,
les noyaux en rouge.
![Page 37: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/37.jpg)
![Page 38: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/38.jpg)
Pigments mélaniques :
Les pigments mélaniques sont noirs ou brun jaunâtre.
La coloration qui les met en évidence est la coloration au liquide de Fontana (nitrate d’argent ammoniacal).
Résultats :
Les grains de mélanine ou de sérotonine sont colorés en noir sur un fond rouge pâle.
![Page 39: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/39.jpg)
Coloration de Fontana mettant en évidence les pigments mélaniques
(en noir)
![Page 40: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/40.jpg)
![Page 41: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/41.jpg)
LE MONTAGE:
Le montage se fait classiquement entre
lame et lamelle en utilisant les media
classiques Baume du canada (utiliser le toluène ou le xylène)
Huile de cèdre (utiliser le toluène ou le xylène)
Eukitt (utiliser le toluène ou le xylène)
Clearium (utiliser le propanol)
Autres milieux synthétiques.
![Page 42: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/42.jpg)
![Page 43: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/43.jpg)
LECTURE DES LAMES
La lecture des lames se fait aux faibles
grossissements en utilisant impérativement
des objectifs plans pour avoir une bonne
vue d'ensemble des tissus.
![Page 44: DR A.LOUCIF LA COLORATION...Extemporané: Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables pendant le temps](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022041620/5e3e2c7cb29b65118778c6da/html5/thumbnails/44.jpg)
Extemporané:
Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes
permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables
pendant le temps opératoires. Ces techniques ont pour but
principalement de déterminer la nature de la lésion abordée
chirurgicalement ou d'évaluer les limites d'exérèse ou l'extension
d'une tumeur.
L'examen extemporané s'effectue sur tissu frais. Le prélèvement
est congelé à -30°, coupé dans un cryostat, permettant d'obtenir
des préparations de 5 à 8 mm d'épaisseur. La coupe est colorée
par un colorant monochrome, le plus souvent par bleu de
toluidine.
L'examen extemporané est systématiquement contrôlé par un examen histologique standard.
le fragment analysé étant fixé après décongélation