เชือไวรัส Sugarcane streak mosaic virus

(SCSMV) สาเหตุโรคใบด่างขดีอ้อยในประเทศไทย

อาการใบด่างขีดสีเหลืองทีพบบนใบ

ออ้ยทีเป็นโรค

SCSMV มีอนุภาคเป็นรูปท่อนยาวคด

(flexuous rod) ขนาด 890 × 15 นาโนเมตร

แอนติบอดีต่อเชือ SCSMV และการตรวจวนิิจฉัย

Purified virions (1 mg/ml)

นาํไวรัสบริสุทธิมาเป็นแอนติเจนฉีดเขา้

กระต่ายเพศเมียพนัธุ์ New Zealand White เพอืผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดี

พฒันาวิธีการตรวจวนิิจฉัยเชือ SCSMV ด้วย

เทคนิค Direct antigen coating ELISA

(DAC-ELISA)

โพลีโคลนอลแอนติบอดีทีผลิตไดมี้ความจาํเพาะต่อเชือ SCSMV และไม่เกิดปฏิกิริยาขา้ม (cross reaction)

กบันาํคนัพืชทีมีเชือไวรัสชนิดอืน 6 ชนิด (SCMV-KR, SCMV-SC, MCMV, MDMV, JGMV และ SCBV)

พฒันาวิธีการตรวจวินิจฉัยเชือ SCSMV แบบรวดเร็ว

ด้วยเทคนิค immunochromatographicstrip (ICS)

การตรวจวนิิจฉัยเชือ SCSMV ด้วยเทคนิค Direct antigen

coating ELISA (DAC-ELISA)

solution name Concentration/dilution

Time Temp.(C) Vol.(µl)

Antigen Leaf extract 1:10 2 h 37 100

Washing buffer PBST, pH7.4 1X 2×3 min Room temp. 100

Blocking reagent Skim milk 3% 1 h 37 100

1st antibody SCSMV antiserum/SCSMV-IgG

1:500/1:400

1 h 37 100

2nd antibody goat anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate

1:10,000 1h 37 100

Substrate 4-Nitrophenyl phosphate

disodium salt hexahydrate 1mg/ml 30 min-1 h 37 100

บดตวัอยา่งใบพืชในบฟัเฟอร์

PBS, pH 7.4 ทีเติม 0.1%

sodiumdiethyldithiocarbamate

ในอตัราส่วน 1:10

DAC-ELISA condition

ผลการตรวจหาเชือ Sugarcane streak mosaic virus (SCSMV) ด้วยการใช้ immunochromatographic strip (ICS)

(ก) นําคันใบอ้อยทีมีเชือ SCSMV (ข) นําคันใบอ้อยเป็นโรคทีเจือจางในอัตราส่วน 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160

และ 1: 320 (ค) นําคันใบอ้อยปกติทีเจือจางเช่นเดียวกับใบอ้อยเป็นโรค

การตรวจวนิิจฉัยเชือ SCSMV แบบรวดเร็วด้วย

เทคนิค Immunochromatographic strip (ICS)

บดใบพืชใน Adgen buffer (10 mM Na2SO3, 0.02% NaN3, 0.14 M NaCl, 1.5 mM KH2PO4, 2% PVP, 0.2% ovalbumin, 0.05% Tween20) ในอตัราสว่น 1:10 ดดูสว่นใสประมาณ 130 ไมโครลิตร ลงบน sample pad อ่านผลของปฏิกิริยาภายในเวลา 5 นาที