ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный университет

Мисетов И.А.

Лекция № 4

Методы хранения бактериальных культур

Оренбург

2014

План лекции:

1. Методы непродолжительного хранения микроорганизмов.

1.1. Периодические пересевы (субкультивирование).

1.2. Под минеральным маслом.

1.3. В воде и водно-солевых растворах.

1.4. Высушивание.

2. Методы длительного хранения микроорганизмов

2.1. Консервация замораживанием при низких температурах.

2.2. Консервирование высушиванием из замороженного состояния.

2.3. Консервирование высушиванием из жидкого состояния.

3. Защитные средства, используемые при консервации.

4. Внутриклеточные протектанты.

5. Внеклеточные защитные средства.

6. Методы хранения культур микроорганизмов (видео).

15.04.2023 Мисетов И.А. 2

Субкультивирование

Условия хранения культур:

1. подходящая поддерживающая среда;

2. идеальная температура хранения;

3. необходимая частота пересевов.

15.04.2023 Мисетов И.А. 3

Хранение под минеральным маслом

Вазелиновое масло - удельная плотность 0,865–0,890 г/см3

15.04.2023 Мисетов И.А. 4

Хранение высушиванием на твердых носителях

15.04.2023 Мисетов И.А. 5

Почва

Песок

Семена злаковых

Бумага

Желатин

15.04.2023 Мисетов И.А. 6

Хранение замораживанием

15.04.2023 Мисетов И.А. 7

Консервация замораживанием при низких температурах

воздух - 80 К или -193 °С; азот - 77,4 К или - 196 °С;

неон - 27,1 К или - 246 °С; водород - 20,4 К или - 256 °С;

гелий - 4,2 К или - 269 °С

15.04.2023 Мисетов И.А. 8

Консервация замораживанием при низких температурах

воздух - 80 К или -193 °С;

азот - 77,4 К или - 196 °С;

неон - 27,1 К или - 246 °С;

водород - 20,4 К или - 256 °С;

гелий - 4,2 К или - 269 °С

15.04.2023 Мисетов И.А. 9

Консервация замораживанием при низких температурах

Техника проведения консервирования.1. Подготовка культуры. 2. Заполнение емкостей. 3. Замораживание. 4.Извлечение. 5.Оттаивание.

15.04.2023 Мисетов И.А. 10

Консервирование высушиванием из замороженного состояния

По принципу работы сублимационные установки подразделяются на:- периодические, - поточно-циклические - установки с непрерывным действием.

Типы сублимационных установок: - коллекторные установки, - камерные установки.

15.04.2023 Мисетов И.А. 11

Консервирование высушиванием из замороженного состояния

Техника проведения консервирования.1. Подготовка культур к сушке. 2. Лиофилизация. – замораживание биоматериалов; – первичное высушивание (вакуум и тепловая энергия); – вторичное высушивание (досушивание). 3. Хранение. 4. Восстановление (реактивация) культур. 5. Проверка жизнеспособности бактерий.

15.04.2023 Мисетов И.А. 12

Консервирование высушиванием из замороженного состояния

Подготовка культур к сушке.

• Замораживание биоматериалов• Первичное высушивание(вакум и

тепловая энергия• Вторичное высушивание

(досушивание)

Лиофилизация

Хранение

Восстановление (реактивация) культур

Проверка жизнеспособности

бактерий

15.04.2023 Мисетов И.А. 13

Консервирование высушиванием из жидкого состояния

Техника проведения консервирования.1. Подготовка клеток для L-высушивания.2. Подготовка стабилизатора-носителя.3. Заполнение ампул микробной суспензией.4. Высушивание (первичное и вторичное высушивание).

15.04.2023 Мисетов И.А. 14

Защитные средства, используемые при консервации

Критерии защитных сред:– сохраняют жизнеспособность, морфологические, биохимические, таксономические и генетические свойства микроорганизмов в процессе консервации и хранения; – нетоксичны; – имеют хорошую растворимость в воде; – легко соединяясь с водой, выполняют колигативные функции; – имеют низкую температуру эвтектики; – предотвращают гиперконцентрирование солей в суспензии; – стабилизируют водородные связи в кристаллической решетке и предотвращают формирование больших кристаллов льда; – хорошо проникают в клетки (только внутриклеточный механизм криопротекции).

15.04.2023 Мисетов И.А. 15

Защитные средства, используемые при консервации

Криопротекторы разделены на две группы: 1. Внутриклеточные криопротекторы – среды, проникающие в клетки. 2. Внеклеточные криопротекторы – среды, соединяющиеся с внеклеточной водой.

15.04.2023 Мисетов И.А. 16

Внутриклеточные протектанты

1. Глицерин (глицерол, 1, 2, 3 пропантриол, C3H8O3).

2. Диметилсульфоксид (ДМСО, C2H6SO).

15.04.2023 Мисетов И.А. 17

Внеклеточные защитные средства

1. Поливинилпирролидон (PVP, (-C6H9NO-)n). 2. Полигликоль.3. Гидроксиэтилкрахмал (Hydroxyethyl starch, HES). 4. Декстран.

Декстран

Поливинилпирролидон

Гидроксиэтилкрахмал

15.04.2023 Мисетов И.А. 18

Внеклеточные защитные средства

5. Сахариды (сахароза, глюкоза, трегалоза, лактоза, глюкоза, маннит).6. Коллоиды (желатин, агар, пептон, молоко и сыворотки).7. Соли (глутамат натрия).

Сахароза

Глутамат натрия

Желатин

15.04.2023 Мисетов И.А. 19

К внутриклеточным протектантам относятся

Глицерин

Поливинилпирролидон

Глицерол

Диметилсульфоксид

Сахариды

Коллоиды

Верно!

Подумайте еще!

15.04.2023 Мисетов И.А. 20

Методы хранения культур микроорганизмов

15.04.2023 Мисетов И.А. 21

15.04.2023 Мисетов И.А. 22