ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T GEN KIR3DL2 …repository.unair.ac.id/32142/1/ABSTRAK.pdf ·...
Transcript of ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T GEN KIR3DL2 …repository.unair.ac.id/32142/1/ABSTRAK.pdf ·...
DISERTASI
ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T GEN KIR3DL2
PADA PREEKLAMPSIA DAN KEHAMILAN NORMAL DI RSUP dr. MOHAMMAD HOESIN PALEMBANG
FERRY YUSRIZAL
PROGRAM STUDI S3 ILMU KEDOKTERAN
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA 2012
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
DISERTASI
ANALISIS POLIMORFISME
A52G DAN C32T GEN KIR3DL2 PADA PREEKLAMPSIA DAN KEHAMILAN NORMAL
DI RSUP dr. MOHAMMAD HOESIN PALEMBANG
FERRY YUSRIZAL
PROGRAM STUDI S3 ILMU KEDOKTERAN FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA 201
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
ANALISIS POLIMORFISME
A52G DAN C32T GEN KIR3DL2 PADA PREEKLAMPSIA DAN KEHAMILAN NORMAL
DI RSUP dr. MOHAMMAD HOESIN PALEMBANG
FERRY YUSRIZAL
PROGRAM STUDI S3 ILMU KEDOKTERAN FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA 2012
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T GEN KIR3DL2
PADA PREEKLAMPSIA DAN KEHAMILAN NORMAL DI RSUP dr. MOHAMMAD HOESIN PALEMBANG
DISERTASI
Untuk Memperoleh Gelar Doktor dalam Program Studi S3 Ilmu Kedokteran
pada Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga dan Dipertahankan Di hadapan Panitia Ujian Doktor Tahap II (Terbuka)
Pada Hari : Senin Tanggal : 11 Juni 2012
Pukul : 10.00 – 12.00 WIB
OLEH
FERRY YUSRIZAL NIM. 090515739/D
PROGRAM STUDI S3 ILMU KEDOKTERAN FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA 2012
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
LEMBAR PENGESAHAN
DISERTASI INI TELAH DISETUJUI
PADA TANGGAL 29 JUNI 2012
Oleh
Promotor
Prof. Dr. H. Agus Abadi, dr, SpOG (K) NIP. 19470512197402 1.001
Ko Promotor I Ko Promotor II
Prof. Retno Handajani, dr, MS, PhD Prof. Dr. Erry Gumilar, dr, SpOG(K) NIP. 19481012197603 2.001 NIP. 19460813197801 1 001
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Disertasi Ini Telah Diuji pada Ujian Tahap I (Tertutup) pada Tanggal 21 Mei 2012 PANITIA PENGUJI DISERTASI Ketua : Prof. Dr. Endang Joewarini, dr., Sp.PA (K) Anggota : 1. Prof. Dr. H. Agus Abadi, dr., Sp.OG(K)
2. Prof. Retno Handajani, dr., MS., Ph.D
3. Prof. Dr. Erry Gumilar, dr., Sp.OG(K)
4. Prof. H. Kuntoro, dr., MPH.,DrPH
5. Dr. F.M. Judajana, dr., Sp.PK(K)
6. Dr. I Ketut Sudiana, MS
7. Prof. Dr. Firman F. Wirakusumah, dr., Sp.OG(K)
Ditetapkan dengan Surat Keputusan Rektor Universitas Airlangga
Nomor : 7275/H3/KR/2012 Tanggal : 29 Mei 2012
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
UCAPAN TERIMA KASIH
Segala puji dan rasa syukur hamba panjatkan kehadapan Allah SWT,
yang maha pengasih , maha penyayang dan maha menguasai ilmu pengetahuan,
yang telah memberikan kesehatan, taufik dan hidayahnya sehingga dapat
mengikuti pendidikan Doktor di Universitas Airlangga Surabaya. Pada
kesempatan yang baik ini, dengan segala kerendahan dan keikhlasan hati penulis
mengucapkan terima kasih yang tidak terhingga serta penghargaan yang setinggi-
tingginya kepada :
Prof. Dr. H. Agus Abadi, dr., SpOG(K), sebagai promotor yang selalu
memberikan perhatian, pengertian dan semangat serta bimbingan dan saran
berharga selama saya menjalankan pendidikan. Beliau sejak awal pendidikan
telah membimbing sebagai pembimbing akademik dan selanjutnya sebagai
Promotor disertasi ini, bersedia meluangkan waktu untuk konsultasi, sehingga
wawasan bertambah dan dapat menyelesaikan pendidikan ini.
Prof. Retno Handajani, dr., MS, Ph.D, sebagai Ko-Promotor I, yang selalu
meluangkan waktu dan di tengah kesibukannya dengan ikhlas dan sabar
memberikan bimbingan dan saran, mengupayakan pemeriksaan berlangsung baik,
berkenan membaca dan memperbaiki tulisan kata demi kata, serta dorongan untuk
mengatur waktu yang ada dalam menyelesaikan pendidikan ini.
Prof. Dr. Erry Gumilar D, dr, SpOG(K), sebagai Ko promotor II yang
telah memberikan koreksi, pemahaman dan wawasan materi disertasi, serta saran
untuk perbaikan disertasi menjadi lebih baik dan terus konsisten untuk
mengembangkan ilmu pengetahuan nantinya.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Dr. F.M. Judajana, dr, SpPK(K), atas bimbingan, saran, semangat dan
koreksi agar disertasi dan presentasi menjadi lebih baik.
Rektor Universitas Airlangga Prof. Dr. H. Fasichul Lisan, Apt., dan
mantan Rektor Universitas Airlangga Prof. Dr. Med. Puruhito, dr., SpB-TKV(K),
atas perkenan mengikuti pendidikan pada Program Pascasarjana Universitas
Airlangga Surabaya.
Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga, Prof. Dr. Agung
Pranoto, dr., MKes., Sp.PD(K.EMD), FINASIM dan Wakil Dekan I Fakultas
Kedokteran Universitas Airlangga, Prof. Dr. Indri Safitri Mukono, dr., MS.
Ketua Program Studi S3 Ilmu Kedokteran Program Pascasarjana
Universitas Airlangga, Prof. Dr. Teddy Ontoseno, dr., SpA(K), SpJP, AKK serta
mantan Ketua Program Studi Ilmu Kedokteran Program Pascasarjana Universitas
Airlangga, Prof. Dr. Harjanto J.M., dr., A.I.F.M. dan Prof. Dr. Mandojo Rukmo,
drg., M.Sc., SpKG atas informasi, arahan serta kemudahan dalam menyelesaikan
administrasi pendidikan saya di Program Pascasarjana Universitas Airlangga.
Kepada semua staf tata usaha Program Pascasarjana Universitas Airlangga
diucapkan terimakasih atas bantuan dan kemudahan yang telah diberikan dalam
penyelesaian urusan administrasi dalam menjalani pendidikan selama ini.
Direktur Program Pascasarjana Universitas Airlangga Prof. Dr. Hj. Sri
Hajati, S.H., M.S., Wakil Direktur Bidang Akademik Prof. Dr. Suhariningsih, Ir.,
dan mantan Wakil Direktur Bidang Akademik Prof. Dr. Eddy Rahardjo, dr,
SpAn, KIC, Wakil Direktur Bidang Administrasi Umum, Dr. I. Made Narsa, SE,
MSi, Ak, mantan Direktur dan Wakil Direktur Program Pascasarjana Universitas
Airlangga Prof. Dr. Muhammad Amin, dr., SpP(K), Prof. Dr. Laba Mahaputra,
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
drh., MSc., dan Dr. Sunarjo, dr., MS., M.Sc., beserta seluruh staf pimpinan
Program Pascasarjana atas kesempatan yang diberikan kepada saya menjadi
mahasiswa Program Pascasarjana Universitas Airlangga.
Direktur RSUD dr. Soetomo Surabaya dr. Dodo Anondo, MPH dan
mantan Direktur RSUD dr. Soetomo Surabaya Dr. H. Slamet R. Yuwono, dr.,
DTMH, MARS, seluruh Staf / konsulen di Bagian / Departemen Obstetri dan
Ginekologi FK.UNAIR/ RSUD dr. Soetomo serta staf Bagian administrasi yang
telah memberikan bantuan, perhatian, keramahan, kemudahan dan penerimaan
saat konsultasi serta perkenannya penggunaan fasilitas yang ada.
Rektor Universitas Sriwijaya Prof. Badiah Patizade, S.E., MBA., Ph.D.,
mantan Rektor Universitas Sriwijaya Prof. Dr. Zainal Ridho Djafar, Ir., Dekan
Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya Dr. M. Zulkarnain., dr., M.MedSc.,
mantan Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya Prof. Zarkasih Anwar.,
dr., SpA(K), beserta jajaran Pembantu Dekan atas izin dan bantuan yang diberikan
sehingga saya dapat mengikuti pendidikan Program Studi S3 Ilmu Kedokteran
Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga.
Direktur Utama RS. dr. Mohammad Hoesin Palembang, Yanuar Hamid,
dr., SpPD, MARS, mantan Direktur Utama RS. Dr. Mohammad Hoesin
Palembang H.M. Bayu Wahyudi, dr., MPHM., SpOG, beserta jajaran direksi,
yang telah memberikan izin untuk mengikuti pendidikan Program Studi S3 Ilmu
Kedokteran pada Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga ini.
Ketua Bagian/Departemen Obstetri dan Ginekologi Fakltas Kedokteran
Universitas Sriwtjaya / RSUP dr. Mohammad Hoesin Palembang, H. Azhari, dr,
SpOG(K) dan Ketua Subdivisi Obstetri dan Ginekologi Sosial, Prof. Syakroni
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Daud Rusydi, dr, SpOG(K) atas izin dan kemudahan yang diberikan. Para
sejawat Konsulen dan segenap residen PPDS I Obstetri dan Ginekologi yang
sedang menjalani pendidikannya, serta semua paramedis dan staf administrasi
atas perhatian dan bantuannya.
Bupati Kabupaten Musi Rawas Sumatera Selatan, H. Ridwan Mukti, SE,
MM, yang telah memberikan izin sebelumnya untuk mengikuti pendidikan
Pascasarjana di Universitas Airlangga Surabaya, Direktur RSUD dr. Sobirin Musi
Rawas, Miftah Hulummi, drg., MARS beserta staf atas bantuan dan kemudahan
yang diberikan selama ini.
Para Dosen, pengajar Program Pascasarjana Universitas Airlangga, Prof.
Soetjipto, dr., M.S., Ph.D, Prof. Dr. H. Agus Abadi, dr., SpOG(K), Prof. Retno
Handajani, dr., M.S, Ph.D., Prof. Dr. Fedik A. Rantam, drh., Prof. Dr. Purnomo
Suryohudoyo, dr., Sp.BK, Dr. Yuwono Suroso, dr., SpPD-KR, Prof. H. Kuntoro,
dr., MPH, DrPH, Dr. Sunarjo, dr., M.S., M.Sc., Prof. Dr. Lasiyo, MA., MM., Dr.
Florentina Sustini, dr., M.S., Prof. Dr. Juliati Hood A., dr., MS., SpPA(K),
F.I.A.C., Dr. F. M. Judajana, dr., SpPK (K.Im), Prof. Dr. Indro Handojo, dr.,
SpPK(K) (Alm), Siti Pariani, dr., M.S., M.Sc., Ph.D, Dr. I Ketut Sudiana, MS.,
Prof. Dr. H. Muhammad Zainudin, Apt., terimakasih atas pendidikan yang
diberikan sehingga pengetahuan dan keterampilan bertambah serta bersikap lebih
baik dalam menempuh pendidikan pada Program Pascasarjana Universitas
Airlangga.
Dosen penguji usulan penelitian disertasi Prof. Dr. H.Agus Abadi, dr,
SpOG (K)., Prof. Retno Handajani, dr, MS, PhD., Prof. Dr. Erry Gumilar, dr,
SpOG (K)., Prof Dr. Sumarno, dr, SpMK., Prof. Kuntoro, dr, MPH, Dr.PH.,
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Prof.Dr. Endang Joewarini, dr, SpPA (K)., Dr. I. Ketut Sudiana, drs, M.S., Dr.
F.M.. Judayana, dr, SpPK(K) atas segala koreksi dan masukan berharga sehingga
isi, bahasa dan sistematika penulisan disertasi menjadi lebih baik .
Ketua Lembaga Penyakit Tropis (LPT) Universitas Airlangga Prof. Dr.
Nasronudin, dr., SpPD, K-PTI, atas izin yang diberikan dalam menggunakan
fasilitas LPT untuk pemeriksaan laboratorium penelitian saya. Disampaikan
terimakasih juga kepada Ibu Koen Pudjiati dan Mas Amin yang telah berbaik hati
meluangkan waktu, membantu dan memberikan informasi sepenuh hati dalam
pemeriksaan laboratorium sehingga dapat terlaksana dengan baik,
Terimakasih kepada Dr. H. Rizani Amran, dr, SpOG(K), yang telah
banyak memberikan informasi dan semangat dan Prof. Dr. R,M. Suryadi
Tjekyan, dr, DTM&H, MPH selaku Kordinator Program Doktor Fakultas
Kedokteran Universitas Sriwijaya Palembang beserta staf Sdri Marlia Barubara
dan Sdr. Sri Mulyani atas informasi dan kemudahan yang diberikan.
Kepada teman-teman seangkatan mahasiswa Program Pascasarjana
Universitas Airlangga yang berasal dari Palembang, Dr. Anang Tribowo, dr.,
SpM., Dr. M. Zulkarnain, dr., M.Med.Sc., Dr. Rosiana A. Marbun, dr., SpA, Dr.
Yulia Farida Yahya, dr., SpKK., Dr. Tantawi Djauhari, dr., SpKK., Nirawan
Putranto, dr., SpM., Dr. Yulia Iriani, dr, SpA., Makson Parulian Purba., dr.,
MARS., Dr. Libriansyah, dr., SpPD, Dr. Amang Surya Priyanto, dr., SpOG, serta
Dr. H. K. Yusuf Effendi, dr., SpOG(K).
Semua pasien telah bersedia mengikuti penelitian ini, semoga amal
baiknya mendapat balasan dari Allah SWT.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Sembah sujud dan kasih yang tak terhingga disampaikan kepada kedua
orang tua, Ayahanda Muhammad Alihanafiah Saleh, Drs (alm) dan Ibunda
Halimah Yusuf, yang telah melahirkan, mengasuh, membesarkan dan mendidik
serta selalu mendoakan serta mertua, ayahanda H. Hamidin Nadjib (Alm) dan
Ibunda Nursyamsiah (Alm) atas segala dukungan dan doanya. Demikian juga
kepada saudara-saudaraku terkasih, terima kasih atas doa dan dukungannya.
Isteriku tercinta Rita Komala Dewi, SPd, SKep, MARS, beserta anak-
anak Fella, dr., Indah, S.Ked., Ayik, Eki dan Marsya yang selalu memberikan
semangat, mendoakan serta pengertiannya atas waktu kebersamaannya
terganggu karena saya harus mencurahkan perhatian kepada pendidikan ini.
Kepada semua pihak dan para sejawat yang tidak dapat disebutkan
namanya satu persatu yang telah memberikan dorongan selama menempuh
pendidikan Doktor ini. Untuk itu saya ucapkan terima kasih. Semoga Allah SWT
selalu memberikan rahmat, hidayah serta ridho-Nya kepada kita semua.
Amiin.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
RINGKASAN
Analisis polimorfisme A52G dan C32T gen Killer cell immunoglobuline-like
receptor 3 domains, long cytoplasmic tail, 2 (KIR3DL2)
pada Preeklampsia dan Kehamilan normal
di RSUP dr. Mohammad Hoesin Palembang
Preeklampsia merupakan komplikasi serius pada ibu dalam masa
kehamilan, persalinan dan nifas dan merupakan penyebab utama kematian
maternal. Adanya kemajuan dalam bidang kedokteran yang dicapai saat ini
tidaklah menurunkan kematian maternal karena preeklampsia. Keadaan ini
berhubungan dengan etiologi pasti preeklampsia sendiri yang hingga saat ini
belum jelas, sehingga penanganan yang tuntas dengan menghilangkan faktor
penyebab belum dapat dilakukan. Preeklampsia sering disebut sebagai disease of
theories. Diagnosis preeklampsia ditegakkan bila didapatkan adanya peningkatan
tekanan darah ≥ 140 mmHg disertai proteinuria pada usia kehamilan lebih dari 20
minggu.
Komplikasi klinis serius yang terjadi pada preeklampsia diakibatkan
karena penderita datang ke tempat pelayanan kesehatan atau rumah sakit pada
saat penyakitnya sudah dalam kondisi preeklampsia berat atau eklampsia
sehingga morbiditas dan mortalitas yang terjadi tetap tinggi. Deteksi dini dan
penanganan preeklampsia sejak awal merupakan kunci keberhasilan ke depan
dalam penanganan preeklampsia, karenanya penelitian guna mengungkap
etiopatofisiologi preeklampsia perlu terus dilakukan.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Faktor genetik berperan penting terhadap kejadian preeklampsia
disamping hubungannya dengan faktor imnunologi. Fetus yang bersifat
semialograf dimana separuh unsur genetiknya berasal dari paternal merupakan
jaringan asing bagi ibu dan ini berakibat timbulnya respon imun. Interaksi yang
serasi antara killer immunoglobulin-like receptror (KIR) sel Natural killer
(NK) desidua uterus yang merupakan innate immunity dengan molekul fetal
Human leukocyte antigen (HLA)-C yang diekspresikan oleh sel trofoblas
memungkinkan kehamilan berlangsung normal, sebaliknya kehamilan akan
terganggu atau terjadi abortus spontan bila interaksi KIR dan HLA-C tersebut
tidak efektif.
Molekul KIR dikode oleh gen KIR. Terdapat 15 famili gen KIR
diantaranya adalah KIR3DL2 yang terletak pada regio sekitar 150 kb dari
leukocyte receptor complex (LRC) pada kromosom 19q13.4. Reseptor sel NK
KIR3DL2 merupakan molekul 70 kD dengan 3 domain extracellular
immunoglobulin-like dan long intracellular tail dengan dua immunoreceptor-
tyrosinebased inhibitory motifs. Reseptor dengan long cytoplasmic domains
berfungsi inhibitory, sedangkan KIR dengan short cytoplasmic berfungsi sebagai
activating receptors.
Sel NK memiliki reseptor inhibitor dan aktivator pada permukaannya, bila
HLA/MHC- klas I dikenal oleh reseptor inhibitor, maka sel target akan diproteksi
dari serangan sel NK. Self tolerance diperlukan sel NK dalam perkembangan
kehamilan. Dengan kata lain, bila sel target kehilangan antigen MHC klas I yang
dikenali atau sel target mengekspresi banyak ligand stimulator pada
permukaannya dimana signal aktivasi mengatasi signal inhibitor, keadaan ini akan
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
menyebabkan terjadinya penolakan, rejection toleransi imun. Intoleransi imun
berdampak pada invasi trofoblas yang tidak adekuat terhadap arteri spiralis
maternal dan selanjutnya mengakibatkan terjadinya insufisiensi aliran darah
uteroplasenta dan defek pada plasenta.
Adanya polimofisme pada gen KIR, dimana terjadi perubahan genetik
urutan nukleotida gen penyandi reseptor tersebut berdampak perubahan ekspresi
gen tersebut sehingga menyebabkan terganggunya fungsi reseptor, khususnya
dalam peran mempertahankan kehamilan normal. Pada penelitian sebelumnya
didapatkan polimorfisme sekuens KIR3DL2 terutama terjadi pada exon 3 dan
exon 4 dan sedikit pada exon 9. Polimorfisme A52G exon 3 gen KIR3DL2 dan
C32T exon 9 gen KIR3DL2 menyebabkan penurunan ekspresi gen KIR3DL2.
Ekspresi gen KIR3DL2 menurun menyebabkan gangguan aktifitas dan interaksi
reseptor inhibitor dengan ligand sel target yang berfungsi protective terhadap
serangan sel NK maternal. Penelitian ini menganalisis polimorfisme yang terjadi
pada gen penyandi KIR, khususnya gen KIR3DL2 terhadap kejadian
preeklampsia.
Subyek penelitian yang dianalisis sesuai jumlah yang diperlukan dengan
perhitungan jumlah sampel sebanyak 63 subyek untuk pemeriksaan polimorfisme
pada A52G exon 3 gen KIR3DL2 dan C32T exon 9 gen KIR3DL2 masing-masing
33 subyek kelompok preeklampsia (PE) dan 30 subyek kelompok kehamilan
normal (KN). Karakteristik umum yang berpengaruh terhadap kejadian
preeklampsia meliputi umur, usia gestasi, gravida dan indeks massa tubuh (IMT)
pada kelompok preeklampsia (PE) dan kehamilan normal (KN).
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Pada karakteristik umur distribusi terbanyak pada umur 21-24 tahun,
dimana terdapat 21 subyek (63,6%) pada kelompok PE dan 14 subyek (46,7%)
pada kelompok KN. Untuk karakteristik usia gestasi, distribusi terbanyak pada
usia gestasi > 34 minggu pada kedua kelompok, dimana 28 subyek (84,9%) pada
kelompok PE dan 25 subyek (83,3%) pada kelompok KN. Distribusi karakteristik
jumlah kehamilan yang pernah terjadi (gravida), terbanyak pada gravida 2- 4
pada kedua kelompok, yaitu 15 subyek (45,5%) pada kelompok PE dan 17 subyek
(56,7%) pada kelmpok KN, sedangkan untuk IMT, distribusi terbanyak pada IMT
≤ 29 pada kedua kelompok, dimana 24 subyek (72,7%) pada PE dan 26 subyek
(86,7%) pada KN. Dari semua karakteristik umur, usia gestasi, gravida dan IMT
pada kedua kelompok subyek PE dan KN secara statistik tidak bermakna (p
>0,01).
Amplifikasi setelah ekstraksi dilakukan dengan menggunakan primer
untuk A52G exon 3 dan C32T exon 9 gen KIR3DL2 kemudian dilakukan
elektroforesis dengan agarosa 2% dan pewarnaan ethidium bromide untuk
divisualisasi dengan kamera digital. Hasil PCR yang positif dilanjutkan dengan
sequencing DNA dan multiple sequence alignment untuk memastikan adanya
perubahan nukleotida pada kedua kelompok subyek PE dan KN.
Hasil sequencing subyek kelompok PE dan KN untuk pemeriksaan
polimorfisme A52G exon 3 gen KIR3DL2 didapatkan perbedaan distribusi
frekuensi genotipe AA, AG dan GG pada kelompok PE dan KN dimana
didapatkan frekuensi genotipe AA dari A52G exon 3 gen KIR3DL2 lebih rendah
secara proporsional pada kelompok PE (3,0%) dibandingkan KN (6,7%) serta
genotipe GG pada kelompok PE secara proporsional lebih tinggi (87,9%)
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
dibandingkan kelompok KN (76,6%). Perbedaan frekuensi genotip AA dan
genotipe GG pada kedua kelompok PE dan KN secara statistik tidak bermakna (p
= 0,058).
Pada pemeriksaan C32T exon 9 gen KIR3DL2, hasil sequencing pada
semua (100%) subyek kelompok PE dan KN tidak ditemukan polimorfisme
dimana tidak ditemukan perubahan urutan nukleotida ke 32 dari C menjadi T
( kodon ACG menjadi ATG ), tetapi dari penelitian ini didapatkan polimorfisme
lain pada hasil amplifikasi exon 9 gen KIR3DL2 setelah urutan nukleotida ke 32
exon 9. Polimorfisme C32T exon 9 gen KIR3DL2 tersebut terjadi pada kedua
kelompok PE dan KN yang diteliti, yaitu pertama : Polimorfisme yang
menyebabkan perubahan asam amino yang dikode yaitu : Polimorfisme
nukleotida urutan ke 62, 77, 79, 107, 119, 125, 157 dan 173. Pada polimorfisme
nukleotida ke 125 (A125G), secara statistik perbedaan antara kelompok PE dan
KN bermakna. Kedua : Polimorfisme yang tidak menyebabkan perubahan asam
amino yang dikode, yaitu polimorfisme nukleotida urutan ke 33, 106, 126 dan
174. Pada kelompok ini, polimorfisme nukleotida ke 126 dan ke 174 pada kedua
kelompok PE dan KN secara statistik bermakna.
Kesimpulan hasil penelitian adalah
1. Polimorfisme A52G exon 3 gen KIR3DL2.
Frekuensi genotipe GG dan alel G A52G exon 3 gen KIR3DL2 pada
kelompok preeklampsia secara proporsional lebih tinggi dibandingkan dengan
kelompok kehamilan normal, sedangkan frekuensi genotipe AA (wild type)
dan alel A pada kelompok preeklampsia proporsinya lebih rendah
dibandingkan kelompok kehamilan normal. Perbedaan masing-masing
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
frekuensi genotipe dan alel pada kedua kelompok preeklampsia dan kehamilan
normal ini secara statistik tidak bermakna.
Dapat disimpulkan bahwa polimorfisme A52G exon 3 gen KIR3DL2 bukan
merupakan predisposing gene terhadap kejadian preeklampsia pada penderita
preeklampsia di RSUP dr. Mohammad Hoesin Palembang.
2. Polimorfisme C32T exon 9 gen KIR3DL2.
Tidak ditemukan polimorfisme C32T exon 9 gen KIR3DL2 pada kedua
kelompok preeklampsia dan kehamilan normal pada semua subyek (100%)
yang diteliti, pada genotipe maupun alel nukleotida urutan ke 32. Dapat
dikemukakan pula bahwa polimorfisme C32T exon 9 gen KIR3DL2 juga
bukan merupakan predisposing gene untuk penderita preeklampsia di RSUP
dr. Mohammad Hoesin Palembang.
3. Tidak dapat ditentukan hubungan polimorfisme A52G exon 3 gen
KIR3DL2 dan polimorfisme C32T exon 9 gen KIR3DL2 terhadap
kejadian preeklampsia di RSUP dr, Mohammad Hoesin Palembang,
kedua polimorfisme yang diteliti bukan merupakan predisposing gene
terjadinya preeklampsia.
Ditemukan polimorfisme lain pada exon 9 gen KIR3DL2, setelah
nukleotida urutan ke 32. Polimorfisme lain tersebut adalah :
a. Polimorfisme yang menyebabkan perubahan asam a mino yang dikode
yaitu : Polimorfisme nukleotida urutan ke 62, 77, 79, 107, 119, 125, 157
dan 173.
b. Polimorfisme yang tidak menyebabkan perubahan asam amino yang
dikode, yaitu polimorfisme nukleotida urutan ke 33, 106, 126 dan 174.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Diperlukan eksplorasi lebih lanjut untuk mengetahui peran polimorfime yang
ditemukan selain polimorfime nukleotida ke 32 exon 9 atau exon lain gen
KIR3DL2 tersebut, khususnya untuk populasi di Palembang dan di Indonesia
umumnya yang kemungkinan khas dengan area geografi atau ras di Indonesia
terhadap kejadian preeklampsia.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
SUMMARY
The polymorphism analysis of A52G and C32T KIR3DL2 genes in patients with
Preeclampsia and Normal pregnancy
in dr. Mohammad Hoesin General Hospital Palembang.
Preeclampsia (PE) is a serious complication to mother during pregnancy,
childbirth and postpartum and, is major cause of maternal death. The progress
achieved in the field of medicine today is not lowering maternal death due to
preeclampsia. This situation is associated with preeclampsia etiopathology which
is yet not so clear, so the complete management by removing the causative factor
can not be done. Preeclampsia is often referred as a disease of theories. Diagnosis
of preeclampsia is obtained by an increase in blood pressure accompanied by
proteinuria at more than 20 weeks age of gestation.
Serious clinical complications happens due to patients arrival to health
centers or hospitals on condition of severe preeclampsia or eclampsia, this is the
cause of morbidity and mortality remains high. Early detection and early
treatment of preeclampsia is the key to future success in the treatment of
preeclampsia, furthermore researches to uncover etiopathology of preeclampsia
needs to be done continuously.
Genetic factors play an important role on the incidence of preeclampsia in
addition to its relationship with imnunology factor. Fetus that is semiallograft
which is half of the paternal genetic material is a foreign tissue for mother and this
led to the emergence of an immune response. Harmonious interaction between
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
killer immunoglobulin-like receptror (KIR) natural killer cells (NK) of uterine
decidua is an innate immunity with fetal molecules of human leukocyte antigen
(HLA)-C expressed by trophoblast cells allows normal pregnancy, otherwise
pregnancy will impaired or become spontaneous abortion if the interaction of KIR
and HLA-C is not effective. There are 15 KIR gene families, among them is
KIR3DL2 which is located on approximately 150 kb region of the leukocyte
receptor complex (LRC) on chromosome 19q13.4. KIR3DL2 NK cell receptor is
a 70 kD molecule with three extracellular Ig-like domain and long intracellular
tail with two immunoreceptor-tyrosinebased inhibitory motifs. Receptors with
long cytoplasmic domains have inhibitory function, whereas KIR with short
cytoplasmic function as activating receptors. Polymorphism on KIR gene
presence, in which the nucleotide sequence of genetic changes in genes encoding
these receptors causes changes in gene expression so that their activities are
disrupted, particularly in the role of maintaining normal pregnancy. In a previous
study found KIR3DL2 sequence polymorphism primarily occurs in exon 3 and
exon 4 and a bit on exon 9.
Polymorphism of A52G exon 3 KIR3DL2 gene and C32T exon 9
KIR3DL2 gene causes a decrease in gene expression of KIR3DL2. KIR3DL2
gene expression decreased led to disturbance of inhibitory receptor function to
protect against maternal NK cell attack. NK cells have inhibitory receptors and
activating receptors on the surface, when the HLA / MHC class-I recognized by
inhibitory receptors then the target cells will be protected from NK cell attack. On
the other hand, when target cells lose their MHC-class I antigens or express many
stimulatory ligands on their surface, activation signals overcome the inhibitory
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
signal resulting in rejection. Self tolerance of NK cells is required in the
development of pregnancy. The immune intolerance will impact inadequate
trophoblast invasion of maternal spiral arteries and subsequently result in
insufficient uteroplacental blood flow and will defects in the placenta.
Subjects were analyzed according to the amount were 63 subjects for the
examination of gene A52G and C32T polymorphism in KIR3DL2 which 33
subjects of each group of PE and normal pregnancy (NP) groups of 30 subjects.
Investigated the characteristics of the subjects that correlate with the incidence of
preeclampsia include age, gestational age, gravid and BMI in the group of PE and
NP.
On the characteristics of the age distribution of the highest at age 21-24
years, inwhich there were 21 subjects (63.6%) in the PE group and 14 subjects
(46.7%) in the NP. To the characteristics of gestational age, gestational age
distribution of the largest in > 34 weeks in both groups, in which 28 subjects
(84.9%) in the PE group and 25 subjects (83.3%)\ in the NP. Distribution
characteristics of the number of pregnancies that have occurred (gravid), most at
gravid 2-4 in both groups, the 15 subjects (45.5%) in the PE group and 17 subjects
(56.7%) in NP group, while body mass index, the largest distribution in the BMI ≤
29 in both groups, in which 24 subjects (72.7%) in PE and 26 subjects (86.7%) in
the NP. Of all the characteristics of age, gestational age, gravid and BMI in both
PE and NP groups of subjects were not statistically significant (p> 0.01).
Amplification performed using primers for the A52G gene KIR3DL2 and
KIR3DL2 gene C32T then made 2% agarose electrophoresis with ethidium
bromide for staining and visualized with a digital camera. Positive results of PCR
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
would be followed by DNA sequencing and multiple sequence alignment to
ensure the existence of nucleotide changes in both the PE and NP subjects.
Sequencing results of exon 3 polymorphism A52G KIR3DL2 gene found
that the prevalence of AA genotype frequencies of KIR3DL2 gene A52G exon 3
was lower in the PE group (3,0%) compared to NP (6,7%) and GG genotype in
PE group proportionately higher (87,9%) than the NP group (76,6%). The
frequency of these genotype AA and genotype GG between two groups PE and
NP was not statistically different.
On examination of KIR3DL2 gene C32T exon 9, the results of sequencing
in all (100%) subjects the PE and NP are not found the polymorphism. There are
no changes in nucleotide sequence to 32 from C to T (codon ACG to ATG), but
there are others on C32T gene polymorphism KIR3DL2 in both groups of subjects
studied after the 32 nucleotides sequence.
The conclusions of the research results are:
1. The polymorphisms of A52G exon 3 KIR3DL2 genes.
Frequency of polymorphisms : the GG genotype and G alleles A52G exon 3
KIR3DL2 gene was the proportionally higher in pre-eclamptic group
compared with normal pregnancy group and the frequency of AA genotype
(wild type) and A alleles in the preeclamptic group was lower than normal
pregnancy group, but the difference genotypes and alleles between two groups
PE and NP were not statistically significant.
It is concluded that the exon 3 polymorphism A52G KIR3DL2 gene is not a
predisposing gene against the occurrence of preeclampsia in preeclamptic
patients in Mohammad Hoesin General Hospital Palembang.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
2. The polymorphisms of C32T exon 9 KIR3DL2 genes.
No polymorphisms was found in C32T exon 9 KIR3DL2 genes in pre-
eclamptic and normal pregnancy group in all subjects (100%), but there are
others polymorphisms after nucleotide sequence 32 in all subjects studied. The
conclusion of this study shows that the C32T exon 9 KIR3DL2 genes
polymorphism is not predisposing gene for the occurrence of preeclampsia in
preeclamptic patients in Mohammad Hoesin General Hospital Palembang.
3. It could not be evaluated the polymorphism correlation between A52G exon 3
and C32T exon 9 KIR3DL2 genes. The mutation of these two sites was not
the predisposing gene for the occurance of preeclampsia in preeclamptic
patients in dr. Mohammad Hoesin Hospital Palembang.
The polymorphisms after nucleotide sequence 32 in all subjects studied
were :
a. The polymorphisms of exon 9 KIR3DL2 gene that change the amino
acids to be coded, such as : nucleotide sequence in 62, 77, 79, 107, 125,
157 and 173.
b. The polymorphisms exon 9 KIR3DL2 gene that do not change the amino
acids to be coded, such as : nucleotide sequence in 33, 106, 126 and 174.
The further exploration of these other polymorphisms after nucleotide
sequence 32 exon 9 or other exon KIR3DL2 are needed to gain more
information and specific genetic mutation, especially in Palembang or
Indonesian population.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
ABSTRACT
The polymorphism analysis of A52G and C32T Killer cell immunoglobuline-like
receptor 3 domains, long cytoplasmic tail, 2 (KIR3DL2) genes in patients with
Preeclampsia and Normal pregnancy
in dr. Mohammad Hoesin General Hospital Palembang.
Background : Preeclampsia is usually called as a disease of theories where the
real etiology still unclear. Preeclampsia is a medical complication of pregnancy
which is characterized by hypertension and proteinuria after 20 week pregnancy.
Polymorphism of the KIR genes might be associated with the genetic
predisposition of preeclampsia. It is found that the KIR3DL2 gene expression was
obviously decreased in preeclampsia and assumed that decreased KIR3DL2 gene
expression weakened the protection of trophoblasts from being attacked by
maternal immunological cell. It causes insufficient utero-placental blood flow and
the defective placentation.
Objectives : To analyze the polymorphisms of A52G exon 3 and C32T exon 9
Killer cell immunoglobuline-like receptor 3 domains, long cytoplasmic tail, 2
(KIR3DL2) gene in preeclampsia and normal pregnancy in Mohammad Hoesin
General Hospital Palembang.
Methods : The research used cross sectional study design. There are 63
pregnant women were enrolled. The samples were divided into two groups. The
33 subjecs with preeclampsia and 30 subjects normal pregnancy where their
A52G in exon 3 and C32T in exon 9 polymorphism of the KIR3DL2 gene were
determined by polymerase chain reaction (PCR) from venous blood samples and
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
the positive result of PCR would be continued to sequencing and multiple
sequence alignment.
Results : No significant difference statistically among the characteristics of the
subjects preeclampsia and normal pregnancy, such as age, gestation, parity and
body mass index (p >0,05). The polymorphism of A52G exon 3 KIR3DL2
genes in preeclampsia group are more frequent than the normal pregnancy group
where genotype frequency GG (87,9%) in PE is higher than NP (76,6%) and also
the alleles G proportionately higher in PE (92,4%) than NP (85,0%), but there is
no significant difference statistically between two group PE and NP for genotypes
and alleles frequencies. No polymorphism was found in C32T exon 9
KIR3DL2 genes in all subjects of two groups PE and NP. But, there were
discovered other polymorphisms after the nucleotide 32 exon 9 in all subjecs of
PE and NP. The polymorphisms are in nucleotide sequences 62, 77, 79,1 06/107,
119, 125/126 and 173/174.
Conclution : The A52G exon 3 KIR3DL2 genes polymorphism and the C32T
exon 9 KIR3DL2 genes were not genetic predisposition for the development of
preeclampsia. The mutation of these two sites is not associated with the risk of
preeclampsia in preeclamptic patients in Mohammad Hoesin General Hospital
Palembang. It looked like that polymorphisms in certain area have the genetic
variations in different geographic area or ethnic.
Keyword : preeclampsia, A52G exon 3 and C32T exon 9 KIR3DL2 genes,
polymorphism.
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
DAFTAR ISI
Halaman
Sampul Depan
Sampul Dalam i
Persetujuan iii
Ucapan Terimakasih vi
Ringkasan xii
Summary xix
Abstract xxiv
Daftar Isi xxvi
Daftar Tabel xxxi
Daftar Gambar xxxiii
Daftar Lampiran xxxvi
Daftar Singkatan xxxvii
BAB 1 PENDAHULUAN 1
1.1. Latar Belakang 1
1.2. Rumusan Masalah 7
1.3. Tujuan Penelitian 7
1.3.1. Tujuan Umum 7
1.3.2. Tujuan Khusus 7
1.4. Manfaat Penelitian 8
1.4.1. Manfaat Teoritis 8
1.4.2. Manfaat Terapan 8
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Halaman
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 10
2.1. Awal Kehamilan 10
2.1.1 Implantasi, Plasenta dan Adaptasi Maternal 10
2.1.2. Semialograft dan Imunologi Kehamilan 11
2.2. Preeklampsia 16
2.2.1. Early Onset- Late onset Preeclampsia 16
2.2.2. Gambaran Klinis 19
2.2.3. Klasifikasi 20
2.2.4. Etiologi dan Patofisiologi Preeklampsia 21
2.2.5. Pencegahan Preeklampsia 25
2.2.6. Faktor Risiko 26
2.3. Sel Endotel dan Disfungsi Endotel 27
2.4. Sel NK, KIR dan KIR3DL2 30
2.4.1. Natural Killer Cell (Sel NK) 30
2.4.2. Killer Cell Immunoglobulin-like Receptor (KIR) 32
2.4.3. Killer Immunoglobulin-like receptor 3 domains
long cytoplasmic tail 2 (KIR3DL2) 35 2.4.4. Gen KIR 37
2.4.5. Nomenklatur KIR 40
2.4.6. Struktur Exon-Intron Gen KIR 42
2.4.7. Ligand KIR 44
2.4.8. Ekspresi KIR 46
2.5. Kode Genetik 47
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Halaman
2.6 Kelainan Genetik 49
2.7. Polimorfisme pada Preeklampsia 51
2.8. Ras Deutero Melayu 52
BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS PENELITIAN 53
3.1. Kerangka Konseptual 53
3.2. Hipotesis Penelitian 55
BAB 4 MATERI DAN METODE PENELITIAN 58
4.1 Rancangan Penelitian 58
4.2. Populasi, Sampel, Besar Sampel dan Tehnik Pengambilan
Sampel 58
4.2.1. Populasi Penelitian 58
4.2.2. Sampel Penelitian 58
4.2.3. Besar Sampel 57
4.2.4. Tehnik Pengambilan Sampel 60
4.3. Tempat dan Waktu Penelitian 60
4.4. Variabel Penelitian 60
4.4.1. Klasifikasi Variabel 60
4.5 Definisi Operasional Penelitian 61
4.6. Peralatan dan Bahan Penelitian 64
4.6.1. Peralatan dan Bahan untuk Pengambilan Sampel Darah 64 4.6.2. Peralatan dan Bahan yang Digunakan untuk Ekstraksi DNA 64 4.6.3. Peralatan dan Bahan yang Digunakan untuk Amplifikasi A52G dan C32T gen KIR3DL2 dan PCR 65
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Halaman
4.6.4. Peralatan dan Bahan untuk Elektroforesis 66 4.6.5. Peralatan dan Bahan untuk Purifikasi Produk DNA
untuk Sequencing 67
4.6.6. Peralatan dan Bahan untuk pemeriksaan PCR pro Sequencing 67
4.6.7. Peralatan dan Bahan untuk sequencing DNA 67
4.6.8. Peralatan Analisis Mutasi 68
4.7. Prosedur Pengumpulan Data 68
4.7.1. Operasional Pengambilan Sampel 68
4.7.2. Pemeriksaan Laboratorium 69
4.7.2.1. Darah Vena 69
4.7.2.2. Urine 69
4.7.3. Pemeriksaan PCR dan Squencing 69
4.7.3.1. Ekstraksi DNA 69
4.7.3.2. Pemeriksaan Polimorfisme A52G pada gen KIR3DL2 70
4.7.3.3. Pemeriksaan Polimorfisme C32T pada gen KIR3DL2 71
4.8. Skema Operasional Penelitian 73
4.9. Pengolahan dan Analisis Data 73
4.10. Kelayakan Etik 73
BAB 5 HASIL DAN ANALISIS PENELITIAN 74
5.1. Karakteristik Umum Subjek Penelitian 74
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Halaman
5.2. Hasil PCR exon 3 dan exon 9 gen KIR3DL2 77
5.3. Hasil Sequencing 79
5.4. Hasil Multiple Sequence Alignment 83
BAB 6 PEMBAHASAN 107
6.1. Karakteristik Umum Subyek Penelitian 110
6.2. Elektroforesis hasil PCR dan Sequencing dan Multiple
Sequence Alignment 112
6.3. Temuan Baru 116
6.4. Keterbatasan Penelitian 120
BAB 7 PENUTUP 121
7.1. Kesimpulan 121
7.2. Saran 122
DAFTAR PUSTAKA 124
LAMPIRAN 128
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
DAFTAR TABEL
DAFTAR TABEL
Halaman
BAB 2
Tabel 2.1. Spesifitas ligand KIR. 46
BAB 5
Tabel 5.1. Karakteristik subyek penelitian, kelompok preeklampsia
(PE) dan kehamilan normal (KN). 75
Tabel 5.2. Frekuensi genotipe A52G exon 3 gen KIR 3DL2 hasil sequencing pada kedua kelompok PE dan KN. 91 Tabel 5.3. Frekuensi alel A52G exon 3 gen KIR 3DL2 hasil sequencing pada kedua kelompok PE dan KN. 92 Tabel 5.4. Frekuensi genotipe C32T exon 9 gen KIR 3DL2 hasil sequencing pada kedua kelompok PE dan KN. 93 Tabel 5.5. Frekuensi alel C32T exon 9 gen KIR 3DL2 hasil sequencing pada kedua kelompok PE dan KN. 93 Tabel 5.6. Resume polimorfisme selain C32T exon 9 gen KIR3DL2 pada kelompok PE dan kelompok KN. 95 Tabel 5.7. Frekuensi genotipe dan alel exon 9 gen KIR3DL2 nukleotida ke 106 pada kedua kelompok PE dan KN. 97 Tabel 5.8. Frekuensi genotipe dan alel exon 9 gen KIR3DL2 nukleotida ke 119 pada kedua kelompok PE dan KN. 99 Tabel 5.9. Frekuensi genotipe dan alel exon 9 gen KIR3DL2 nukleotida ke 125 pada kedua kelompok PE dan KN. 101 Tabel 5.10. Frekuensi genotipe dan alel exon 9 gen KIR3DL2 nukleotida ke 126 pada kedua kelompok PE dan KN. 101 Tabel 5.11. Frekuensi genotipe dan alel exon 9 gen KIR3DL2 nukleotida ke 157 pada kedua kelompok PE dan KN. 103 Tabel 5.12 Frekuensi genotipe dan alel exon 9 gen KIR3DL2 nukleotida ke 173 pada kedua kelompok PE dan KN. 105
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Halaman
Tabel 5.13 Frekuensi genotype dan alel exon 9 gen KIR3DL2 nukleotida ke 174 pada kedua kelompok PE dan KN. 105
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
DAFTAR GAMBAR
Halaman
BAB 2
Gambar 2.1. Induksi molekul MHC klas I atau MHC klas II
Ditolerans spesifik atau ditolak. 15
Gambar 2.2. Plasentasi abnormal pada preeklampsia 23
Gambar 2.3. Model interaksi KIR sel NK uterus maternal dengan HLA-C2 fetus 31 Gambar 2.4. Interaksi KIR-HLAC-2. 33
Gambar 2.5. Struktur utama KIR. Tiga subgrup KIR. 36
Gambar 2.6. Regio LRC ( Leukocyte Receptor Complex ) pada kromosom 19q13 39 Gambar 2.7. Human leukocyte receptor complex (LRC) pada regio sepanjang 1 Mb pada kromosom 19q13.4. 40 Gambar 2.8. Struktur domain molekul KIR. 41 Gambar 2.9. Struktur exon - intron gen KIR 43 Gambar 2.10. Reseptor KIR inhibitory pada sel NK, mengenal molekul HLA klas I pada sel target. 44 Gambar 2.11. Ribbon diagrams molekul KIR 45 BAB 3
Gambar 3.1. Kerangka konseptual penelitian 53
BAB 4
Gambar 4.1. Alur penelitian 73
BAB 5
Gambar 5.1. Contoh hasil amplifikasi PCR untuk exon 3 gen KIR3DL2 kelompok PE. 78 Gambar 5.2 Contoh hasil amplifikasi PCR untuk exon 9 gen KIR3DL2 kelompok PE dan KN. 79
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Halaman Gambar 5.3. Contoh elektroferogram yang menunjukkan genotipe GG A52G exon 3 gen KIR3DL2 80 Gambar 5.4. Genotipe AG polimorfisme A52G exon 3 gen KIR3DL2 81
Gambar 5.5. Contoh elektroferogram yang menunjukkan genotipe CC tidak terjadi polimorfisme C32T exon 9 gen KIR3DL2 80 Gambar 5.6. Multiple sequence alignment nukleotida 40-98 exon 3 gen KIR3DL2 kelompok PE untuk melihat polimorfisme A52G 83 Gambar 5.7. Multiple sequence alignment nukleotida ke 99-158 exon 3
gen KIR3DL2 KN. 84 Gambar 5.8. Multiple sequence alignment nukleotida exon 3 gen KIR3DL2
kelompok KN. 85 Gambat 5.9. Multiple sequence alignment nukleotida 28-107 gen KIR3DL2 PE untuk melihat polimorfisme C32T 86 Gambar 5.10. Multiple sequence alignment nukleotida 108-174 exon 9 gen
KIR3DL2 kelompok PE. 88 Gambar 5.11. Multiple sequence alignment nukleotida exon 9 gen KIR3DL2 kelompok KN untuk melihat polimorfisme C32T. 89 Gambar 5.12. Multiple sequence alignment nukleotida exon 9 gen KIR3DL2 kelompok KN untuk melihat polimorfisme C32T. 91 Gambar 5.13. Genotipe TC polimorfisme exon 9 gen KIR3DL2. 97 Gambar 5.14. Genotipe TG polimorfisme exon 9 gen KIR3DL2. 98
Gambar 5.15. Genotipe CT polimorfisme exon 9 gen KIR3DL2. 100 Gambar 5.16. Genotipe TA polimorfisme exon 9 gen KIR3DL2. 102
Gambar 5.17. Genotipe AC polimorfisme exon 9 gen KIR3DL2. 104
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1. Lampiran kelayakan etik 128
1.1 Informed consent 131
1.2 Sertifikat kelayakan etik 133
1.3 Izin penelitian 134
2. Lampiran lembar isian penelitian 135
3. Lampiran materi dan metoda penelitian 136
3.1. Prosedur pengambilan darah vena 136
3.2. Prosedur pemeriksaan PCR dan sequencing 136
3.2.1. Prosedur ekstraksi DNA dari whole blood menggunakan DNAzol 136
3.2.2. Prosedur amplifikasi fragmen DNA dengan mengunakan kit PCR
Master Mix Fermentas Kit 137
3.2.3. Prosedur Pelaksanaan elektroforesis gel agarosa 138
3.2.4. Prosedur purifikasi DNA menggunakan QIAquick Gel Extraction Kit 139
3.3. Prosedur sequence reaction 141
3.3.1. Proses labeling DNA 141
3.3.2. Proses pemurnian hasil PCR pro sequencing 142
3.3.3. Proses sequencing pada mesin ABI Prism 310 142 4. Gambar peralatan yang digunakan dalam PCR dan sequencing 143
5. Lampiran hasil penelitian 146 5.1. Data penelitian 146 5.1.1. Data kelompok kehamilan normal (KN) 146
5.1.2. Data kelompok preeklampsia (PE) 147
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
Halaman
5.2. Data umur, usia gestasi, gravida dan IMT subyek penelitian 145
5.3. Hasil elektroforesis 149 6. Analisis statistik 167
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
DAFTAR SINGKATAN
AJOG : American Journal of Obstetric and Gynecology
APC : Antigen Presenting Cells
ASHP : Australian Society for the Study of Hypertension in Pregnancy
bp : base pairs
BMI : Body Mass Index
CD : Cluster of Differentiation
D : Domain
DNA : Deoxyribo nucleic acid
EDHF : Endothelial-derived Hyperpolarizing Factor
EDRF : Endothelial-derived Relaxing Factor
EDTA : Ethylen Diamine Tetraacetic Acid
EVT : Extravillous trophoblas
FcαR : Fc α receptor for Ig A
HDK : Hipertensi Dalam Kehamilan
HELLP : Hemolysis Elevated Liver Enzyme and Low Platelet Count
HLA : Human Lympocyte Antigen
HPHT : Hari Pertama Haid Terakhir
ILT : Immunoglobulin-like transcript
IL-6 : Interleukin-6
IMT : Indeks Masa Tubuh
ITIM : Immune tyrosine-based inhibitory motif
IUGR : Intra uterine growth restriction
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
kb : kilo basepairs
kD : kilo Dalton
KIR : Killer immunoglobulin-like receptor
KIR3DL2 : Killer immunoglobulin-like receptor 3 domain long tail 2
KN : Kehamilan normal
L : Long cytoplasmic tail
LAIR : Leukocyte-associated Ig-like receptor
LRC : Leukocyte receptor complex
Mb : Mega basepairs
MHC : Major Histocompatibility Complex
NO : Nitric oxide
NK : Natural Killer Cell
PAF : Platelet Activating Factor
PAI-1 : Plasminogen activator inhibitor-1
PCR : Polymerase Chain Reaction
PE : Preeklampsia
PEB : Preeklampsia Berat
PER : Preeklampsia Ringan
PGI2 : Prostasiklin
PI : Pulsatility index
RFLP : Restriction Fragment Length Polymorphism
RNA : Ribonucleic acid
RSMH : Rumah Sakit Mohammad Hoesin
RSUP : Rumah Sakit Umum Pusat
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL
S : Short cytoplasmic tail
SNPs : Single Nucleotide Polymorphisms
TCR : T cell receptor
TNF-α : Tumor necrosis factor-α
TXA : Tromboksan
tPA : tissue plasminogen activator
VCAM-1 : Vascular Cell Adhesion Molecule-1
WHO : World Health Organization
ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga
Disertasi ANALISIS POLIMORFISME A52G DAN C32T ... FERRY YUSRIZAL