5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
1/24
BAB I
PENDAHULUAN
Senyawa organik alami yang dihasilkan oleh mikroorganisme
merupakan target skrining yang penting bagi berbagai senyawa bioaktif.
Senyawa dari actinomycetes, khususnya yang memiliki nilai di lapangan
sebagai produk bioaktif alami. Namun, tingkat penemuan zat baru dari
mikroorganisme, terutama dari actinomycetes, baru-baru ini mengalami
penurunan. Produk alami dari mikroba merupakan sumber penting bagi obat-
obatan baik yang telah ada dan yang baru. Antara penghasil metabolit
komersial penting, actinomycetes telah terbukti menjadi sumber produktif
dengan kelompok kecil saja dapat menghasilkan senyawa yang banyak.
Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh actinomycetes memiliki berbagai
aktivitas biologis seperti antibakteri, antijamur, antioksidan, antitumor dan
antivirus. Actinomycetes adalah kelompok yang paling signifikan dari
mikroorganisme yang dianggap sebagai produsen penting antibiotik dan zat
bioaktif yang penting lainnya.
Organisme ini menghasilkan keanekaragaman dan keunikan, kadang-
kadang senyawanya sangat kompleks yang menunjukkan potensi antibakteri
yang sangat baik dan biasanya toksisitas rendah. Genus Streptomyces
diidentifikasi sebagai sumber utama produk bioaktif alami yang mewakili
beberapa 70-80% dari semua senyawa terisolasi.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
2/24
Ada bukti bahwa metabolit tertentu, seperti asam klavulanat, mungkin
disintesis oleh strain dalam clade spesifik dan bahwa kemampuan untuk
mensintesis, misalnya, streptomisin dan metabolit tersebut tampaknya akan
didistribusikan secara acak di seluruh genus. Hubungan spesifik/infraspesifik
dalam Streptomycetes dan cara mereka tercermin dalam potensi biosintesis
untuk menghasilkan senyawa bioaktif secara signifikan dapat mempengaruhi
strategi untuk pencarian dan penemuan, skrining dan pengembangan
bioproses. Untuk memperluas studi genomik, Streptomycetes akan
mengungkapkan hubungan secara komprehensif, yang akan mengaktifkan
validasi metodologi saat ini (dari 16S rDNA Phylogenies untuk pasangan
DNA-DNA) dan mengarah pada pemahaman baru spesiasi, hubungan
filogenetik dan fungsi genom dalam metabolisme sekunder.
Dalam makalah ini, dijelaskan karakterisasi taksonomi actinomycetes
strain NSQu-25 diisolasi dari wilayah El-Quseima, wilayah Sinai, Mesir, yang
memiliki aktivitas antimikroba dan sitotoksik.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
3/24
BAB II
BAHAN DAN METODE
a. Pengumpulan sample
Koleksi Sampel: Lima belas sampel tanah dikumpulkan pada
periode Februari-April 2012 dari empat yang berbeda daerah (Wadi El-
Gudirat, El-Quseima, Gebel El-Maghara dan wilayah El-Hasana) Sinai
Utara. Sampel tanah diambil dengan kedalaman 15-20 cm ke dalam
permukaan tanah dan dimasukkan ke pra-label kantong plastik kecil steril
dan tertutup rapat. Sampel tersebut kemudian disimpan diudara kering
dan dilakukan pra-treatment dengan CaCO3(10 : 1 b/b) dan diinkubasi
pada suhu 37 C selama 4 hari .
b. Isolasi Biakan Actinomycetes dari Sampel Tanah:
Isolasi dan penghitungan koloni actinomycetes dilakukan dengan
menggunakan teknik difusi agar pada dua media yang berbeda. Media ini
adalah; actinomycetes isolation agar medium (Difco, New Jersey (NJ),
Amerika Serikat), yang mengandung (g/L): gliserol, 5.0, natrium
propionat, 4,0; sodium caseinate, 2.0; KH2PO4, 2.0; l-asparagin, 0.1,
MgSO4.7H2O, 0,1 dan FeSO4.7H2O 1,0 mg, Agar, 15 dan pH 7.0 dan
medium agar pati nitrat terdiri dari (g / L): pati larut, 20,0; NaNO3, 2.0;
K2HPO4 (anhidrat), 1.0, KCl, 0,5; MgSO4.7H2O, 0.5; CaCO3.2H2O, 2.0,
Agar, 15 dan pH 7,0. Isolasi media menggunakan CaCO3 and
cycloheximide (50g/ml) untuk meminimalkan kontaminasi jamur dan
diinkubasi pada 28C selama 7-10 hari. Satu gram tanah kering
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
4/24
disuspensikan ke dalam tabung reaksi yang mengandung 9 ml larutan
NaCl steril (0,85%) dan satu tetes Tween 80 dan 0,05% lauryl sulfat
(Sodium dodecyle sulfate, SDS) dan dipanaskan pada suhu 50C selama
10 menit.
Pengenceran pada 10-3, 10-5 dan 10-7 dari suspensi. Kemudian
dituang pada media isolasi kemudian diinkubasi selama 7 sampai 10 hari
pada suhu 28 C. Koloni yang terpilih dipindahkan dari kultur campuran
dari cawan petri ke medium agar dan masing-masing diinkubasi pada
suhu 28 C selama 7 hari lagi. Cawan petri yang mengandung kultur
murni yang disimpan pada suhu 4 C sampai pemeriksaan lebih lanjut
c. Skrining untuk Senyawa Bioaktif dari actinomycetes yang diisolasi
1. Skrining untuk Aktivitas antimikroba:
Isolat biakan actinomycete diuji aktivitas antimikroba mereka
terhadap organisme uji berikut; Bacillus subtilis ATCC 6633,
Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 7839,
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Candida albicans ATCC
10231, Aspergillus niger ATCC 16404 dan Aspergillus flavus ATCC
16883.
Nutrien agar (Merck, Darmstadt, Jerman) digunakan untuk
bakteri pada suhu 37 C selama 24 jam, Sabarouds agar (Lab M.,
Bury, Lancashire, Inggris) untuk khamir pada suhu 30 C selama 24
jam dan PDA (Merck, Darmstadt, Jerman) untuk jamur pada 25 C
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
5/24
selama 48 jam. Bioassay antimikroba dilakukan menggunakan
metode difusi agar.
2. Skrining untuk Aktivitas Sitotoksik:
Ekstrak kasar isolat bioaktif (tertinggi aktivitas antimikroba)
diuji in vitro untuk aktivitas sitotoksik terhadap sel tumor manusia
sebagai berikut; sel-sel kanker hati manusia (HEPG2), sel-sel kanker
usus besar manusia (HCT 116), sel-sel kanker payudara manusia
(MCF7) dan sel kanker serviks manusia (HELA). Sel uji yang
diperoleh dibekukan dalam nitrogen cair (-180 C) dari American Type
Culture Collection kemudian dipertahankan pada National Cancer
Institute (NCI), Kairo, Mesir, dengan seri sub-kultur. Uji antitumor dari
ekstrak kasar diuji dengan metode uji MTT.
d. Karakterisasi Taksonomi dari Isolat Actinomycete NSQu-25
Karakterisasi dari strain isolat ini sesuai dengan ISP (International
Streptomyces Project). Penelitian dilakukan menggunakan mikroskop
elektron. Isomer diaminopimelic acid dalam dinding sel dianalisis dengan
menggunakan metode Becker et al. Produksi pigmen melanin, reduksi
nitrat, pemanfaatan sumber C dan N dan karakteristik kultur dikerjakan
sesuai dengan pedoman yang ditetapkan oleh ISP. Karakteristik fisiologis
dan biokimia, seperti kegiatan lipase, protease, -amilase dan katalase
yang diuji.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
6/24
e. Identifikasi Molekuler dan filogenetik :
Strain NSQu-25 diinokulasi pada 50 ml medium ISP-2 broth dan
kultur diinkubasi pada 200 rpm pada suhu 28 C selama 24 jam. Total
DNA genomik diekstraksi sesuai dengan metode Sambrook et al. 16S
rRNA dari strain diamplifikasi dengan PCR menggunakan sistem PCR
GeneAMP 9700 dari PE Biosystems Terapan (Perkin Elmer, Ohio, USA).
f. Primers yang Digunakan :
F27, 5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3' dan R1492 5'-
TACGGYTACCTTGTTACGACTT- 3' menggunakan software BiolegioBV
(Biolegio, Nijmegen, Belanda). Produk PCR dimurnikan menggunakan
sebuah QIAquick PCR purification kit (Qiagen, Hilden, Jerman) dan
dideteksi menggunakan sistem dokumentasi gel, (Alpha-Imager 2200,
CA, USA). Produk PCR dirangkai menggunakan Unit Analisis Gene
dalam laboratorium genetik perusahaan Mesir. Sekuen DNA ditentukan
menggunakan ABI PRISM 377 DNA sequencer dan ABI PRISM Big Dye
Terminator Cycle Sequencing (Perkin Elmer, Ohio, AS). BLAST
(www.ncbi.nlm.gov) digunakan untuk mengetahui kesamaan DNA.
Beberapa deretan sekuen dan analisis filogenetik molekuler dilakukan
dengan menggunakan software BioEdit. Pohon filogenetik dibuat
menggunakan program TreeView .
g. Produksi fermentasi Metabolit bioaktif:
Streptomyces mirabilis strain NSQu-25 dikultivasi pada suhu
28 C dengan dikocok dengan kecepatan 200 rpm pada rotary inkubator
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
7/24
selama 6 hari pada suhu 30oC. Kultur tersebut dimasukkan ke dalam
Erlenmeyer 250 ml yang berisi 50 ml medium fermentasi. Medium
tersebut mengandung (g/L): starch; 20.0, NaNO3; 2.0, K2HPO4; 1.0,; 0,5,
MgSO4 7H2O; 0,5, KCl; 0,5, larutan garam 1,0 ml CuSO4 5H2O (0,64
g/L), FeSO4 7H2O (0,11 g/L), MnCl2 4H2O (0,79 g/L) dan ZnSO4
7H2O (0,15 g/L)]. Media disesuaikan pada pH 7,0. Inokulasi dilakukan
dengan menggunakan suspensi spora dari kultur NSQu-25 pada media
ISP-2. Dua puluh tujuh liter kultur cair dikumpulkan dan disaring melalui
kertas saring Whatman No.1, diikuti dengan sentrifugasi pada 5000 rpm
selama 20 menit. Filtrat jernih disterilkan dengan menggunakan saringan
Millipore 0,22 m dan diuji untuk aktivitas antimikroba dan sitotoksik nya.
h. Ekstraksi dan Pemurnian Senyawa Bioaktif:
Kultur cair ( 25 L ) diperoleh setelah filtrasi dengan ekstraksi dua
kali dengan etil asetat dan kemudian konsentrasikan pada tekanan
tereduksi menggunakan rotary evaporator ( Bchi, R - 114, Swiss ). Suhu
dipertahankan kurang dari 50 C untuk menghasilkan 3,6 g ekstrak
kasar. Ekstrak kasar ini dilarutkan dalam 5 ml metanol dan menggunakan
kromatografi kolom (2,5 i.d. x 50 cm,silika gel 60; Merck ) sebagai fase
diam. Kolom dielusi menggunakan polaritas gradien dari sistem pelarut;
etil asetat : metanol (10:1 sampai 1:10 ), lima puluh ml fraksi dikumpulkan
dan proses fraksinasi dimonitor menggunakan analisis KLT. Fraksi yang
ditunjukkan mirip dengan profil KLT memberikan total akhir 13 fraksi (S1-
S13) dikumpulkan masing-masing pada 15, 80, 140, 75, 45, 130, 59, 150,
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
8/24
71, 96, 125, 215 dan 520 mg. Evaluasi bioaktivitas dari fraksi yang
diperoleh diuji aktivitas antimikrobanya terhadap B. subtilus(ATCC 6633)
sebagai uji organisme yang paling sensitif untuk ekstrak kasar asli melalui
metode difusi agar. Fraksi bioaktif (fraksi yang memiliki aktivitas
antibakteri tertinggi) yang diuji lagi aktivitas sitotoksiknya terhadap sel
kanker usus besar manusia ( HCT116 ) sebagai sel kanker yang paling
sensitif untuk ekstrak kasar asli oleh pengujian MTT. Fraksi yang
menunjukkan aktivitas sitotoksik yang diaplikasikan pada kolom sephadex
LH-20 (2 x 15 cm) menggunakan metanol 100 % sebagai pelarut eluen
(500 ml) dan terakhir, 5 ml dari fraksi dikumpulkan. Sub-fraksi, 61 ( 190
mg ) dipisahkan sebagai single band (kanal tunggal) untuk menghasilkan
senyawa aktif murni.
i. Elusidasi Struktur dariSenyawa Murni yang Diisolasi:
Elusidasi struktur dari fraksi murni yang diperoleh (190 mg)
dicapai melalui analisis spektroskopis seperti Spektra FTIR yang dicatat
menggunakan metode KBr dari Fourier Transform Infrared (JASCO
FT/IR-6100). Selain itu, spektrum NMR yang juga dinilai dan dicatat pada
spectrometer NMR Varian Mercury VX-300 beroperasi pada 300 MHz
untuk H di CDCl3 menggunakan TMS sebagai standar internal. Selain itu,
spektrum EIMS dari fraksi murni juga dipertimbangan dan diperoleh
dengan bagian Direct Inlet DI-50 yang terhubung dengan massa analyzer
Shimadzu GC/MSQP5050, di pusat mikro-analitis, Fakultas Sains,
Universitas Kairo, Mesir.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
9/24
BAB III
PEMBAHASAN
a. Karakterisasi Taksonomi dari Isolat Actinomycetes, NSQu 25
Taksonomi Konvensional : Studi Mikro-morfologi dari isolat
actinomycetes, NSQu - 25 melalui mikroskop cahaya ( x400 ) dan
pemindaian mikroskop elektron ( x6.500 ) mengungkapkan bahwa , rantai
spora strain adalah spiral dengan permukaan spora yang berduri
(Gambar 1a , b). Seluruh sel hidrolisat dari strain ini mengandung LL-
diaminopimelic acid ( LL - DAP ) dan glisin menunjukkan bahwa, strain
memiliki dinding sel tipe-kemo I tetapi tidak ada gula karakteristik yang
dapat dideteksi . Analisis komposisi dinding sel adalah salah satu metode
utama yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi karakteristik
kemotaksonomi Streptomyces, kehadiran LL - DAP di dinding sel juga
menandakan bahwa strain ini adalah Streptomyces . Karakteristik kultur
dari isolat actinomycete, NSQu - 25 ditumbuhkan pada berbagai media
ISP dan non - ISP media (Tabel 1) menunjukkan bahwa hifa udara strain
adalah abu-abu. Oleh karena itu, hifa tersebut ditetapkan sebagai seri
abu-abu dengan substrat miselium sedikit kuning juga tidak ada pigmen
terdifusi yang dicatat untuk isolat ini. Sifat fisiologis dan biokimia;
pemanfaatan sumber C- dan N-, toleransi terhadap NaCl, pH
pertumbuhan, suhu pertumbuhan, inhibitor pertumbuhan dan sensitivitas
terhadap antibiotik dipelajari (Tabel 2). Kultur dan sifat fisiologis strain
isolat dibandingkan dengan yang dilaporkan untuk actinomycetes
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
10/24
sebagaimana yang dijelaskan dalam Bergeys Manual tentang Penentuan
Bakteriologi.
Tabel 1. Karakteristik kultur Streptomyces mirabilis, NSQu-25 pada media
kultur yang berbeda
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
11/24
Tabel 2. Karakteristik morfologi, fisiologi, dan biokimia Streptomyces
mirabilis,NSQu-25
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
12/24
b. Rangkaian Gen 16S rRNA dan Analisis Filogenetik:
Untuk mengkonfirmasi identifikasi isolat strain, urutan 16S rRNA
dari isolat lokal, NSQu-25 dibandingkan dengan urutan 10 Streptomyces
spp. melalui beberapa penjajaran urutan (multiple sequence aligment).
Pasangan primer, F27/R1492 digunakan untuk memperkuat fragmen dari
ukuran yang diharapkan DNA genomik (1500 bp); DNA ini diisolasi dari
kontrol positif strain Streptomyces griseusATCC 10137. Pasangan primer
ini terutama digunakan untuk memperkuat 27-bp dan fragmen 1492-bp.
Analisis eksperimental amplifikasi PCR dipelajari melalui elektroforesis
gel agarosa (Gambar 2). Hasil yang diperoleh dalam persetujuan dengan
Edward yang menemukan bahwa primer ini spesifik untuk bakteri.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
13/24
Deretan dari urutan nukleotida (540 bp) Streptomyces mirabilis,
NSQu-25 dilakukan melalui pencocokan dengan 16S rRNA gen
melaporkan urutan gen-gen dalam bank gen. Pohon filogenetik berasal
dari matriks jarak menggunakan metode neighbor-joining (Gambar 3).
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
14/24
Dari hasil tersebut, urutan 16S rRNA adalah 99% identik dengan
Streptomyces mirabilis Uz1010 dan kemudian ditetapkan sebagai
Streptomyces mirabilis strain NSQu-25. Sistem identifikasi modern
Streptomyces didasarkan pada data sekuen 16S rDNA, yang telah
memberikan informasi tentang sistematis Streptomyces dan kemudian
telah digunakan untuk mengidentifikasi beberapa isolat baru
Streptomyces.
Kesimpulannya, analisis filogenetik ditambah dengan identifikasi
konvensional isolat lokal, NSQu-25 menunjukkan bahwa, strain yang
paling dekat hubungannya adalah Streptomyces mirabilis. Oleh karena
itu,Streptomyces mirabilisNSQu-25 diusulkan sebagai namanya.
c. Studi Spektroskopik pada Senyawa Bioaktif Utama:
Dalam penelitian ini, antibiotik yang diproduksi oleh isolat lokal,
adalah unsur pemisahan bioaktif utama dari kultur filtrat dan strukturnya
ditentukan oleh teknik spektroskopi. Senyawa diisolasi sebagai cairan
berminyak tidak berwarna, yang larut dalam etanol, etil asetat, kloroform,
n-heksana, tetapi tidak larut di dalam air. Senyawa isolat memberikan
reaksi positif (warna ungu) dengan konsentrasi H2SO4 dan larutan vanillin
0,5% dalam metanol/asam sulfur/asam asetat (2:1:1), tetapi tidak dengan
reagen ninhidrin, FeCl3 dan SbCl3 dalam KLT. Spektrum IR. (Gbr. 4)
memperlihatkan puncak pada v 2981, 2936, 2868, 1731, 1124 and 1074
cm-1 yang menyatakan keberadaan dari berkas karbonil dan ikatan kuat
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
15/24
C-O. Dalam analisis GLC menunjukkan keberadaan komponen senyawa
utama tunggal; dengan retensi waktu 25.19 menit (Gbr. 5a). Rumus
molekulernya adalah berdasarkan C24H38O4 dalam EIMS (Gbr. 5b)
memperlihatkan keberadaan dari ion molekuler (M+) pada m/z 390
Dalton, ion penting lainnya adalah terdeteksi pada m/z 279, 167 dan 149
(titik dasar puncak). Formula kimia dari senyawa ini menyarankan
keberadaan setara dari enam ikatan ganda. Spektrum H NMR (Gbr. 6)
memperlihatkan proton aromatic pada 7.68 (2 H, dd, J=5.8, 3 Hz) dan
7.54 (2 H, dd, J=5.8, 3 Hz). Adanya dua ikatan ganda masing-masing
menunjukkan kesetaraan dua proton aromatik, menyarankan keberadaan
substituen bantalan cincin benzen ortho-disubstitusi yang sama pada
posisi keduanya. Ada juga 2 proton multiplet pada 4.21,untuk proton
terikat dari sebuah hubungan C-O. Selain itu, spektrum memperlihatkan
multiplet sekeliling 0.89-1.66 untuk angka dari kelompok metilen dan
metil.
Dari data spektroskopi yang disebut di atas, struktur molekuler
dari senyawa isolat adalah ditentukan menjadi di-(2-ethylhexyl) phthalate
(DEHP) (Gbr.7). Senyawa phthalate adalah petrokimia yang digunakan
pada pembuatan plastik atau jenis pelarut dari produksi industri. Namun,
banyak turunan phthalate telah diisolasi dari organisme yang hidup di
tanah dan laut termasuk tanaman, fungi dan kultur bakteri, terutama
termasuk juga marga Streptomyces. Di-(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP)
telah menggambarkan dari Streptomyces bangladeshiensis. Turunan
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
16/24
phthalate lainnya telah diisolasi dari jenis Streptomyces, seperti dibutyl
phthalate.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
17/24
d. Aktifitas Biologi dari Spektrum Antimikroba Senyawa Isolat (DEHP):
Konsentrasi penghambatan minimun (MIC) dari senyawa murni
(Tabel 3) membuktikan aktif terhadap bakteri gram positif; Bacillus subtilis
ATCC 6633 dengan MIC 3.5 g/ml, Staphylococcus aureus ATCC 6538
dengan MIC 1.47 g/ml dan Streptococcus equosemens ATCC 12388
dengan MIC 2.37 g/ml tetapi penghambatan terhadap bakteri gram
negatif rendah; Escherichia coli ATCC 7839 dengan MIC 5.4 g/ml,
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
18/24
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 dengan MIC 6.2 g/ml dan
Closteridium perfrigens ATCC 3626 dengan MIC >50 g/ml. Disisi lain,
senyawa tersebut memiliki efek yang kuat terhadap C. albicanswith MIC
1.2 g/ml sedangkanA. niger andA. flavusbahkan kurang rentan untuk
senyawa tersebut. Aktivitas antimikroba isolat DEHP dari Streptomyces
avidinii strain SB9 terhadap berbagai mikroorganisme sesuai dengan
laporan sebelumnya membuktikan bahwa DEHP adalah senyawa aktif
biologis. Kemampuan aktifitas antimikroba adalah juga berdasarkan dari
mikroorganisme Streptomyces bangladeshiensis.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
19/24
e. Aktifitas Sitotoksik dari Senyawa DEHP:
Senyawa isolat dievaluasi untuk aktifitas sitotoksik terhadap jumlah sel
kanker manusia (Gbr. 8), DEHP menunjukkan kekuatan sitotoksik
terhadap sel kanker usus manusia (HCT 116) dengan IC50 3.681 g/ml
dan sel kanker payudara manusia (MCF7) dengan IC50 6.941 g/ml.
Sitotoksik menengah terhadap sel kanker hati manusia (HEPG2) dengan
IC50 9.028 g/ml. Disisi lain, tidak aktif terhadap sel kanker serviks
manusia (HELA).
Senyawa DEHP dianggap sebagai agen pro inflamasi pada studi lainnya.
Senyawa yang sama diisolasi dari tanaman Aloe vera dan ditemukan
memiliki efek antileukimia dan antimutasi genetic. Urutan gen rRNA 16S
dari Streptomyces mirabilis NSQu-25 dibandingkan dengan jenis
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
20/24
Streptomyces lain. Hal itu telah memperlihatkan nilai kemiripan tertinggi
mencapai 99% dengan jenis Streptomyces yang berbeda (Gbr. 3)
sebagai pembeda untuk mereka dalam karakterisasi morfologi dan
utilisasi karbon dimana batas deteksi yang berbeda dari metode
pembuatan ada tidaknya perbandingan yang sulit. Disisi lain, nilai
kemiripan diantara isolat dan produsen DEHP yang dikenal dari strain
Streptomyces adalah rendah. Oleh karena itu, Streptomyces mirabilis
NSQu-25 disarankan menjadi jenis baru Streptomyces.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
21/24
BAB IV
KESIMPULAN
Kesimpulan penelitian ini adalah :
1. di-(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) merupakan senyawa bioaktif utama
yang diproduksi dalam kultur filtrat yang baru terisolasi dari tanah Mesir
yang mengandung Streptomyces (Streptomyces mirabilis strain NSQu-
25).
2. Identifikasi hasil strain dilakukan menurut morfologi spora dan jenis
dinding sel-kemo, yang menunjukkan bahwa strain ini adalah
streptomycetes. Selanjutnya kultur, karakteristik fisiologis dan analisis
filogenetik dari 16S rRNA gen yang diisolasi ini menunjukkan bahwa
strain ini identik dengan Streptomyces mirabilis Uz1010 yang menunjukan
bahwa isolat tersebut adalah Streptomycesmirabilis strain NSQu-25.
3. Senyawa isolat memiliki aktivitas sebagai antimikroba terutama terhadap
bakteri Gram-positif dan khamir tetapi dapat juga menghambat bakteri
gram-negatif dengan aktivitas yang rendah serta memiliki aktivitas
sitotoksik terhadap beberapa sel karsinoma manusia. Studi spektroskopi
Fourier Transform Infrared (FTIR), Kromatografi Cair Gas (GLC), massa
GC MS dan H resonansi (HNMR) menunjukkan bahwa senyawa hasil
isolasi (rumus molekul C24 H38 O4, berat molekul 390 Dalton) dan
ditemukan identik untuk di-(2-ethylhexyl) phthalate.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
22/24
DAFTAR PUSTAKA
El-Sayed, M. H. 2012. Di-(2-ethylhexyl) Phthalate, a Mayor Bioactive
Metabolite with Antimicrobial and Cytotoxic Activity Isolated from the
Culture Filtrate of Newly Isolated Soil Streptomyces (Streptomyces
mirabilis Strain NSQu-25). World Applied Sciences Journal. Universitas
Al-Azhar. Mesir.
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
23/24
MIKROBIOLOGI TERAPAN
MAKALAH
OLEH :
KELOMPOK V
ANDI ULFAH MAGEFIRAH RASYID (P2500213411)
ZAHIRA AMODY (P2500213412)
JEF GISHARD KRISTO KALALO (P2500213428)
PROGRAM PASCASARJANAFAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HASANUDDINMAKASSAR
2013
5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina
24/24