DRUG MASTER FILES

Bürde Süheyla SUNAR

Ocak 2014

İÇİNDEKİLER1.GENEL BİLGİ1.1 İsimlendirme1.2 Yapı1.3 Genel Özellikler2.ÜRETİM2.1 Üreticiler2.2 Üretim işlemleri ve İşlem Kontrolleri2.3 Kritik Adımlar ve Ara Maddelerin Kontrolleri2.4 Üretim Proses Validasyonu2.5 Üretim Prosesinin Gelişimi 3. KARAKTERİZASYON3.1 Yapının ve Diğer Özelliklerin Açıklanması3.2 Safsızlıklar4. ETKİN MADDENİN KONTROLÜ4.1 Spesifikasyonlar4.2 Analitik Prosedürler4.3 Seri Analizleri4.4 Kap-Kapak Sistemi5. STABİLİTE5.1 Stabilite Özeti ve Sonuçlar

1.GENEL BİLGİ1.1 İsimlendirme

• Ürün Adı: Doxorubicin hydrochloride (Doxorubicini hydrochloridum)

• IUPAC: (8S,10S)-10-[(3-Amino-2,3,6-trideoxy-α-L-lyxo- hexopyranosyl)oxy]-6,8,11-trihydroxy-8-(hydroxyacetyl)- 1-methoxy-7,8,9,10-tetrahydrotetracene-5,12-dione hydrochloride.

1.2 Yapı

1.3 Genel Özellikler•  CAS Numarası: 25316-40-9• Molekül Formülü: C27H29NO11.HCl • Molekül Ağırlığı: 579.98 g/mol• Form: Toz• Görünüş: Turuncu-kırmızı kristal toz• Çözünürlük: Suda çözünür, metanolde az çözünür.• Kaynak: Streptomyces türleri ve E.coli• PH: 4.0-5.5• Kaynama Noktası: 810.3 °C• Erime Noktası: 204-205 °C• Alevlenme Noktası: 443.8 °C• Saklama Koşulları: 2-8 °C

• Tanım: DNA interkalasyonu ile makromoleküler biyosentezi inhibe eden doksorubisin HCl, antrasiklin bir antibiyotikdir ve daunorubisinin 12-hidroksi türevidir.

• Mekanizma: Doksorubisin, transkripsiyon sırasında DNA ‘nın açılmasını sağlayan topoizomeraz II enziminin gelişimini durdurur. DNA replikasyonu için DNA zinciri kırıldıktan sonra doksorubisin, topoizomeraz II-DNA kompleksini stabilize eder ve DNA çift sarmalının yeniden oluşmasını engeller, böylece replikasyon prosesini inhibe eder.

• Kullanım Amacı: Doksorubisin; non-Hodgkin lenfoma, çoklu miyeloma, akut lösemi, Kaposi sarkomu, Ewing sarkomu, Wilm tümörü ve göğüs, adrenal korteks, endometriyum, akciğer, yumurtalık ve diğer kanserlerin tedavisi için kullanılır.

Farmakokinetik Parametreler: (IV)

T1/2:20-48 saat

Vd: 1240-3010 litre

Cl: 560-1400 ml/dak

Biyoyararlanım: %5 (oral)

2. ÜRETİM 2.1 Üreticiler

B&S Pharmacy A.Ş.

Keçiören/ANKARA

03123433273

2.2 Üretim işlemleri ve İşlem Kontrolleri

A. DAUNORUBİSİNİN DOKSORUBİSİNE BİODÖNÜŞÜMÜ

Bu proses şunları kapsamaktadır:

1) Bu buluşa ait daunorubisin içeren vektörler ile değiştirilmiş daunorubisin üretemeyen rekombinant konakçı hücrenin kültürlenmesi

2) Doksorubisinin izole edilmesi

Streptomyses türlerinin ve E.coli’nin transformasyonu:• E.coli kalsiyum klorid metodu ile hazırlanır ve standart

tekniklerle transforme edilir.

• S.lividans TK23, sıvı R2YE ortamında yetiştirilir ve 48 saat sonra hasat edilir. Misel pellet iki kez %10'luk sükroz çözetisi ile yıkanır ve Hopwood metoduna göre protoplast hazırlamak için kullanılır. Protoplast pelletleri yaklaşık 300 mikrolitre P ortamında süspande edilir ve her transformasyon için 50 mikrolitrelik kısımlar kullanılır. Hopwood küçük ölçekli transformasyon metoduna göre protoplastlar plasmid DNA ile transforme edilir. 300C’de R2YE ortamında 17 saat sonra, plakalar 200mikrogram/ml tiostreptan ile yapıştırılır ve spolüre olana kadar büyümeye bırakılır.

Proses:

Analiz:• RP-HPLC, 0,385 ml/dak akış hızında, Vydac C18 kolon (5

mikrometre parçacık boyutu 4.6 x 250 mm) kullanılarak uygulanmıştır.

• Mobil faz su içinde %0.2’lik trifloroasetik asit (TFA, from Pierce Chemical Co.), mobil faz B asetonitril içinde %0.078’lik TFA (from J: T: Baker Chemical Co.)’dır.

• Elüsyon, %20'den %60'a değişen oranlardaki faz B'nin faz A içindeki linear gradyanı ile 33 dalikada gerçekleşir ve 488 nm'ye (bant genişliği 12 mikrometre) ayarlanmış bir dizi diyot dedektörü ile izlenir.

• ε-rhodomycinone, daunorubicin ve doxorubicin (10 micrograms/ml in methanol), kültürlerinden izole edilen metabolitlerin miktarını ölçmek için harici standart olarak kullanılır.

B. DOKSORUBİSİNİN FERMANTASYONU

Bu proses şunları kapsamaktadır:

1) Bu buluşa ait vektörler ile değiştirilmiş rekombinant daunorubisin üreten konakçı hücrenin kültürlenmesi

2) Doksorubisinin izole edilmesi

Proses:

2.3 Kritik Adımlar ve Ara Maddelerin Kontrolleri

2.4 Üretim Proses Validasyonu• İşlem parametreleri ve in-proses testler dikkate alınmış ve

üretim prosesinin amacına uygun olduğu belirlenmiştir.

2.5 Üretim Prosesinin Gelişimi• Konakçı hücreler, daunorubisin veya doksorubisine

duyarlı olabilirler ve bunları belirli bir miktar ihtiva eden ortamda büyüyemezler ya da ikisine karşı da dirençli olabilirler.

• Bu buluş, DNA'larında daunorubisin ve doksorubisin karşı direnç kazandıran genleri içerir.

3. KARAKTERİZASYON 3.1 Yapının ve Diğer Özelliklerin Açıklanması

Log Kow: 1.27

Buhar basıncı:250C’de 2.5x10-23

H-Bond Donor: 6

H-Bond Acceptor: 12

Glukoform: Doksorubisinol ve 7-deoxglilona ’a değişerek glukuronik asite bağlanır ve safra ile atılır.

3.2 Safsızlıklar• USP-27’ye göre tespit edilen herhangi bir impuritenin

toplam miktarı %2.0’den fazla olamaz.

• Solvent Artıkları Sınırı: aseton %0.5’ten fazla olamaz, aseton ve alkolün total miktarı %2.5’ten büyük olamaz.

4. ETKİN MADDENİN KONTROLÜ 4.1 Spesifikasyonlar

TEST SPESİFİKASYON SONUÇ

Görünüş Turuncu-kırmızı, kristal toz, higroskopik

uygun

Miktar Tayini 98.0-102.0 Uygun

Ph 4.0-5.5 Uygun

Safsızlıklar

Her bir impürite %0.5’den fazla olmamalı

uygun

Etanol %0.1’den az olmalı uygun

Su 0.1g’da belirlenmeli ve %4’ü aşmamalı

uygun

Bakteriyel Endotoksin

2.2 IU/mg’daz az olmalı

uygun

4.2 Analitik ProsedürlerGörünüş: Organoleptik Kontrol

Tanımlama: 1-Infrared absorption spectrophotometry (Comparison: doxorubicin hydrochloride CRS)2-0.5ml nitrik asit R'de 10mg çözülür, 0.5ml su R eklenir ve 2 dk alev üzerinde ısıtılır. Ardından soğutulur ve gümüş nitrat çözeltisi R1 eklenir, beyaz bir çökelek oluşur.

pH : 4.0 to 5.5.Dissolve 50 mg in carbon dioxide-free water R and dilute to 10 ml with the same solvent.

İmprüte: Sıvı Kromatogrofisi

Solvent Artığı: Gaz kromatografisi

Miktar Tayini: HPLC

4.3 Seri Analizleri•Seri analizleri yapılmıştır ve sonuçlar verilen spesifikasyonlara uygundur.

4.4 Kap-Kapak Sistemi•Hava geçirmeyen bir kapta saklanmalıdır. Eğer madde steril ise; steril, hava geçirmeyen ve kurcalamaya dayanıklı bir kapta saklanmalıdır.

5. STABİLİTE 5.1 Stabilite Özeti ve Sonuçlar• Düşük konsantrasyonlarda ışığa duyarlı olmasına rağmen,

doksorubisinin klinik dozlarında önemli bir fotodegredasyon yoktur ve uygulanması esnasında çözeltilerini ışıktan korumak için özel bir önleme gerek yoktur.

• 250C’de mini PVC paketlerinde saklandığında %9’luk sodyum klorür çözeltisinde 24 gün stabil kalabilir.

• Doksorubisinin stabilitesi büyük ölçüde pH ile ilgilidir ve düşük pH’larda daha stabildir.

• Ph'nın düşüşü çözeltilerindeki, pozitif yüklü düz eksenli filtredeki adsorbsiyon ve çökme ile gerçekleşen doksorubisin kaybını azaltır.

KAYNAKLAR• USP 27• EP 5• Martindale 36th Edition• http://www.toku-e.com• http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?

cid=31703#x299• https://www.google.com/patents/WO1999055829A2?

cl=en&dq=WO+99/55829&hl=tr&sa=X&ei=4MvJUpfKFK6M4gSY3oCQCQ&ved=0CDgQ6AEwAA

• https://www.google.com/patents/US5955319?dq=5955319&hl=tr&sa=X&ei=2s3JUqbNEojw4gSh0YGACQ&ved=0CDoQ6AEwAA

TEŞEKKÜRLER