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CARRERA DE ESPECIALIZACION EN
BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL
FCEyN-INTI
Materia de Articulación CEBI_E3
Cultivos Celulares
Docente: Erina Petrera
CEBI_E3_4: Aplicaciones industriales de los cultivos
celulares
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ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD
- Viabilidad: alteración de permeabilidad de membrana y/o
perturbación de las vía metabólicas se correlacionan con la
proliferación o supervivencia.
- Supervivencia: retención de la capacidad de división.
- Proliferación: incremento del número celular debido a la
división celular
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ENSAYOS DE VIABILIDAD
- Dependen de la integridad de la membrana,
medida por la captación de un colorante para el cual
la célula es normalmente impermeable (azul tripán,
eritrocina).
- Dependen de la liberación de un colorante, que
normalmente es captado y retenido por células
viables (rojo neutro, diacetil-fluoresceína).
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ENSAYOS DE MICROTITULACIÓN
Viabilidad: durante el tiempo
de experimentación
Supervivencia: se retira la
droga y se incuba durante
2/3 veces el tiempo de
duplicación celular
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ENSAYOS DE PROLIFERACIÓN
- Son útiles pata determinar el efecto de
compuestos sobre la proliferación celular,
con una curva de crecimiento completa
- La droga a analizar debe agregarse luego
de que las células se pegan y a baja
confluencia celular
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ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD
- Metabolismo: basados en la microtitulación, miden
respuesta metabólica (enzimas, RNA, DNA).
Luminómetro
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Fluorómetro
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ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD
- Transformación: sobrevida, en un estado alterado.
- Irritabilidad: una respuesta análoga a la inflamación,
alergia, irritación in vivo, difícil de cuantificar in vitro
(citoquinas en cultivos organotípicos).
Inmunohistoquímica ELISA
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APLICACIONES INDUSTRIALES
DE LOS CULTIVOS CELULARES
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ESCALADO EN SUSPENSIÓN
30-100 rpm
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ESCALADO EN SUSPENSIÓN
EN CULTIVO CONTINUO
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ESCALADO EN SUSPENSIÓN EN
CULTIVO CONTINUO: FIBRA HUECA
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ESCALADO EN MONOCAPA
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COMPARACIÓN DE DIFERENTES
METODOS DE CULTIVO
Botellas roller área de superficie 490 cm2/ botella
Microcarriers área de superficie
densidad normal
Superficie área/l
Equivalente en botellas
roller
6000 cm2/ g peso seco
5 g/l
30000 cm2
60 roller
Fibra hueca Tamaño
Superficie área fibra hueca
Equivalente en botellas
roller
40 x 40 x 4,5 cm2
9300 cm2
19 roller
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CULTIVOS DE CÉLULAS ANIMALES
EN PROCESOS DE PRODUCCIÓN
- Procesos en los cuales el objetivo es la producción de
una sustancia, generalmente una molécula bioactiva y
también virus, y en los cuales las células cumplen la
función de medio de producción;
- Procesos en los cuales el objetivo es la producción de
las propias células, generalmente organizadas en tejidos
u órganos (desarrollo de la ingeniería de tejidos y cultivo de
stem cells).
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1.- Anticuerpos monoclonales
2.- Fármacos naturales
3.- Fármacos recombinantes
4.- Hormonas
5.- Vacunas virales
PRODUCTOS DE CULTIVOS
DE CÉLULAS ANIMALES
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Hibridomas Obtención de hibridomas
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1.- Anticuerpos monoclonales
2.- Fármacos naturales
3.- Fármacos recombinantes
4.- Hormonas
5.- Vacunas virales
PRODUCTOS DE CULTIVOS
DE CÉLULAS ANIMALES
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PRODUCTOS RECOMBINANTES
COMO TERAPÉUTICOS HUMANOS
CUIDADOS
1.- Que no desencadenen respuesta inmune;
2.- Seleccionar el tipo de célula en el cual se va a expresar
el gen;
3.- Monitorear cuáles son las modificaciones post-
transcripcionales y/o post-traduccionales que pueden
condicionar su actividad biológica o su antigenicidad.
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Producción de virus
Obtención de stocks de virus para purificación de partículas virales o
subcomponentes:
• Producción de vacunas
Virus vivo
Virus inactivado
Virus recombinante
Subunidades
PRINCIPALES APLICACIONES DEL
USO DE CULTIVOS CELULARES EN
VIROLOGÍA
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Cuando el objetivo es la
producción de las
propias células…
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CULTIVO DE CÉLULAS TRONCALES
HEMATOPOYÉTICAS O STEM CELLS
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STEM CELLS DE EMBRIÓN: las de ratón han sido
usadas in extenso para estudiar diferenciación,
porque desarrollan una variedad de diferentes tipos
celulares (músculo, hueso, nervios).
STEM CELLS MULTIPOTENCIALES DE ADULTO:
se aíslan de médula ósea, hígado, cerebro,
músculo y cordón umbilical.