Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (II)

En esta segunda parte del trabajo sobre toma de muestras hablaremos de la toma de muestras para citología. Os contamos como obtenerla, como procesarla y como enviarla a un laboratorio externo si fuese necesario.

10.prevención de la salud

La citología consiste en el estudio microscópico de

las células. Para poder realizar una adecuada inter-

pretación de la citología es imprescindible que las

técnicas de obtención y procesado de las muestras

sean correctas.

Toma de muestras

El estudio citológico se puede realizar sobre diversos

tipos de muestras: lesiones cutáneas o subcutáneas,

ganglios linfáticos, órganos, piel, médula ósea, líquidos

orgánicos, etc.

Existen cuatro tipos de técnicas para obtener muestras:

a. Impronta.

b. Raspado.

c. Frotis.

d. Punción-Aspiración con aguja fina (PAAF).

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Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (II)

a. Impronta

Esta técnica consiste en apoyar un por-

taobjetos sobre el tejido lesionado para

que las células desprendidas de la lesión

se adhieran al porta. Se puede realizar con

fragmentos de tejido obtenidos por biop-

sia o bien en lesiones externas en anima-

les vivos.

Cuando utilizamos fragmentos de tejido es

conveniente que apoyemos varias veces, sin

presionar, la cara de la muestra sobre un pa-

pel secante, para eliminar la contaminación

de sangre en la muestra. Posteriormente,

apoyaremos la muestra varias veces sobre

portas limpios hasta que obtengamos una

capa uniforme y fi na de células.

Si utilizamos esta técnica en lesiones externas

del animal vivo, es importante realizar una im-

pronta, apoyando ligeramente el porta sobre

la zona afectada, antes de lavar la lesión. Des-

pués, lavaremos la lesión con una gasa y sue-

ro fi siológico, reavivaremos la lesión mediante

raspado con una cuchilla de bisturí, secare-

mos con material absorbente, y volveremos a

realizar otra impronta.

b. Raspado

Esta técnica consiste en el raspado con una

cuchilla de bisturí de la superfi cie de una le-

sión. Su mayor utilidad es el estudio de lesio-

nes externas.

Primero lavaremos la lesión con suero fi-

siológico y secaremos la zona con papel

absorbente. Echaremos una gota de acei-

te sobre la zona elegida y sobre la hoja de

bisturí para que se adhiera el material que

vamos a raspar. Posteriormente apoyare-

mos el filo de la cuchilla perpendicular a la

superficie de la lesión y la desplazaremos

varias veces sobre la misma, sin ejercer ex-

cesiva presión.

El material obtenido se transfi ere al centro de un

portaobjetos limpio y se extiende siguiendo cual-

quiera de las técnicas que comentaremos poste-

riormente en la preparación de extensiones.

c. Frotis

Esta técnica consiste en la obtención de célu-

las deslizando suavemente un hisopo o bas-

toncillo de algodón sobre una superfi cie orgá-

nica. Conviene humedecer el bastoncillo con

suero fi siológico para prevenir el daño en las

células de la muestra.

Se usa, fundamentalmente, cuando no es

posible obtener muestras mediante impron-

ta, raspado o aspiración con aguja fi na, por

ejemplo en trayectos fi stulosos, citología va-

ginal, etc...

Para realizar un raspado echaremos una gota de aceite sobre la zona y sobre la hoja de bisturí para mejorar la adherencia de la muestra

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Una vez obtenida la muestra, deberemos apo-

yar y hacer rotar el hisopo sobre el porta, sin

ejercer mucha presión y sin pasar dos veces

por el mismo sitio.

d. Punción-Aspiración con aguja fina (PAAF):

Esta técnica está especialmente indicada

para la obtención de muestras citológicas de

órganos o lesiones sólidas, mediante la pun-

ción y/o aspiración de lesiones con una aguja

y una jeringa.

Para esta técnica se suelen utilizar agujas de

22 g (amarillas) y jeringas de 10 cc.

Es importante preparar la zona donde se va

a realizar la punción. Para muestras subcutá-

neas, bastará con limpiar la zona de piel con

alcohol. Si la muestra se va a recoger por pun-

ción de la cavidad abdominal, torácica o arti-

culaciones, la zona de piel deberá prepararse

como un campo quirúrgico.

Para realizar la punción aspiración, se debe

sujetar firmemente la masa con los dedos,

siempre que sea posible, con el fin de favo-

recer la penetración de la aguja en la piel y en

el tejido, y el control de la dirección. La aguja,

unida a la jeringa, se dirige hacia el centro de

la masa y se ejerce una presión negativa (ha-

ciendo retroceder el émbolo de la jeringa has-

ta aproximadamente 3⁄4 partes del volumen

de la jeringa).

Se puede realizar aspiraciones de varias zo-

nas de la masa, evitando en todo momento

salirnos de la masa y que el material aspi-

rado se contamine con sangre. Si la masa

es grande, podemos mantener la presión

negativa mientras redirigimos la aguja a otra

zona. En masas pequeñas es más conve-

niente suspender la presión negativa mien-

tras movemos la aguja.

Una vez obtenido el material, se deja de ejer-

cer la presión negativa y se extrae la aguja y la

jeringa de la masa y de la piel. Posteriormente,

separamos la aguja de la jeringa y llenamos

de aire esta última, mediante una aspiración.

Entonces, se vuelve a colocar la aguja en el

cono de la jeringa y se expele el contenido en

la parte central de un porta, intentando que

quede en forma de gota.

Existe una variante de esta técnica que es

la punción con aguja fina sin aspiración. Se

realiza de forma similar, pero sin ejercer pre-

sión negativa, con lo que está especialmente

indicada en lesiones muy vascularizadas (con

mucho sangre) y en los ganglios linfáticos.

Realizaremos la punción de la lesión, movien-

do varias veces la aguja dentro de la masa,

hacia adelante y atrás, e intentando perma-

necer en el mismo trayecto. La recogida de

células se realiza mediante el corte de la pro-

pia aguja, que se irá llenando con las células

desprendidas.

Luego acoplamos una jeringa de unos 10 cc

que previamente habremos llenado de aire y

expeleremos el material en un porta limpio. De-

bemos hacer esto lo antes posible para evitar

que se seque la muestra. La punción se puede

repetir varias veces en una misma masa siempre

que no aparezca contaminación sanguínea.

Finalmente, se realizará la extensión como co-

mentaremos a continuación.

Procesado de las Muestras

1. Extensión

En el caso de las muestras obtenidas por ras-

pado o por PAAF, el material obtenido debe

ser extendido sobre el porta para formar una

capa fina de células que permita una correc-

ta visualización. Es muy importante realizar el

manejo de la muestra con mucho cuidado,

evitando ejercer excesiva presión para no da-

ñar las células.

Para evitar que la muestra se seque, de-

beremos realizar la extensión lo más rápi-

a. Técnica de “aplastamiento” (squash):

Esta técnica de extensión consiste en los siguientes pasos:

1) Poner el material en forma de gota en uno

de los extremos del porta

2) Apoyar sin ejercer mucha presión un

segundo porta por una de sus caras y en

sentido perpendicular al primero

3) Con un movimiento rápido, deslizar el

segundo porta sobre el primero

prevención de la salud.13

b. Técnica de extensión sanguínea:

Está técnica de extensión puede usarse cuando la muestra ob-

tenida es muy fl uida. Se utiliza sobre todo para extender las go-

tas de sangre para hacer un frotis.

Utilizaremos dos portas, uno con la gota de muestra en un ex-

tremo, y el otro para realizar la extensión (Figura 2). El porta de

arriba puede ser sustituido por un cubre.

1) Apoyaremos uno de los bordes cortos del porta de

extensión (o un cubre), sobre el porta con la muestra,

formando un ángulo de 30-40º

2) Deslizaremos el porta de extensión hasta contactar

con la gota, con lo que el material se extenderá en

forma de línea en el borde corto del porta de exten-

sión

3) Con un movimiento rápido y suave deslizamos el por-

ta de extensión, alejándonos de la gota, formándose

una capa uniforme

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prevención de la salud.15

damente posible una vez que coloquemos la gota de muestra en el

portaobjetos.

Todas las extensiones deben de ser marcadas con rotuladores indele-

bles al alcohol o con lapicero (en portas esmerilados) para su correcta

identifi cación.

Existen varías formas de realizar la extensión, aquí os desarrollamos dos

de ellas la técnica de “aplastamiento” (squash) y la de extensión

2 Fijación y tinción

Para que las células se adhieran al portaobjetos, y para evitar que se

degeneren las células, hay que fi jar la muestra.

El método de fi jación puede variar según la técnica de tinción que se

vaya utilizar. Normalmente en la clínica o para el envío de muestras a

otro laboratorio la muestra debe de secarse al aire y luego debe fi jarse

con metanol. También puede utilizarse el primer reactivo de las técnicas

rápidas.

Muchas veces la tinción de las extensiones citológicas se hace en la pro-

pia clínica para realizar allí su interpretación pero otras veces se remite.

Si la muestra se remite a un laboratorio especializado es mejor no teñir-

las en la clínica, hay que fi jarlas y dejarlas sin teñir.

Cuando la preparación se tiñe en la clínica se usa normalmente la

Técnica rápida Diff-Quik®. Esta técnica de tinción es muy utilizada

debido a su sencillez y rapidez, todos sus reactivos son comercia-

les y están ajustados para realizar la técnica en el menor tiempo

posible.

Remisión de Muestras:

Cuando se remitan muestras de citologías a un laboratorio especializa-

do, estas deben ir en contenedores adecuados.

Las extensiones deben enviarse fi jadas (metanol) y colocadas en porta-

preparaciones de plástico. Si no disponemos de ellos pueden proteger-

se envolviéndolas con varias capas de papel adsorbente.

Ante cualquier duda sobre el procesamiento de la muestra o forma

de envío es aconsejable ponerse en contacto con el laboratorio de

referencia.

todas las extensiones deben de ser marcadas con rotuladores indelebles al alcohol o con lapicero (en portas esmerilados) para su correcta identificación