5/24/2018 6. Sub Kultur

1/8

Acara VI

Sub Kultur

A. Pendahuluan1. Latar Belakang

Krisan adalah salah satu jenis bunga potong yang cukup familiar

bagi manusia. Tidak hanya di Indonesia tapi juga sudah dikenal di dunia.

Hal itu karena prospek budidaya krisan sebagai bunga potong sangat

cerah, didukung dengan pasar yang sangat potensial, karena tanaman hias

krisan merupakan salah satu tanaman bunga potong yang penting di dunia.

Saat ini krisan termasuk bunga yang paling populer di Indonesia karena

memiliki beberapa keunggulan antara lain warna bunganya cukup beragam

seperti merah tua, kuning, hijau, putih, campuran merah putih dan lainnya,

Bunga krisan juga tahan lama dalam pot selama 10 hari. Selain itu, bunga

krisan juga memiliki jenis yang cukup banyak, sedikitnya ada 55 varietas.

Berkembangnya usaha di bidang pertanian maka kebutuhan bibit

krisan semakin meningkat. Perkembangbiakan bibit melalui in vitro dapat

menghasilkan bibit dalam jumlah banyak dalam waktu yang relative

singkat. Dengan demikian, teknologi kultur jaringan telah terbukti dapat

digunakan sebagai teknologi pilihan yang sangat menjanjikan untuk

pemenuhan kebutuhan bibit tanaman yang akan dieksploitasi secara luas.

Namun, ada faktor tertentu yang harus diantisipasi, yaitu penyimpangan

genetik yang dapat terjadi karena metode in vitro. Untuk itu, perlu

dimengerti mekanisme fisiologi apa yang terjadi, faktor apa saja yang

menyebabkannya sehingga mutasi dapat dihindarkan.

2. Tujuan PraktikumTujuan Praktikum Sub Kultur adalah mengetahui teknik sub kultur

untuk eksplan krisan yang tersedia.

5/24/2018 6. Sub Kultur

2/8

B. Tinjauan PustakaKrisan (Chrysanthemum morifolium R.)merupakan salah satu tanaman

hias penghasil bunga potong yang banyak dibudidayakan di Indonesia. Sentra

produksi krisan utama berada di Pulau Jawa dengan produksi 104,29 juta

tangkai atau 96,70% dari total produksi krisan nasional. Penghasil krisan

terbesar di luar Jawa adalah Sulawesi Utara dengan produksi 2,08 juta tangkai

atau 1,93% dari total produksi krisan nasional (Santoso 2004).

Sub kultur merupakan salah satu tahap dalam perbanyakan tanaman

melalui kultur jaringan. Pada dasarnya sub kultur kita memotong, membelah

dan menanam kembali eksplan yang telah tumbuh sehingga jumlah tanaman

akan bertambah banyak. Sub kultur adalah suatu usaha untuk mengganti

media kultur jaringan dengan media yang baru, sehingga kebutuhan nutrisi

untuk kalus atau protokormus dapat terpenuhi (Yusnita 2004).

Tujuan dari pemanjangan akar pemanjangan tunas, induksi, dan

perkembangan setelah di sub kulturkan adalah untuk membentuk akar dan

pucuk tanaman yang cukup kuat untuk dapat bertahan hidup sampai saat

dipindahkan dari lingkungan in-vitro ke lingkungan luar. Dalam tahap ini,

kultur tanaman akan memperoleh ketahanannya terhadap pengaruh

lingkungan, sehingga siap untuk diaklimatisasikan. Tunas-tunas yang

dihasilkan pada tahap multiplikasi di pindahkan ke media lain untuk

pemanjangan tunas. Media untuk pemanjangan tunas mengandung sitokinin

sangat rendah atau tanpa sitokinin. Tunas tersebut dapat dipindahkan secara

individu atau berkelompok. Pemanjangan tunas secara berkelompok lebih

ekonomis daripada secara individu. Setelah tumbuh cukup panjang, tunas

tersebut dapat diakarkan (Yusnita 2004).

Sub kultur dilakukan ketika eksplan yang ada dalam botol sudah

tumbuh setinggi botol, atau eksplan tersebut sudah berada lama di dalam botol

sehingga pertumbuhannya sudah mulai berkurang. Biasanya sudah mulai

kekurangan hara. Media dalam botol kelihatan mulai menipis, berwarna

kecoklatan atau hitam sebagai hasil reaksi pertumbuhan tanaman, bekas

bagian tanaman yang mati dan lain-lain (Dwimahyani 2006).

5/24/2018 6. Sub Kultur

3/8

Aplikasi kultur jaringan pada awalnya ialah untuk propagasi tanaman.

Selanjutnya penggunaan kultur jaringan lebih berkembang lagi yaitu untuk

menghasilkan tanaman yang bebas penyakit, koleksi plasma nutfah,

memperbaiki sifat genetika tanaman, produksi dan ekstaksi zat-zat kimia

yang bermanfaat dari sel sel yang dikulturkan. Kemudian dijadikan tanaman

yang tumbuh sehat dan bebas penyakit (Zaitlin dan Palukaitis 2008).

Eksplan yang akan ditanam harus bebas dari hama, penyakit maupun

mikroorganisme lain yang kurang menguntungkan untuk tanaman. Umur

tanaman juga mempengaruhi dalam pertumbuhan tanaman. Apabila tanaman

yang akan digunakan untuk eksplan berumur kurang dari 4-5 bulan maka

kemungkinan untuk tumbuh dan berkembang sangat sulit karena tanaman

tebu yang masih muda mengandung senyawa fenol yang sangat tinggi

sehingga akan mengakibatkan browning dan pada akhirnya eksplan akan

mati. Sedangkan tanaman tebu yang berumur lebih dari 5 bulan akan sulit

untuk tumbuh. Hal itu disebabkan karena tanaman berada pada masa

matur/pertumbuhan yang lanjut sehingga sifat totipotensi pada sel tersebut

sangat sedikit sekali atau bahkan tidak ada (Altner 2008).

5/24/2018 6. Sub Kultur

4/8

C. Metode Praktikum1. Waktu dan Tempat Praktikum

Praktikum Sub Kultur dilaksanakan pada hari Selasa, 16 April 2013

pukul 13.00 - 15.00 WIB di Laboratorium Fisiologi Tumbuhan dan

Bioteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Sebelas Maret Surakarta.

2. Alata. LAFC lengkap dengan lampu bunsen

b. Petridish dan botol-botol kulturc. Peralatan diseksi, yaitu pinset besar/kecil danscalpel

3. Bahana. Eksplan : tunas/buku krisan (Chrysanthemum morifolium R.)

b. Media kulturc. Alkohol 70 %d. Aquadest sterile. Spirtus

4. Cara Kerjaa. Penanaman eksplan

1)Membuka plastik penutup botol media kultur.2)Mengambil eksplan tunas/buku krisan yang ada dan menanamnya di

media kultur baru dengan pinset. Setelah digunakan, pinset harus

selalu dibakar di atas api.

3)Selama penanaman, mulut botol harus selalu dekat dengan api untukmenghindari kontaminasi.

b. Pemeliharaan1)Botol-botol media berisi eksplan ditempatkan di rak-rak kultur.2)Lingkungan di luar botol harus dijaga suhu, kelembaban dan

cahayanya.

3)Penyemprotan botol-botol kultur dengan spirtus dilakukan 2 harisekali untuk mencegah kontaminasi.

c. Pengamatan selama 5 minggu, yang diamati:1)Saat muncul akar, tunas, daun dan kalus (HST), diamati setiap hari.

5/24/2018 6. Sub Kultur

5/8

2)Jumlah akar, tunas dan daun, diamati 1 minggu sekali.3)Deskripsi kalus (struktur dan warna kalus), dilakukan pada akhir

pengamatan.

D. Hasil Pengamatan dan Pembahasan1. Hasil Pengamatan

Tabel 6.1 Pengamatan Subkultur Krisan

Sumber: Laporan Sementara

Gambar 6.1 Subkultur Krisan

2. PembahasanSubkultur merupakan salah satu tahap dalam kegiatan perbanyakan

tanaman melalui kultur jaringan, yaitu memperbanyak eksplan yang telah

tumbuh dengan menempatkannya pada media yang baru. Tujuan

dilakukannya subkultur adalah untuk penyedian unsur hara yang sudah

mulai habis dan agar eksplan tidak teracuni oleh zat yang dikeluarkan

eksplan. Subkultur dapat dilakukan dengan memindahkan hasil kultur

jaringan atau tunas ke media perakaran dengan media yang dapat

merangsang pembentukan akar.

Eksplan yang digunakan dalam praktikum subkultur adalah eksplan

Krisan. Eksplan membutuhkan ZPT untuk menunjang pertumbuhannya.

Eksplan yang dalam kondisi bagus dan tidak terkontaminasi dari tahap

inisiasi kultur dapat dipindahkan atau disubkulturkan ke media yang

mengandung sitokinin. Dalam subkultur ini digunakan ZPT berupa BAP

Eksplan Tanggal

Saat Muncul (HST) Jumlah Akar

Akar Tunas Akar Tunas Daun Tunas Kalus

Keterangan

19 April 2013 - - - - - - - Masih Baik

Krisan 23 April 2013 Masih Baik

26 Mei 2013

KontaminasiJamur

5/24/2018 6. Sub Kultur

6/8

dan IBA. BAP berperan dalam terbentuknya organogenesis, morfogenesis

dan memacu terjadinya pembelahan sel, sedangkan IBA berperan memacu

pertumbuhan sel tunas pucuk. Hasil subkultur pada praktikum tidak

menunjukkan peran adanya ZPT. Hal itu dikarenakan eksplan yang

ditanam tidak dapat hidup dan mengalami kontaminasi jamur.

Keberhasilan penanaman eksplan dipengaruhi oleh beberapa faktor,

yaitu sterilisasi, pemilihan bahan eksplan, faktor lingkungan seperti pH,

cahaya dan temperatur, serta kandungan ZPT (Zat Pengatur Tumbuh)

dalam medium kultur. Faktor yang mempengaruhi kegagalan dalam

penanaman eksplan adalah media dan alat yang tidak steril, perlakuan,

pengovenan yang kurang baik serta lingkungan yang mudah

mengkontaminasi bagi media penanaman.

Zat pengatur tumbuh (ZPT) yang diberikan dalam penanaman

ekspan subkultur krisan bermanfaat untuk mengendalikan dan mengatur

pertumbuhan kultur tanaman. Zat ini mempengaruhi pertumbuhan dan

morfogenesis dalam kultur sel, jaringan dan organ. Jenis dan konsentrasi

ZPT tergantung pada tujuan dan tahap pengkulturan. Secara umum, zat

pengatur tumbuh yang digunakan dalam kultur jaringan ada tiga kelompok

besar, yaitu auksin, sitokinin dan giberelin. Auksin digunakan secara luas

dalam kultur jaringan untuk merangsang pertumbuhan kalus, akar,

suspensi sel dan organ. Sitokinin berperan untuk menstimulus pembelahan

sel dan merangsang pertumbuhan tunas pucuk. Sitokinin yang biasa

digunakan dalam kultur jaringan adalah kinetin, ziatin,benzilaminopurine

(BAP) dan giberelin untuk diferensiasi atau perbanyakan fungsi sel

terutama pembentukan kalus.

Sterilisasi eksplan dilakukan menggunakan clorox (sunclin)

dengan melakukan perendaman selama 3 menit pada eksplan dan

membilas bahan dengan aquadest. Sterilisasi bahan harus dilakukan

dengan tepat, apabila perendaman clorox terlalu lama maka jaringan dari

bahan tanam akan mengalami kematian (browning) sehingga tidak mampu

5/24/2018 6. Sub Kultur

7/8

membentuk individu baru, apabila sterilisasi terlalu singkat maka bahan

tanam yang digunakan akan membawa bibit bibit kontaminasi

(George 2006).

Kontaminasi dari eksplanlah yang paling sulit diatasi, walaupun

sterilisasi telah dilakukan dengan berbagai cara, namun kadang-kadang

kontaminasi tetap saja terjadi. Cara penanggulangannya dilakukan

perlakuan pada tanaman yang akan dijadikan sebagai sumber eksplan

dengan mencuci eksplan pada larutan fungisida dan bakterisida. Untuk

menanggulangi kontaminasi setelah ekspaln dikulturkan maka dilakukan

pemeliharaan secara dengan melakukan penyemprotan spirtus ataupun

alkohol pada permukaan botol kultur dua hari sekali (Rahardja 2005).

Berdasarkan hasil pengamatan penanaman eksplan subkultur krisan,

pada hari pertama saat penanaman eksplan di dalam media dalam keadaan

kurang baik, karena jarak antara nodus yang pendek dapat mengakibatkan

daun menempel pada media dan akhirnya membusuk. Pada minggu

pertama keadaan eksplan masih bagus, tetapi pada minggu kedua eksplan

mulai terkontaminasi.

E. Kesimpulan dan Saran1. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dapat diambil kesimpulan, yaitu:

a. Terjadi kontaminasi pada minggu kedua setelah sub kulturb. Kontaminasi berasal dari jamur

2. SaranDalam proses penanaman sebaiknya dicontohkan oleh co-assisten

terlebih dahulu cara penanaman eksplan yang benar itu yang bagaimana,

sehingga tidak terjadi kesalahan sterilisasi bahan yang berakibat terjadinya

kontaminasi ataupun browning.

5/24/2018 6. Sub Kultur

8/8

DAFTAR PUSTAKA

Altner, S. 2008. Sub Tissue Culture of Plant Cell Structure. London : OxfordUniversity.

Dwimahyani, I. dan S. Gandanegara. 2006. Perbanyakan Tanaman Krisan

(Chrysanthenum morisdium melalui Kultur Jaringan). Jurnal Ilmiah Vol. 5

(4) : 413-419.

Santoso. 2004.Kultur Jaringan Tanaman. Malang: UMM Press.

Yusnita. 2004. Kultur Jaringan : Cara Memperbanyak Tanaman secara Efisien.

Jakarta : Agromedia Pustaka.

Zaitlin, M. and P. Palukaitis. 2008. Advances in understanding plant viruses and

virus diseases. Annu. Rev. Phytopathol. 38: 117-143.

Rahardja, P.C 2005. Kultur Jaringan, Teknik Perbanyakan Tanaman Secara

Modern. Jakarta : Penebar swadaya.

George, E.F. and P.D. Sherrington 2006. Plant Propagation by Tissue Culture.

Handbook and Directory of Commercial Laboratories. Exegetics Limited.

England.