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ANYPLEX II DETERMINACIN D
TBC/MDR/XDR
Blga. Marel Tello
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ESTUDIOS
EN PER
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La tuberculosis (TB) y sus principales formas resistentey TB-XDR (sta virtualmente incurable) constituyen uproblemas de salud pblica ms importantes en el
PRIMERA CAUSA DE MUERTE POR ENFERMEDAD INF
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!egn cifraso"ciales de la #!$%&'T en el ao2006, cada hoa !"#$o%a$ fuerondiagnosticadas deTB y cada d&a'a((#c)#o% *
personas por esta
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!egn la M!, consideporcenta*e de detecci+n del y estimaciones del sub%regist--, #( %+,#o d# #%'#)%c#,#%a a 6 "o hoP#+.
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!+lo las provincias de L),anoti"caron ms casos de 'olombia, #cuador, 0rgentin##22 y o1)#o% (a
)%c)d#%c)a "o 003000 h,4$ a(a #% odo #( coa,#)ca%o, por encima Bolivia, 4uayana y de algundel 5frica !ubsa1ariana com
#tiopa, #l 'ongo, Mo
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*0 ,)((o%#$ d# ha)a%#$
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No ha. dao$ "aa P#+
XDR
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0lta incidencia de TB.&rimer pas en 0mrica con mayor carga de TB M78 y TB
;-
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La magnitud alcan6ada por la TB, la TB M78 y la Tel &er, *usti"ca /ue esta enfermedad sea dec#,#9#%c)a $a%)a)a %ac)o%a(para lograr la mde recursos del tesoro pblico y desarrollar un
programa e*ecutivo de control /ue consrecomendaciones internacionales en el conte=e=periencia ganada en el pas.
PER
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Medidas >nmediatas?
'reaci+n de un centro de referencia nacional.
'entros de referencia regionales especiali6ados en "d)a9%7$)co y tratamiento de la TB, con la capacidad
universali6aci+n de "#a$ d# $#%$))()dad "aaa,)#%o$ )%d)1)da():ado$al @--< de los afectado
Tratamiento institucionali6ado de las principales formas1asta controlar su condici+n de transmisor.
Brindar un subsidio a la persona afectada para cubrir las
bsicas de su familia mientras dura su terapia.
PER
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R#$a%TBC
T)#,d&a$
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LINE=OLID#l Line6olid es un antimicrobianotratamiento de infecciones por bacteriapositivas resistentes y 1a sido repoestudios in vitro frente a M. tuberculosis,
sugeridas en 1umanos son de 600,9 a "o d&a. !u uso 1a sido limitado debido a /ureportado serios efectos adversos? mielototo=icidad neuroptica, los cuales son depend
la dosis y de la duraci+n del tratamiento
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La rgani6aci+n Mundial de la !alud (clasi"cado a las drogas de segunda lneatratamiento de la TB MDR, considerando aldentro del grupo /ue incluye adems a lacloflaamo=icillinaAclavulanato, la t1ioaceta6oclaritromicina y elimipenem (llamado, 4rupembargo, para la TB XDR el tratamientencuentra estandari6ado y su e"cacia es inci
LINE=OLID
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COSTOTRATAMIEN
TO TB
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COSTO POR PACIENTE ENM>XICO
TB sensible? @-%-- d+
TB M78? @,-- % ,-- d
SUD?FRICA) y 2!C - % Etratamiento preventivo con cotrimo=a6ol durmeses
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COSTO ESTIMADO PERTRATAMIENTO 200@
#n #s!alud?
!A.@-- por paciente con TB sensible.
!A. --- por paciente con TB M78.
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'!T &8 T80T0M>#$
M#$!20L? D :: FT80T0M>#$T !24#8>7 &
M#!#!? @EG @F (!A.;-
&8#'> !>$ '!T 7# 3!&>T0L>H0'>I$ 2
07>'>$0L#!
TRATAMIENTO DE XDRTB
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0 000 MUESTRAS AL AO MDRY XDR
PROPUESTA IOONH07 >$>'>0L?
&'8 MTB y otros (@-7IL08#!)
T80$!&8T#?
7IL08#! 0$J&L#9 >> MTBAM78A978?
@-- 7L08#!
TOTAL< G DLARES
TIEMPO< 2 DHAS
TRATAMIENTO ACTUALH07 >$>'>0L?
B0'>L!'&K0 (E 7IL08#!)
M78 TB 4#$TJ?
D 7IL08#!
40!T! #9T80!?
>T 7# #9T80''>I$
>T 978 TB (E- E 7IL08#!)
T80B0N078#! ( o D T80B0N078#!)
T>#M& (D 7K0!)
D M5O2
T80$!
'!T
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&'8 vs B0'>L!'&K0
PCR #% T)#,"o R#a(
Ba$ada #% (a a,"()cac)7%d# $#cc)o%#$ #$"#c&ca$ d#
%a #9)7% d#( ADN #"#,)# $a# $) #$ TB"o$))1o "(,o%a oa&")co8
A(a #$"#c)c)dad @;J8
Bac)(o$co"&
E$ %a Kc%)ca d# )"#,)# 1)$a():a d4")da $) #( "ac)#%#
Ba5a #$"#c)c)dad 0*0J 'a($o$ %#9a)1oa #c)) % aa,S/8G008
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SEEENE 1$ AIN
ANYPLEX II TBC/MDR/XDR
Basada en la novedosa tcnicaTOCE /ue es un &'8 multiple= entiempo real basado entemperaturas de melting.
#n un solo procedimiento y co% %) "od#,o$ $a# $) #("ac)#%# #$ TB $#%$)(#3 MDRTB o XDR TB8'!T? @-- 7IL08#! (>$'L2J# >T7# #9T80''>I$).
T>#M&? ; hoa$
ENOTYP
!u tcnica est bah))d):ac)7%, la cualde ser utili6ada debi
especi"cidad y alta 'a($o$ "o$))1o$.S# #)##% * e=tracci+n, uno de M978.'!T? 0&89>M07
7IL08#!
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PARA PROCESAR G000 MUESTRAS AAOL!'&K0>T M78 TB 4#$TJ>T 978 TB 4#$TJ!$0L (0&89>M070M#$T# D)>T 7# #9T80''>I$ (&8 &0'>#$T#)
E 7IL08#!D 7IL08#E- E 7ILD--- !L#!@@ 7IL08#
&8 &0'>#$T# !# 40!T08K0 2$ 0&89>M07!A.D-, - P transporte P 'onstrucci+n del laborator
M/uinas P D veces ms en tiempo para otorgar el
H
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TECNOLOH
A SEEENE
DPO
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E%$a.o MLTIPLEX
8esultados mltiples ysimultneos.
2na sola muestra y el mismoproceso para los anlisis.
7os o ms targets o mutacionesen los genes.
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E%$a.o MLTIPLEX
7etecci+n e identi"caci+n de agentesinfecciosos (Pa%#(#$ d# "a79#%o$).
>denti"caci+n de des+rdenesgenticos (Pa%#(#$ d# targets"aa,ac)o%#$).
&ermite la elecci+n de la droga y ladosis (Pa%#(#$ d#'a,aco9#%K)ca).
$os ayuda a la evaluaci+n del
progreso de la enfermedad y el
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Cambio del paradigma en el DiagnsticoMolecular con la Estrategia de S##9#%#
DPOTM
,TTOCETM
0lto Multiple= de &'8 en Tiempo 8eal
@plataforma para T7! losensayos de 7= Molecular
&at+genoMutaci+n!$&
&anel Maestro
Ba*o costo por prueba$ue
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Principales Caractersticas de la Tecnologde S##9#%#
@. Ms de G0"(#Qen &'8 convencional o d
. !e ampli"ca de manera e"ciente y e/los targets.
7&TM
T'#TM
mT'#TM
@. Ms de 20"(#Qen &'8 en tiempo real.
.Tan sensible como una simple &'8 e(2niple=).
@. 7etecta ms de 20 ,ac)o%#$en un &'8 e
. Lo su"cientemente sensible para detectar uencuentre en menos de Q-,@
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Evolucin Histrica del Diagnstico Molecul&atenteA
&aperTecnologa 'ompaa
3omogneos(!istema'errado)
Multiple=(R @-ple=)
'uanti"caci+n(R @- analitos)
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Diagnstico Molecular Ideal para futuro
@) Multi detecci+n de targets.
) !istema cerrado? &'8 en tiempo real.
D) Multi cuanti"caci+n.
E) 7etecci+n de Mutaci+n? 8esistencia a las 7rogas y e
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0lta Multiplicidad en el 7iagn+stiMolecular
@er7esafo
Deteccin de Mltiples Targets PCR M()
i i l Ob l l C
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Principales Obstculos en el PC!Multiple"
@. 2niones no espec"cas deprimers.
. Sormaci+n de dmeros deprimers.
D. 7isminuci+n de la sensibilidad.
E. 7i"cultad en la optimi6aci+n.
SUPERADO POR LA TECNOLOHA DPOTMDE S
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Principio de la Tecnologa DPOTM
7& es un nuevo concepto en el diseo deprimers/estructural y funcionalmente diferente de losprimersconv
para &'8.Unin de Polideoxiinosina DPO P),# D
O()9o%c(#7
ADN molde SitioTarget
Principio de la Tecnologa DPOTM
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Principio de la Tecnologa DPO
P),# P),# Da(#l a:o G, /ue es el ms largo, preferentemal 07$ molde y se inicia la h))dac)7% #$a
S#9%do P),# Da(#l a:o *, /ue es el ms corto, se une selecsitio ob*etivo y "#,)# # $# "#(o%9ac)7%.
A,#%a (a #$"#c)c)dad "aa (a $#c#%c)a d
Principio de la Tecnologa DPOTM
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Principio de la Tecnologa DPO
E(),)%ac)7% d#primers%o #$"#c&co$
0un/ue el largo bra6o U se una un sitio no ob*etivotermodinmica, la porci+n DU $# #$)$# a (a#$"#c&ca (o#a%do #'#c)1a,#%# (a #(o%9
7ebido a las limitaciones termodinmicas, #( a$o(o %o "#d# %)$# a( target a la tem1ibridaci+n del ensayo.
#enta$a de la Tecnologa DPOTM
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$ gDPOV "#,)# #%$a.o$
,()"(#Q "aa ((#1a a caoco,o $)%9(#"(#Q
DPOV $"#a (a d(a o"),):a
7etecci+n de pat+genos enmuestras clnicas (carriles @%E).
DU%0mpli"caci+n 07$c "nal (D$dufs.
V7& W A,"()cac)7%E)1a(#%#X
8endimiento e/uivalente como
sin le le= vs multi le=
V7& W F4O"),):
8endimiento e/utodo un rango
@. &rico
. &ri
DPO % supera obstculos de PC
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DPO supera obstculos de PCMultiple"
@.2niones no espec"casdeprimers.
.Sormaci+n de dmerosdeprimers.
D.7isminuci+n de lasensibilidad.E.7i"cultad en la
optimi6aci+n.
&'8 'onvencional 7&TM&'
Limitaci+n en laMultiplicidad
@.&rimer espec"c.$o forma dmeD.!ensible co
singleple=.
E.Tolerante a la de la temper1ibridaci+n.
0mpli"caci+n conMltiples targ
7iagn+sticos Mo
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0lta detecci+n de mltiples target&'8 en tiempo real.
do7esafo
Mltiples Targets en un solocanal
A%4()$)$ d# (a T#,"#d# Melting
M&todos 'ctuales de Tm
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M&todos 'ctuales de Tm!onda 7ual Marcada
So%daTaMa%
So%da Mo(#c(aB#aco%No
))d):ada
No
))d):ada
No
))d):ada
No))d):a
da
))d):ada
))d):ada
Wa)ac)7% d# (a $#c#%c)a#% (o$ targetsd# (a $o%da #$(a #% ca,)o$ #% (a T,Multi lexidad
M&todo Ideal para Tm para un PC!
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p p multiple" en tiempo real
1.Libertad de variacin de secuencia en el sitio d2.Tm Controlado.3.Ensayo homogneo (una reaccin / un tubo).4.Alta especificidad y reproducibilidad.
Puede alcanzar
Tecnologa TOCETMde Seegene
Principio de la Tecnologa TOCET
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p g OC
D"(#Q Cach# es independiente del targetamplicon, conduciendo a una co%$)$#%#T,8
Poc)7%,acada
ADN
,o(d#
Mo(d# a)c)a(
(eneficios de TOCETMPoc)7%
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2n Tm pre%determinado (o controlada) permite la dde mltiples targetsen un solo canal
Poc)7%,acada
ADN,o(d#
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DEMOSTRACIN
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NLABORATORIO
YUEN-RHOS
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PACIENTE N *
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PACIENTE N *
PACIENTE N *
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PACIENTE N *
PACIENTE N *
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PACIENTE N *
PACIENTE N G
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PACIENTE N G
PACIENTE N G
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PACIENTE N G
PACIENTE N G
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PACIENTE N G
CONCLUSIONES
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CONCLUSIONES
7ebido a la clara asociaci+n entre "oTB, la disminuci+n de todas las formas del &er, debe ser considerada co
)%d)cado d# (a #cac)a d# (a$ acc)o(cha co%a (a "o#:a /ue el peruano se 1a propuesto lograr.
CONCLUSIONES
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#sta #a()dad %ac)o%a( y la propuesta dedebe ser conocida por la clase poltica del pblico en general para /ue se recono6cad),#%$)7% d#( )#$9o d)a)o en el /uepoblaci+n y se tome la decisi+n polticontrolar y erradicar esta enfermedad del pa
CONCLUSIONES
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