脂质体 Liposomes
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脂质体 Liposomes
• 脂质体 liposomes 1965 年被英国 Bangham 提出
• 磷脂分散在水中可形成多层囊泡,每一层均为脂质双分子层,各层之间被水相隔开
一、概述 Introductions
脂质体的示意图
脂质体主要由磷脂和胆固醇组成 磷脂由一个亲水的头部和两个疏水的尾部组成
磷脂的结构示意图
载药脂质体的结构示意图
药物被脂质体包封后有以下特点:
1 .靶向性和淋巴定向性
2 .长效性
3 .细胞亲和性与组织相容性
4 .降低药物毒性
5 .提高药物稳定性
脂质体在体内与细胞的作用过程
• 吸附 adsorption
• 脂交换 lipid exchange
• 内吞作用 endocytosis
• 融合 fusion
1 .中性磷脂磷 电中性、化学惰性天然磷脂 磷脂酰胆碱 phosphatidylcholine
合成的磷脂 二棕榈酰胆碱 dipalmitoyl phosphatidyl choline DPP
C
二硬脂酰胆碱 distearoyl phosphatidyl choline DSPC
鞘磷脂 sphingomyelin
磷脂酰乙醇胺 phosphatidylethanolamine
二、制备脂质体的材料 Materials for preparation of liposomes
2 .负电荷磷脂 负电荷磷脂又称为酸性磷脂
• 磷脂酸 phosphatidic acid, PA
• 磷脂酰甘油 phosphatidyl glycerol, PG
• 磷脂酰肌醇 phosphatidylinositol, PI
• 磷脂酰丝氨酸 phosphatidyl serine,PS
3 .正电荷脂质
均为人工合成产品
• 硬脂酰胺 stearylamine,SA
• 胆固醇衍生物
4 .胆固醇 cholesterol
• 自然界生物膜中的另一类重要的组分 • 中性脂质,两亲性分子,亲油性大于亲水性
胆固醇的结构
5 .长循环膜材料
神经节苷脂 ganglioside GM1• GM1 引入了唾液酸残基增强了膜的稳定性、减少了网状内皮系统细胞对脂质体的摄取,延长了脂质体的体内循环时间
聚乙二醇衍生物 polyethylene glycol derivatives• 聚乙二醇基则增强了脂质体膜的亲水性,阻止网状内皮系统细胞对脂质体的摄取,延长了脂质体的体内循环时间
1 .薄膜法 最早由 Bangham 报道 • 磷脂等膜材溶于适量的有机溶剂• 脂溶性药物可加在有机溶剂中,然后在减压旋转下除去溶剂,使脂质在器壁形成薄膜,加入含有水溶性药物的缓冲液,进行振摇,则可形成大多室脂质体,其粒径范围约 1-5m 。
三、制备脂质体的方法 Preparation of liposomes
2 .逆相蒸发法 Reverse-phase evaporation
由 Szoka 提出• 膜材溶于有机溶剂,加入待包封药物的水溶液,进行短时超声,直至形成稳定的 W/O 型乳剂,减压蒸发有机溶剂,形成脂质体。
• 一般为大单层脂质体 • 包封的药物量大它适合于包封水溶性药物及大分子生物活性物质
脂质体膜制备
挤压制备小粒径脂质体
• 通过挤压使脂质体通过固定孔径的滤膜,脂质体粒径变小。该方法需要很低的压力, 689kPa 即可。
• 聚碳酸酯膜( polycarbonate membrane ),该膜的通道是直的并且大小相同,脂质体容易通过,即使脂质体直径略大于孔径也能通过。一般将脂质体原液稀释至 12μmol/ml 后再过膜,脂质体易通过孔径。
• 脂质体加压通过孔时,其结构发生变化,根据所需脂质体的大小选择膜的孔径。
3 .主动包封法 Remote loading method
• 从根本上改变了难以制备高包封率脂质体的局面。• 主动包封技术的应用与药物的结构密切相关,不能推广到任意结构的药物,因而受到了限制。
• 弱碱性的药物 采用 pH梯度法、硫酸铵梯度法 • 弱酸性的药物 采用醋酸钙梯度法等。
遥控装载—硫酸铵梯度法包封阿霉素隐形脂质体
根据化学平衡移动原理而设计的,空白脂质体包封阿霉素的前提是:
1. 脂质体膜可透过分子型药物;
2. 离子型化合物较少或几乎不透过脂膜;
3. 硫酸阿霉素的溶度积 << 盐酸阿霉素的溶度积。
硫酸铵梯度法包封阿霉素的步骤
1. 制备脂质材料薄膜——旋转蒸发;2. 用硫酸铵溶液使脂膜水化,形成粗空白脂质体;3. 挤压使通过聚碳酸酯微孔滤膜,较大粒径的脂质
体被“粉碎”成小粒径的脂质体,得空白脂质体;4. 通过透析法或凝胶柱过滤,除去空白脂质体囊泡外部的硫酸铵,从而使脂质体囊泡内、外部的硫酸铵浓度形成了浓度梯度差 (1000倍);
5. 盐酸阿霉素水溶液与上述空白脂质体混合、 60℃孵育 30min 、不断振摇,即得。
(NH4)2SO4
2NH3 + 2H+ = 2NH4+ + SO4
2-
(DOX-NH2)2SO4
DOX-NH2
gel-like precipitate
2DOX-NH3.CI
2DOX-NH3++2CI-
2DOX-NH2+2HCI
2DOX-NH2
硫酸铵梯度法包封盐酸阿霉素
隐形脂质体的隐形机理
4 .免疫脂质体制备法
抗体与脂质体结合方法有:
( 1 )吸附法
( 2 )脂质蛋白融合法
( 3 )交联法
1 .形态、粒径及其分布
2 .包封率和载药量的测定
3 .释放度与渗漏率的测定
4 .药物体内分布的测定
四、脂质体的表征 Characterization of liposomes
1. 脂质体的研究与应用进展
2. 简述脂质体的概念、特点与用途。
3. 简述制备脂质体的常用的材料。
4. 简述 pH梯度法制备载药脂质体的原理和方法。
思考题