INMUNOFLUORESCENCIA

Dr. Juan Carlos AldaveMédico Especialista en Inmunología Clínica y Alergología

Comité de Inmunodeficiencias PrimariasAsociación Latinoamericana de Inmunología

• Objetivos de la práctica:– Conocer el fundamento de la técnica de

inmunofluorescencia

Inmunofluorescencia

• Es una prueba de diagnóstico serológico que tiene dos variedades principales: – IF directa: para detección de antígenos en una

muestra clínica– IF indirecta: para detección de anticuerpos

específicos en el suero del paciente

Inmunofluorescencia directa (IFD)

• Prueba de una sola etapa

• Sobre una lámina depositamos una muestra en la que buscamos la presencia de un determinado antígeno (antígeno problema)

Inmunofluorescencia directa (IFD)

• Añadimos anticuerpos específicos del antígeno problema, marcados con isotiocianato de fluoresceína (conjugado)

• Si el antígeno problema se encuentra presente en la muestra, el conjugado se une. En caso contrario el conjugado se elimina con un lavado de la lámina

Inmunofluorescencia indirecta (IFI)

• Prueba de 2 etapas

• Sobre una lámina que lleva pegado un antígeno conocido, añadimos el suero del paciente

• Si el suero contiene anticuerpos específicos, éstos se unen al antígeno

Inmunofluorescencia indirecta (IFI)

• Posteriormente se añaden anticuerpos anti-inmunoglobulina humana marcada con isotiocianato de fluoresceína (conjugado)

• El conjugado se unirá a los anticuerpos del paciente

Lectura de inmunofluorescencia

• La lectura se hace con un microscopio de fluorescencia, cuya luz estimula al isotiocianato de fluoresceína, haciendo que emita luz fluorescente de color verde

• La observación de luz verde fluorescente en la lámina indica la presencia del antígeno en la muestra (IFD) o de anticuerpos específicos en el suero (IFI)

IFI: primera etapa

IFI: segunda etapa

UTILIDAD DE LA IF EN LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA)

ANTÍGENO

ANTICUERPO

¿QUÉ SON?

Importancia

• Asociación con enfermedades del tejido conectivo

• Participación en la patogenia de la enfermedad– Anti DNA – nefritis lúpica– Anti Ro – bloqueo cardiaco congénito

GRACIAS

“Que Dios los cuide mucho y bendiga su familia y trabajo”