“ Morfologia en el diagnòstic de les hemopaties malignes en el segle XXI.
És ? ”
Francesc SoléCap de Grup en SMD
Director Científic del IJC Campus ICO-HGTiPJosep Carreras Leukaemia Research Institute
Badalona. Barcelona. Spain
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
Diagnóstico Neoplasias Hematológicas
Dades de laboratori Clínica
CMFIHQ
Estudi genètic
Citologia
Diagnòstic Integrat
Diagnóstico Neoplasias Hematológicas
Dades de laboratori Clínica
CMFIHQ
Estudi genètic
Citologia
Diagnòstic Integrat
Variabilitat interobservador
Diagnóstico Neoplasias Hematológicas
Dades de laboratori Clínica
CMFIHQ
Estudi genètic
CitologiaCitogenètica convencional
Hibridació in situ fluorescentMés del 50% dels pacients no
presenten alteracionscitogenètiques
Diagnòstic Integrat
Variabilitat interobservador
Diagnóstico Neoplasias Hematológicas
Dades de laboratori Clínica
CMFIHQ
Estudi genètic
CitologiaCitogenètica convencional
Hibridació in situ fluorescentMés del 50% dels pacients no
presenten alteracionscitogenètiques
Variabilidad interobservador
Diagnòstic Integrat
Arrays genòmics: Alteracions en el 70% dels casos
Seqüenciació massivaAlteracions en el 80% dels casos
Que veu la morfologia i que veula genètica?
Citologia vs Cito/Genètica
Citologia
Poc intel·ligentSuperficial
Poc espavilada
Citologia vs Cito/Genètica
Citologia
Poc intel·ligentSuperficial
Poc espavilada
Intel·ligentCoherent
Espavilada
Citologia vs Cito/Genètica
Citologia
Poc intel·ligentSuperficial
Poc espavilada
Intel·ligentCoherent
Espavilada
Citologia vs Cito/Genètica
Citologia La Citología és com els homes…, sols es fixa en lo de fora…
Citologia vs Cito/Genètica
Citologia La Citología és com els homes…, sols es fixa en lo de fora…
Poc intel·ligentSuperficial
Poc espavilada
Intel·ligentCoherent
Espavilada
Citologia vs Cito/Genètica
“Mientras que los hombres se enamoran de lo que ven, las mujeres se enamoran de lo que escuchan y leen”
Els homes semblen més citòlegs i les dones més genetistes… al revés que en
la hematologia..
• Valor diagnòstic: – Alteracions característiques de cada malaltia
Aplicació del Estudi Citogenètic/Genètic
Índice
LMC t(9;22)
LAM t(15;17), t(8;21), inv(16), t(11q23)/MLL…
LAL Hiperdiploide, pròxim a haploide, MLL transloc.
SMD 5q-, -7/7q-, +8, 20q-, i(17)(q10)
MM t(11;14), t(4;14), t(14;16)
LLC 11q-, +12, 13q-, 17p-
LNH t(8;14), t(11;14), t(14;18), t(3;14), t(11;18)
Diagnòstic
Aplicació del Estudi Citogenètic/Genètic
• Valor diagnòstic: – Alteracions característiques de cada malaltia
• Valor pronòstic:– IPSS (1997) i IPSS-R (2012) en SMD, Cariotip
monosòmic en LAM, 17p- en MM i LLC…
• Selecció del tractament en funció del canvi genètic(ex. Imatinib i t(9;22); Acid retinòic i LAM M3/t(15;17); Lenalidomida i 5q-, etc)
Aplicació del Estudi Citogenètic/Genètic
• Valor diagnòstic: – Alteracions característiques de cada malaltia
• Valor pronòstic:– IPSS (1997) i IPSS-R (2012) en SMD, Cariotip
monosòmic en LAM, 17p- en MM i LLC…
• Selecció del tractament en funció del canvi genètic(ex. Imatinib i t(9;22); Acid retinòic i LAM M3/t(15;17); Lenalidomida i 5q-, etc)
Aplicació del Estudi Citogenètic/Genètic
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Variabilitatintersobservador Sensibilitat
Morfologia Alta Baixa
Citogenètica Baixa/Mitja Baixa
FISH Baixa Mitja
NGS ? Alta
Diagnòstic
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Variabilitat intersobservadorMORFOLOGIA/CITOLOFIA
Diagnòstic
Objectiu: reproducibilidad WHO 2008 i IPSS-R (categoríes de 0-2 i 2-5%blastes)
N=110 casos11 hospitals i 11 citòlegs. Cada un va evaluar 20 mostres
Baixa concordança en els casos amb RCUD (citopenia refractaria ambdisplasia unilineal (21%) i RARS (18%)El tall de blastes del 2% no va ser reproduïble (taxa de discordança del32/108, 29%)
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Variabilitat intersobservadorDiagnòstic
ANYS CENTRES PARTICIPACIÓ CONCORDANÇA
2000 30 13 25%
2001 24 15 66,7%
2002 28 17 70,6%
2003 29 17 98%
2004 31 12 99%
2009-2015 30 27 94%
CQ SEHH. Citogenètica convencional
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Variabilitat intersobservadorDiagnòstic
CQ EUROGENTEST. Citogenètica convencional
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
2.5 4.5 5 6 8 9.5 10 10.5 11 11.5 12
Num
ber o
f lab
orat
orie
s
Total Score
Variabilitat intersobservadorDiagnòstic
CQ EUROGENTEST. Citogenètica convencional. LLA
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Variabilitat intersobservadorDiagnòstic
ANYS CENTRES CONCORDANÇA RESULTAT CORRECTE
2012-15 28 (19-32) 88% (71-100) 70% (45-100%)
CQ SEHH. FISH
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Variabilitat intersobservadorCITOGENÈTICA
Diagnòstic
CQ EUROGENTEST. Microarrays N= 23 laboratoris
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
NGS ?
Diagnòstic
SMD Bioinformàtic 1 A, B, C, D,…Bioinformàtic 2 E, F, G, H,…Bioinformàtic 3 …CSNK1A1
Pilot 4 centres, dues plataformes diferents
Variabilitatintersobservador Gens mutats
Diagnòstic-Seguiment-Sensibilitat
Citologia vs Cito/Genètica
NGS
Citogenètica
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Pronòstic
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Citologia
Pronòstic
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Citologia
Pronòstic
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Citologia
Pronòstic
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Genètica
Pronòstic
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Pronòstic
Genètica
NGS > Citogenètica
Alteracions Genètiques en LAM
Pronòstic
Alteracions Genètiques en MM
Pronòstic
Alteracions Genètiques en LLA
Pronòstic
Alteracions Genètiques en SMD
Variable pronòstica
0 0.5 1 1.5 2 3 4
Citogenètica Molt bo Bo Int. Dolent MD
Blastes MO %
≤2 >2-5% 5-10% >10%
Hb ≥10 8-<10 <8
Plaquetes ≥100 50-<100 <50
Neutròfils ≥0.8 <0.8
Blood (2012)
Alteracions Genètiques en SMD
Bejar et al., N Engl J Med (2011)
Alteracions Genètiques en SMD
Pronòstic
Bejar et al., JCO (2014)
Alteracions Genètiques en SMD
Pronòstic
Bejar et al., JCO (2014)
Alteracions Genètiques en SMD
Pronòstic
Prognostic models beyond IPSS-R
Model 1: 14 gens + edat + WBC, Hb, Plt, % blastes, Citogenètica IPSS-R
Model 2: 14 gens únicament (13/14 del Model 1)
Haferlach et al., Leukemia (2014)
Alteracions Moleculars en SMD
Alteracions Moleculars en SMD
Cargo et al., Blood (2015)
– Imatinib: LMC t(9;22)/BCR/ABL1
– ATRA: LAM M3 t(15;17)/PML/RARA
– LENALIDOMIDA: SMD 5q-• Mutacions de TP53 s’associen a pitjor resposta (Jädersten et al., JCO,
2011)
– AZACITIDINA: -7/7q-, cariotip complexe• Mutacions de TET2 s’associen a millor resposta (Itzykson et al.,
Leukemia, 2011)
• Cariotips amb >3 alteracions s’associen a baixa supervivencia (Hwanget al., Blood Research, 2014)
– LAM: inhibidors IDH1 mutat (AG-120, IDH305) i IDH2 mutat (AG221), inhibidors FLT3 (FLT3-ITD)…
– LAM: amb MLL reordenat
Nueva Propuesta 2.010 (n=2901)Nueva Propuesta CitogenéticaAlteracions Genètiques i Tractament
Stein i Tallman, Blood (2016)
• La major part dels gens mutats en pacients amb NH es troben en menys del 5% dels pacients
• Molt poques mutacions són específiques d’una NH
• Es detecten mutacions en individus d’edat avançada que són les mateixes que s’observen en pacients amb SMD (Genovese et al., NEJM 2014; Jaiswal et al., NEJM 2014)
• Es difícil introduir l’us de tests moleculars per al diagnòsticdels pacients:
– Valor pronòstic i selecció de tractaments dirigids a canvis genètics
Nueva Propuesta CitogenéticaAlteracions Moleculars
Morfologia ben imprescindible…
Maig (2015)
Diagnòstic
Pronòstic
Seguiment
Definir tractament
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Citologia Cito/Genètica
CG, NGS
PCR
CG, NGS
ARRAYSPCR
FISH
Últims 10 anys
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
CITOGENÈTICACITOLOGIA
NGS
NGS
NGS
Present-Futur
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
CITOGENÈTICAARRAYS
CITOLOGIA
NGS
NGS
NGS
CITOGENÈTICAARRAYS
CITOLOGIA
Present-Futur
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
Citologia+ CMF
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
FISHCariotip
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
Citologia+ CMF
FISH
SequencingArrays
Cariotip
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
Citologia+ CMF
FISH
ArraysSequencingArrays NGS(panell de gens)
Cariotip
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
Citologia+ CMF
Arrays NGS(panell de gens)
Citologia + CMF Cariotip
DIAGNÒSTIC, PRONÒSTIC, DEFINIR TRACTAMENT
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
Arrays NGS(panell de gens)
SENTIT COMÚ
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
CariotipCitologia + CMF
ÍndiceEns necessitem, tots fem falta…. millor sumar
ÍndiceEns necessitem, tots fem falta…. millor sumar
Citòleg Citòmetrista Citogenetista Molecular
ÍndiceEns necessitem, tots fem falta…. millor sumar
Gràcies!!!
RESEARCH TEAM: IJC Campus ICO-Hospital Germans Trias i Pujol.
Badalona. Spain
HEMATÓLOGOS: Servei d’Hematologia.
ICO-Hospital Germans Trias i Pujol. Badalona. Spain
“Si vols arribar ràpid camina sol,Si vols arribar lluny camina acompanyat”
(Proverbi Africà) “Jo faig el que no pot, i vostè fa el que jo no puc.
Junts podem fer grans coses”Teresa de Calcuta
Gràcies!!!
RESEARCH TEAM: IJC Campus ICO-Hospital Germans Trias i Pujol.
Badalona. Spain
HEMATÓLOGOS: Servei d’Hematologia.
ICO-Hospital Germans Trias i Pujol. Badalona. Spain
“Si vols arribar ràpid camina sol,Si vols arribar lluny camina acompanyat”
(Proverbi Africà) “Jo faig el que no pot, i vostè fa el que jo no puc.
Junts podem fer grans coses”Teresa de Calcuta
Gràcies!!!
https://m.youtube.com/watch?v=m456HkYRvkQ
Cargo et al., Blood (2015)
Alteracions Moleculars en SMD
Estudi retrospectiu de pacients amb citopenia i que varen ser diagnosticats de citopenia idiopàtica de significat incert (ICUS)Un 1.7% d’aquest pacients en 9 anys van evolucionar a SMD o
LAMMarcadors genètics (SNP arrays i NGS) per predir quins
pacients desenvoluparan SMD o LAM
Noves Guies del ELN
Noves Guies del ELN
Noves Guies del ELN
IPSS-M
>2016
“ Morfologia en el diagnòstic de les hemopaties malignes en el segle XXI.
És ? ”
NO!!!!!!...
“ Morfologia en el diagnòstic de les hemopaties malignes en el segle XXI.
És ? ”
NO!!!!!!...no és prescindible…
és molt imprescindible…però….ens necessiteu als genetistes,
citometristes….
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
ÍndiceEns necessitem, tots fem falta…. millor sumar
Diagnòstic-Seguiment-Sensibilitat
Citologia vs Cito/Genètica
¿Quina tècnica Utilitzarem en el Futur?
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Variabilitat intersobservadorCITOGENÈTICA
Diagnòstic
CQ EUROGENTEST. Citogenètica. Mieloide
Diagnòstic
Pronòstic
Seguiment
Definir tractament
ÍndiceCitologia vs Cito/Genètica
Citologia Cito/Genètica
Alteracions Genètiques en LLC
Pronòstic
Alteracions Genètiques en LLC
Pronòstic
Escola Citologia Hematològica Dra. Woessner
ÍndiceEns necessitem, tots fem falta…. millor sumar
Guttmann
ICO Badalona
HUGTP
UAB
IGTP
IMPPC
IrsiCaixa
BST
CEEISCAT
ICO-GTP
CLINIC
SANT PAU
Ens necessitem, tots fem falta…. millor sumar
Papaemmanuil et al., Blood (2013)
n=738, NGS en SP i/o MOPanell de 111 gens78% presenten una o mésmutacions
Alteracions Genètiques en SMD
Les early drive mutations, generalment de gens implicats en el splicing alternatiu, marquen el curs de la malaltia amb una gran
varietat de fenotips clínicsPapaemmanuil et al., Blood (2013)
Alteracions Moleculars en SMD
Pronòstic
CHIP. Clonal Hematopoiesis of IndeterminatePotential
Steensma et al., Blood (2015)
Citologia vs Cito/Genètica
“Mientras que los hombres se enamoran de lo que ven, las mujeres se enamoran de lo que escuchan y leen”
Els homes semblen més citòlegs i les dones més genetistes… al reves que en
la hematologia..
Citogenèticaconvencional
FISH
FISH multicolor
HGC
Arrays
1960-70
1980
1990
1990
2000
Cariotip, FISH, Citologia
Evolució dels Estudis Genètics
Citogenèticaconvencional
FISH
FISH multicolor
HGC
Arrays
1960-70
1980
1990
1990
2000
CGH/SNP arraysCariotip, FISH, Citologia
Evolució dels Estudis Genètics
Citogenèticaconvencional
FISH
FISH multicolor
HGC
Arrays
1960-70
1980
1990
1990
2000
SeqüenciacióCGH/SNP arraysCariotip, FISH, Citologia
Evolució dels Estudis Genètics
InteligentCoherent
Espavilada
Poc inteligentSuperficial
Poc espavilada
Citologia vs Cito/Genètica
ÍndiceEns necessitem
• No existeix un simple gen mutat en la majoria dels pacientsamb SMD
• La major part dels gens mutats en pacientes amb SMD es troben en menys del 5% dels pacients
• Les mutacions no són específique de les SMD
• Es detecten mutacions que s’observen en pacients ambSMD en individuus d’edat avanzada
• Es difícil l’us de tests moleculars pel diagnòstic delspacients
• Valor pronòstico i selecció de tractaments dirigids a canvisgenètics
Nueva Propuesta CitogenéticaValor de las Alteraciones Moleculares
Diagnòstic Integrat
CHIP. Clonal Hematopoiesis of IndeterminatePotential
Steensma et al., Blood (2015)
Nybakken y Bagg , J Molec Diag (2014)
30-50% presenten alteracions citogenètiquesAlteracions heterogénees
Alteracions Cromosòmiques en SMD
• Alteracions citogenètiques suggestives de SMD en casos amb citopenia persistent però en absencia de tretsmorfològics definitius de SMD:
Vardiman et al., Blood (2009)
-5/5q- t(11;16)(q23;p13)-7/7q- t(3;21)(q26;q22)i(17)(q10), del(17p) t(1;3)(p36;q21)-13, del(13q) t(2;11)(p21;q23)del(12p) inv(3)(q21q26)del(9q) t(6;9)(p23;q34)idic(X)(q13) Complexe amb alguna de les alteracions anteriors
NO
+820q-
-Y
Alteracions Citogenétiques Suggestives de SMD
MoltBó
Bó Intermig Dolent Moltdolent
Única:del(11q)
-Y
OS 60.8mHR 0.47(0.3-0.7)
Complex>3 alteracions
OS 5.7 mHR 4.37 (3.5-5.5)
NormalÚnica:del(5q)
del(12p)del(20q)
OS 48.5mHR 1
(0.8-1.3)
Doble amb 5q-
Única:7q-+8
i(17q)+19+21
Altres úniquesUnrelated clones
OS 25.0 mHR 1.59 (1.4-1.9)
Altres dobles
Única:der(3)(q21q26)
-7
OS 15.0 mHR 2.83 (2.2-3.7)
Doble amb–7/7q-
Complex3 alteracions
Nueva Propuesta Citogenética IPSS-RNova Clasificació Citogenètica
Comparison of two MDS Cohorts
(n=1,682)
Rose et al., BJH (2014)
E. Papaemmanuil et al.T. Haferlach et al.
p < 10-9
Alteracions Moleculars en SMD
T. Haferlach et al., Leukemia, 28, 241-247, 2014
Incidence PrognosisGene % mutated Gene Hazard RatioTET2 33.7 PRPF8 2.91
SF3B1 32.9 NPM1 2.42
ASXL1 23.8 RUNX1 2.40
SRSF2 17.5 TP53 2.34
DNMT3A 13.1 LAMB4 2.22
RUNX1 10.6 KRAS 2.10
U2AF1 7.7 NF1 1.82
ZRSR2 7.6 ASXL1 1.74
STAG2 7.5 ETV6 1.44
TP53 7.1 TET2 1.31
EZH2 5.5 STAG2 1.26
CBL 5.1 CBL 1.25
JAK2 4.8 EZH2 1.25
BCOR 4.0 NRAS 1.19
R. Bejar et al., NEJM, 364, 2496-2506, 2011
**
**
*
*
Valor Pronòstic de les Alteracions Moleculars
ÍndiceIndice
• Aspectos técnicos y metodológicos
• Valor pronóstico de las alteraciones citogenéticas
• Valor pronóstico de las alteraciones moleculares
• Integración de la citogenética & NGS
Greenberg et al., Blood (1997)¡¡¡¡Únicamente tiene en cuenta 4 alteraciones
citogenéticas distintas!!!!
Buen pronóstico
del(5q)del(20q)
Pérdida cromosoma YCariotipo normal
Pronóstico intermedio Resto
Mal pronósticoAlteraciones cr. 7
Cariotipo complejo (≥3 alteraciones)
IPSS (1997). Estratificación Citogenética
• Base de datos de pacientes con SMD primario procedentes de los registros (n=2901):
– IPSS (IMRAW) (Greenberg et al., Blood; 1997)
– Grupo Alemán-Austriaco (G-AA) (Haase et al., Blood; 2007)
– Grupo Cooperativo Español de Citogenética Hematológica (GCECGH) (Sole et al., Haematologica; 2005)
– International Working Group on MDS Cytogenetics from the MDS Foundation
Nueva Propuesta 2.010 (n=2901)Nueva Propuesta CitogenéticaNueva Propuesta Citogenética
MuyBueno
Bueno Intermedio Malo Muy Malo
Única:del(11q)
-Y
OS 60.8mHR 0.47(0.3-0.7)
Complejo>3 alteraciones
OS 5.7 mHR 4.37 (3.5-5.5)
NormalÚnica:del(5q)
del(12p)del(20q)
OS 48.5mHR 1
(0.8-1.3)
Doble con 5q-
Única:7q-+8
i(17q)+19+21
Otras únicasUnrelated clones
OS 25.0 mHR 1.59 (1.4-1.9)
Otras Dobles
Única:der(3)(q21q26)
-7
OS 15.0 mHR 2.83 (2.2-3.7)
Doble con –7/7q-
Complejo3 alteraciones
Nueva Propuesta Citogenética IPSS-RNueva Propuesta Citogenética
VERYGOOD INTERMEDIATE POOR
INT. VERY POOR
Proposal 2011Nueva Propuesta Citogenética
Las categorías citogenéticas se han utilizado para la estratificación de los pacientes en el IPSS-R
Schanz et al., JCO (2012)
Nueva Propuesta Citogenética
Greenberg et al., Blood (2012)
Nueva Propuesta IPSS-R
Variable pronóstica
0 0.5 1 1.5 2 3 4
Citogenética Muy bueno
Bueno Int. Malo Muy malo
Blastos MO %
≤2 >2-5% 5-10% >10%
Hb ≥10 8-<10 <8
Plaquetas ≥100 50-<100 <50
Neutrófilos ≥0.8 <0.8
Greenberg et al., Blood (2012)
Nueva Propuesta IPSS-R
ÍndiceIndice
• Aspectos técnicos y metodológicos
• Valor pronóstico de las alteraciones citogenéticas
• Valor pronóstico de las alteraciones moleculares
• Integración de la citogenética & NGS
Malcovati et al. Blood (2013)
Nuevas Guías del ELN
Importance of Genetic Study
Malcovati et al. Blood (2013)
?
Proposal 2011IPSS-R: Categorías citogenéticas
MuyBueno
Bueno
Intermedio
Malo
Muy Malo
Nueva Propuesta IPSS-R
Greenberg et al., Blood (2012)
Variable pronóstica
0 0.5 1 1.5 2 3 4
Citogenética Muy bueno
Bueno Int. Malo Muy malo
Blastos MO %
≤2 >2-5% 5-10% >10%
Hb ≥10 8-<10 <8
Plaquetas ≥100 50-<100 <50
Neutrófilos ≥0.8 <0.8
Nueva Propuesta IPSS-R
Greenberg et al., Blood (2012)
VERYGOOD INTERMEDIATE POOR
GOOD INT. VERY POOR
Proposal 2011IPSS-R: Blastos en MO
≤2% vs. >2-<5%
>10%
Nueva Propuesta IPSS-R
Greenberg et al., Blood (2012)
Definiciones Citogenética
Estudio molecular de 22 genes (incluyendo SF3B1, SRSF2, U2AF1, DNMT3A) sobre 288 pacientes con IPSS de bajo o riesgo intermedio
Bejar et al., JCO (2012)
• Mutaciones en el 71% de los pacientes• Mutaciones de DNMT3A no se asocian a mal pronóstico• EZH2, RUNX1, TP53 y ASXL1:
– Corta supervivencia, independiente del IPSS
• EZH2:
– Significado pronóstico en el multivariante
Alteraciones Moleculares en SMD
Coleman et al., Ann Rev Pathol (2012)
complexComplejo-TP53 mut
Alteraciones Moleculares en SMD
Valor Pronóstico de las Alteraciones Moleculares
Papaemmanuil et al., Blood (2013)
Papaemmanuil et al., Blood (2013)
Alteraciones Moleculares en SMD
Papaemmanuil et al., Blood (2013)
Hasta el momento NO se recomienda el estudio de los
marcadores moleculares
Alteraciones Moleculares en SMD
Haferlach et al., Leukemia (2014)
• n = 944, 104 genes, 47 genes con mutaciones• Edad media: 72.8 (range 23.3-90.8) • Pacientes con alteraciones citogenéticas aberrations: 31.4%• Pacientes con alteraciones moleculares: 89.5%
Alteraciones Moleculares en SMD
• Valor pronóstico del cariotipo y su utilidad para la confirmación del
diagnóstico en casos con alteraciones cromosómicas típicas de SMD
• Nuevos marcadores moleculares: pendiente de definir su aplicación en el
diagnóstico de los pacientes
• En casos con un cariotipo normal o sin divisiones, considerar la aplicación de
la SNP/CGH array para la detección de ganancias, pérdidas y UPD/CN-LOH
(SNP array)
• El IPSS e IPSS-R se basan en el resultado de la citogenética convencional, no
en los resultados de FISH ni los de SNP/CGH arrays
• Pendiente de actualizar el IPSS molecular (IPSS-M)
• A pesar de las nuevas tecnologías, la citogenética sigue siendo el gold
standard para la caracterización citogenética de los SMD
Conclusiones
MÉDULA ÓSEA
CITOGENÉTICACONVENCIONAL
BANCO DE TUMORES(CONSENTIMIENTO
INFORMADO)
CGH ARRAYSNP ARRAY
CITOLOGÍA
CITOMETRÍA DE FLUJO
BIOLOGÍAMOLECULAR
LMMCBCR/ABL
PDGFRA, PDGFRB
TET2, CBL,ASXL1, EZH2
Diagnóstico Integrado
Escola Citologia Hematològica Soledad WoessnerLab. Citogenètica Molecular Lab. Citologia Hematològica. Servei de PatologiaServei d’Hematologia ClínicaHospital del Mar. BarcelonaICO-Hospital Germans Trias i Pujol. Badalona
Si quieres llegar rápido anda solo, si quieres llegar lejos anda acompañado
Agradeciminetos
LAURAVERA
MAR EULALIA M. JOAO JORDI
MDS-CMML
ALL ALLNHL
Estrategia de Estudio de los SMD(presente-futuro)
Nybakken y Bagg , J Molec Diag (2014)
Casos sin mitosis
Alteraciones Genéticas en SMD
Walter et al., Leukemia (2013)
Cambio aminoácido
Alteraciones Genéticas en SMD
• Spliceosome: complejo de proteínas que elimina los intrones del pre-RNAm con el fin de obtener RNAm maduro. Este proceso recibe el nombre de splicing
Alteraciones Genéticas en SMD
• Aspectos técnicos y metodológicos
• Cambios citogenéticos y cambios genéticos
• Valor pronóstico del resultado citogenético: nueva propuesta de IPSS (IPSS-R)
Índice
VERYGOOD INTERMEDIATE POOR
GOOD INT. VERY POOR
Proposal 2011IPSS-R: Efecto de la edad
Sólo influye en categoría de buen pronóstico
Nueva Propuesta IPSS-R
Greenberg et al., Blood (2012)
GENES, ALTERACIONES CITOGENÉTICAS
GENES, ALTERACIONES CITOGENÉTICAS
GENES, ALTERACIONES CITOGENÉTICAS
GENES, ALTERACIONES CITOGENÉTICAS
GENES, ALTERACIONES CITOGENÉTICAS
Lindsley and Ebert, Blood (2014)
GENES, ALTERACIONES CITOGENÉTICAS
Lindsley and Ebert, Blood (2014)
Bejar and Steemsa 2014
Alteraciones Moleculares en SMD
Alteraciones Moleculares en SMD
Smith et al, Lancet Hematology (2015)
Alteraciones Moleculares en SMD
Smith et al, Lancet Hematology (2015)
Alteraciones Moleculares en SMD
Smith et al, Lancet Hematology (2015)
Tothova et al., Clinical Cancer Research (2013)
Estrategias de test genético mutacional
PRUEBAS RUTINA
CITOGENÉTICAFISH
CGH-SNP ARRAYS
Alteraciones Moleculares en SMD
Estrategias de test genético mutacional
Banco de muestras
PRUEBAS RUTINA
CITOGENÉTICAFISH
Alteraciones Moleculares en SMD
Estrategias de test genético mutacional
Investigación
CITOGENÉTICAFISH
CGH-SNP ARRAYS
Alteraciones Moleculares en SMD
Estrategias de test genético mutacional
Banco de muestras
CITOGENÉTICAFISH
X
Alteraciones Moleculares en SMD
Pronóstico
BUENO46,XX,5q-
MALO47,XX,+11
El tipo de alteraciones define el pronóstico
Pronóstico
BUENO46,XX,5q- [2]/46,XX [3]
MALO46,XX,5q- [5]
El número de células alteradas define el pronóstico
Pronóstico
BUENO46,XX,5q-
MALO48,XX,5q-,+11,+13
El número de alteraciones por célula define el pronóstico
Pronóstico
MALO
MUY MALO
El tipo de alteraciones, proporción de células alteradas y número de alteraciones por célula y la adquisición de alteraciones adicionales
durante el curso de la enfermedad define el pronóstico
Pronòstic
Pronòstic
• n = 738 pacients, 111 gens, 43 gens amb mutations• Edat media: 68 anys• Pacients amb alteracions citogenètiques: 33%• Pacients amb alteracions moleculars: 78%
Alteracions Moleculars en SMD
Papaemmanuil et al., Blood (2013)
Alteracions Moleculars
En un paciente amb sospita de SMD, senseblastes, ni alteracions citogenètiques ni altres marcadors definitius de SMD, la
detecció de mutacions en gens implicats en les SMD, permitiría establir el DIAGNÒSTIC
definitiu de SMD?
Alteraciones Moleculares en SMD
The New England Journal of Medicine, Decembre, 2014
Estudi mitjançant secuenciació del exoma de 17.182 persones que no presentavenuna neoplasia hematològica
Alteracions Moleculars
La majoria de les mutacions afecten a DNMT3A, TET2 i ASXL1.Les persones amb mutacions no presentaven ni SMD ni neoplasies hematològiques.
Increment en la mortalitat dels pacients amb mutacions i risc augmentat de malalties cardiovasculars
Alteracions Moleculars
Alteracions Moleculars
La majoria de les mutacions afecten a DNMT3A, TET2 i ASXL1.Les persones amb mutacions no presentaven ni SMD ni neoplasies hematològiques.
Increment en la mortalitat dels pacients amb mutacions i risc augmentat de malalties cardiovasculars
En pacients amb sospita de SMD, sense blastes, ni alteracions citogenètiques ni altresmarcadors definitius de SMD, la detecció de mutacions en gens implicats en les SMD, NO
permet establir el DIAGNÒSTIC definitiu de SMD
DIAGNÒSTIC INTEGRAT
Alteracions Moleculars
CHIP. Clonal Hematopoiesis of IndeterminatePotential
Steensma et al., Blood (2015)
If cancer were to be defined primarily by burden of disease, as hashistorically been used to distinguish MGUS from multiple myeloma and MBL from CLL, then CHIP, like MDS, would be considered cancer, since in CHIP a large fraction
of hematopoietic cells are clonal.
Menys sequenciar I que la gent aprengui o comptar blastes (AristotelesGiagounidis, ASH, San Francisco, 2014)
Lindsley i Ebert, Blood (2014)
Top Related