7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 1/23
5. Ada berapa macam teknik Isolasi? Sebutkan dan Jelaskan masing-masing teknik tersebut.
6. Bagaimana cara transfer kultur dari medium cair ke agar tegak ? Jelaskan.
7. Faktor apa saaka! "ang perlu diper!atikan dalam proses kulti#asi mikroba? Jelaskan.
• $etode %iringan &oresan 'streak-plate met!od(
$edium dicairkan lalu di dinginkan !ingga padat. )emudian
goreskan ose "ang berisi mikroorganisme ke permukaan agar. Jika goresan
sempurna maka bakteri indi#idual akan terpisa!* kemudian koloni tunggal
dipisa!kan 'Sumbali* +,,(.• $etode piring tuang ' pour met!od(
ampuran antara agar cair dan inokulasi dituangkan ke ca/an petri
dibiarkan padat* kemudian koloni tunggal dapat diperole! 'Sumbali* +,,(.
• $etode permukaan 'spread met!od(
$asukkan inokulasi pada permukaan ca/an petri kemudian
dipadatkan dengan media agar. Inokulasi disebar atau diratakan dengan
spreader* "ang pada ak!irn"a semua mikroba berada diatas permukaan
'Sumbali* +,,(.
0abung "ang berisi medium agar penu! dibiarkan memadat dalam keadaan
tegak. )emudian dengan menggunakan ose "ang suda! disterilisasi dimasukkan
kedalam tabung brot! "ang berisi kultur. Setela! itu ose "ang suda! memiliki
mikroba dimasukkan ketenga!-tenga! agar tegak. Semua prosedur dari a/al !ingga
ak!ir !arus dilakukan secara aseptis 'Sumbali* +,,(.
Faktor-faktor "ang mempengaru!i adala! '1ee* +,,6(. 2
3. Sifatsetiapenismikroba "ang akandiisolasi.
+. 0empat!idupasalmikroba.
4. $edium pertumbu!an "ang sesuai.
• 0emperatur 2 enim akan menalankan peranann"a !an"a pada temperatur tertentu
'temperatur optimal(.
• )onsentrasinutrisi 2 menentukan kecepatan transfer nutrient ke dalam sel. Jika konsentrasi
nutriren dan makan sedikit maka ketersediaan nutrisi di dalam sel akan sedikit.
• p 2 transfer enim dan nutrient di dalam sel mikroba sangat peka ter!adap p.
• 0ekanan osmosis 2berpengaru! pada ketersediaan air bagi sel mikroba.
• ksigen 2 mempengaru!i perkembangan mikroba "ang bersifat aerob maupun anaerob.
• )elembapan 2 mikroba !an"a dapat tumbu! pada lingkungan "ang memiliki kadar
air8kelembapan "ang tinggi
9 9.ara menginkubasi mikroba.
5. ara menginokulasi mikroba.
6 6. ara mengui ba!/a mikroba "ang diisolasi adala! kultur murni dan sesuai dengan
"ang dimaksud.
7.ara memeli!ara agar mikroba "ang tela! diisolasi merupakan kultur murni.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 2/23
DIAGRAM ALIR
:. Sebutkan dan elaskan teknik-teknik preser#asi mikroba "ang digunakan dalam
pembuatan stok kultur;
METODE STREAK PLATE GORESAN KUADRAN
• 0ransfer periodik media segar 2 media kultur mikroba disimpan pada tabung
dalam inter#al /aktu. Seperti pen"impanan bakteri !eterotropis dapat
berta!an sekitar beberapa minggu atau bulan pada medium segar 'Sarker*
+,,6(..
• )ultur dengan min"ak mineral 2 mempreser#asi mikroba dengan cara
menutupi agar miring dengan min"ak mineral steril. 0eknik ini bisa
men"impan mikroba 35 sampai +, ta!un 'Sarker* +,,6(..
• 1"op!iliation 2 teknik "ang paling efektif untuk men"impan kultur* dengan
cara membekukan sel dan sel "ang beku tersebut dimasukkan kebotol kecil
kemudian direndam di dalam campuran es batu dan alko!ol. 0eknik ini dapat
membuat kultur berta!an lebi! dari +, ta!un 'Sarker* +,,6(.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 3/23
<ibuat pembagian sektor menadi 9 kuadran
se dipiarkan
<iambil 3 ose kultur dari agar miring 'secaraaseptis(
<igoreskan pada permukaan agar sektor 3 secara ig-ag
<ibuat goresan secara ig-ag dari sektor + ke 4 dan 4 ke 9
<iberi label pada ca/an petri
<iinokulasi pada su!u 4,oselama 9: am
a/an petri berisi media
asil
METODE SPREAD PLATE
<iencerkan
<iambil suspensi sampel ,*3ml
<iinokulasi pada ca/an petri
<iratakan dengan spreader
<iberi label pada ca/an petri
<iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 4/23
Sampel
asil
METODE POUR PLATE
<iambil suspensi sampel 3ml
<iinokulasi pada ca/an petri
<ituang dalam medium agar steril bersu!u 9,o-5,o
<iputar mengukuti pola angka :
<iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 5/23
Sampel
asil
TRANSFER KULTUR DARI TABUNG REAKSI KE TABUNG REAKSI
A. MEDIUM AGAR MIRING KE MEDIUM AGAR MIRING
se dipiarkan
<iambil 3 ose kultur dari tabung berisi media agar miring 'secaraaseptis(
<iinokulasi pada tabung berisi media agar miring secara ig-sa dari ba/a! ke atas
<iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 6/23
Sampel
asil
Sampel
TRANSFER KULTUR DARI TABUNG REAKSI KE TABUNG REAKSI
B. MEDIUM AGAR MIRING KE MEDIUM AGAR TEGAK
se dipiarkan
<iambil 3 ose kultur dari tabung berisi media agar miring 'secaraaseptis(
<iinokulasi pada tabung berisi media agar tegak dengan menusuk tepat = bagian dasar media
<iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 7/23
asil
TRANSFER KULTUR DARI TABUNG REAKSI KE TABUNG REAKSI
C. MEDIUM AGAR MIRING KE MEDIUM BROTH
se dipiarkan
<iambil 3 ose kultur dari tabung berisi media agar miring 'secaraaseptis(
<iinokulasi pada tabung berisi media brot!
<iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 8/23
Sampel
asil
TEKNIK PRESERVASI KRIOGENIK
<ibuat larutan stok gliserol dengan konsetrasi 6,>
<imasukkan ,*5 kultur dan ,*5ml gliserol ke dalam tube steril
<i#orte
<ibekukan pada su!u -:,o
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 9/23
DAFTAR PUSTAKA
Alat dan ba!an
asil
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 10/23
</idoseputro* <. +,,5. Dasar-dasar Mikrobioligi.Jakarta 2<ambatan
&andar* Indra/ati. +,,6. Mikologi Dasar dan Terapan.Jakarta 2@a"asanbor Indonesia
endar"ono* <. +,,6. Teknik Kultur Jaringan. @og"akarta2 %enerbit)anisius
1ee*@uan ). +,,6. Microbial Biotechnology : Principles and Aplication. Singapore 2 B J
nterprise
Sarker* Sat"ait. +,,6. Natural Products Isolation. 0oto/a 'Ce/ Jerse"( 2 uman %ress IncSumbali* &reeta. +,,. Principles o Microbiology. Ce/ <el!i 2 0ata $c&ra/ ill
Suria/iria* D. +,,5. Mikrobiologi Dasar . Jakarta 2 %apas SinarSinanti
DAFTAR PUSTAKA TAMBAHAN
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 11/23
DATA HASIL PENGAMATAN
Baird* Eosamund. +,34+. !andbook o "ulture Media or #ood and $ater Microbiology.
1ondon 2 Eo"al Societ" of !emistr"
ampbell* Cell. +,,7. Biology : Jilid %. Jakarta 2 %0 &elora Aksara %ratama
$ac!mud* $. +,,:. Teknik Penyi&panan dan Pe&eliharaan Mikroba'Bogor 2 Balai
%enelitian Bioteknologi 0anaman %angan.
%elcar* $ic!ael. +,,:. Dasar-Dasar Mikrobiologi .Jakarta 2 Dni#ersitas Indonesia.S!arma* %.<. +,,7. Microbiology. Ce/ <el!i 2 Eastogi %ublications
Sil#a* Ceusel". +,34. Microbilogical ()a&ination Methods o #ood and $ater : A
*aboratory Manual . as!ington <. 2 0a"lor Francis &roup
ild* <a#id. +,,5. 0!e Immunoassa" andbook. 1ondon 2 lse#ier
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 12/23
3. $edium Agar $iring ke $edium Agar $iring ;
Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli)eterangan 2)eterangan 2
+. $edium Agar $iring ke $edium Agar 0egak ;
Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli
)eterangan 2 )eterangan 2
4. $edium Agar $iring ke $edium Brot! ;
SpreadingSpreading
0idak ada kontaminan8
inokulasi dari medium agar
miring ke agar miring
2 0idak ada kontaminan8
inokulasi dari medium agar
miring ke agar miring
BeadedBeaded
0idak ada kontaminan8inokulasi dari medium agar
miring ke agar tegak
0idak ada kontaminan8inokulasi dari medium agar
miring ke agar tegak
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 13/23
Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli
)eterangan 2 )eterangan 2
9. Cama $ikroorganisme 2 S.Aureus
0ipe media "ang
digunakan
Cama $edia %ertumbu!an
'G( atau '-(
)ontaminasi
'G( atau '-(
Agar 0egak CA G -
Agar $iring CA G -
Brot! CB G -
Cama $ikroorganisme 2 .oli
0ipe media "ang
digunakan
Cama $edia %ertumbu!an
'G( atau '-(
)ontaminasi
'G( atau '-(
Agar 0egak CA G -
Agar $iring CA G -
Brot! CB G -
5. Ba!as data "ang anda perole! pada ketiga media "ang digunakan;
0umbu!0umbu!
0idak ada kontaminan8
inokulasi dari medium agar
miring ke medium brot!
0idak ada kontaminan8
inokulasi dari medium agar
miring ke medium brot!
• $edium Agar $iring ke $edium Agar $iring
a. S. Aureus%ada medium agar miring ke medium agar miring mikroba "ang diamati berupa
S.Aureus dapat tumbu! dengan baik sesuai dengan pola goresan ose "ang digoreskan
pada bagian pinggir dari agar dengan karakteristik pertumbu!an "aitu spreading.
%ada medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.
b. .oli
Begitu pula dengan bakteri .oli* pada medium agar miring ke medium agar
miring bakteri .oli dapat tumbu! dengan baik sesuai dengan pola goresan ose "ang
digoreskan pada bagian tenga!-tenga! dari agar dengan karakteristik pertumbu!an
"aitu spreading. %ada medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.
• $edium Agar $iring ke $edium Agar 0egak
a. S.Aureus
%ada medium agar miring ke medium agar tegak mikroba "ang diamati berupa
S.Aureus tidak dapat tumbu! dengan baik pada alur masukn"a ose. an"a tumbu!
satu koloni saa "ang dapat diamati pada alur dimasukkann"a ose. al ini
dikarenakan baketri S.Aureus merupakan bakteri aerob "ang membutu!kan oksigen
untuk pertumbu!ann"a* sedangkan medium agar tegak untuk pertumbu!an bakteri
anaerob. %ada medium agar tegak* bakteri S.Aureus !an"a mendapatkan sedikit
oksigen dari alur masukn"a ose dan tidak dapat tumbu! men"ebar ke bagian agar
lainn"a. )arakteristik pertumbu!an S.Aureus pada agar tegak "aitu beaded. %ada
medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.
b. .oli
%ada medium agar miring ke medium agar tegak mikroba "ang diamati berupa
.oli tidak dapat tumbu! dengan baik pada alur masukn"a ose. an"a tumbu!
satu koloni saa "ang dapat diamati pada alur dimasukkann"a ose. al inidikarenakan baketri .oli merupakan bakteri aerob "ang membutu!kan oksigen
untuk pertumbu!ann"a* sedangkan medium agar tegak untuk pertumbu!an bakteri
anaerob. %ada medium agar tegak* bakteri .oli !an"a mendapatkan sedikit
oksigen dari alur masukn"a ose dan tidak dapat tumbu! men"ebar ke bagian agar
lainn"a. )arakteristik pertumbu!an .oli pada agar tegak "aitu beaded. %ada
medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.
• $edium Agar $iring ke $edium Brot!
a. S.Aureus
%ada medium brot! bakteri S.Aureus dapat tumbu! dan kolonin"a berkumpul
pada bagian dasar tabung reaksi dan sebagian "ang men"ebar se!inggamen"ebabkan air pada medium brot! menadi keru!. %ada medium brot! bakteri
S.Aureus masi! dapat mendapatkan oksigen se!ingga dapat memicu
pertumbu!ann"a dengan cukup baik. )oloni bakteri "ang ada pada medium brot!
tidak seban"ak pada medium miring dikarenakan pada medium miring bakteri
S.Aureus sebagai bakteri aerob mendapatkan oksigen secara optimal tanpa ada "ang
menutupin"a untuk bernapas. %ada medium brot! tidak terdapat kontaminasi
mikroba lain.
b. .oli
%ada medium brot! bakteri .oli dapat tumbu! dan kolonin"a berkumpul pada
bagian dasar tabung reaksi dan sebagian "ang men"ebar se!ingga men"ebabkan air
pada medium brot! menadi keru!. %ada medium brot! bakteri .oli masi! dapatmendapatkan oksigen se!ingga dapat memicu pertumbu!ann"a dengan cukup baik.
)oloni bakteri "ang ada pada medium brot! tidak seban"ak pada medium miring
dikarenakan pada medium miring bakteri .oli sebagai bakteri aerob mendapatkan
oksigen secara optimal tanpa ada "ang menutupin"a untuk bernapas. %ada medium
brot! tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 14/23
6. $etode Streak %late
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 15/23
Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli
)eterangan 2 )eterangan 2
7. Cama $ikroorganisme 2 S.Aureus
Bentuk %ertumbu!an )oloni )eterangan
Bentuk $edium 0ak ada kontaminasi
le#asi Irregular 0ak ada kontaminasi
%ermukaan )asar 0ak ada kontaminasi
$argin 1obate 0ak ada kontaminasi
Cama $ikroorganisme 2 .oli
Bentuk %ertumbu!an )oloni )eterangan
Bentuk %oint 'titik( 0ak ada kontaminasi
le#asi Spindle 0ak ada kontaminasi
%ermukaan )asar 0ak ada kontaminasi
$argin 1obate 0ak ada kontaminasi
:. Ba!as data "ang anda perole! dili!at dari bentuk pertumbu!an kolonin"a.
0idak ada kontaminasi0idak ada kontaminasi
• S.Aureus
%ada bakteri S.Aureus* pada kuadran I masi! tumbu! dengan baik dan terdapat
ban"ak sekali koloni "ang polan"a mengikuti pola ig-ag goresan ose. 0etapi
pertumbu!ann"a !an"a sampai kuadran II saa. Sedangakan pada kuadran III dan
IH suda! tidak ada lagi koloni besar maupun koloni kecil dari bakteri S.Aureus. al
ini dapat disebabkan ole! beberapa faktor. %ertama* "aitu karena pembakaran ose*
dimungkinkan saat pembakaran ose "ang ketiga kalin"a saat ingin melanutkan
penggoresan ke kuadran III terdapat ban"ak bekteri S.Aureus "ang mati akibat
panas. )edua* saat melanutkan penggoresan ke kuadran III tidak sesuai dengan
penggoresan ak!ir dari kuadran II* se!ingga tidak ada mikroba "ang terikut padaose saat digorekan pada kuadran selanutn"a. 0etapi seau! ini tidak ada
kontaminasi mikroba "ang lain. )arakteristik pertumbu!an kolonin"a memiliki
bentuk medium* memiliki enis ele#asi irregular* enis permukaann"a kasar* dan
memiliki margin "aitu lobate.
• .oli
%ada bakteri .oli* pada kuadran I masi! tumbu! dengan baik dan terdapat
ban"ak sekali koloni "ang polan"a mengikuti pola ig-ag goresan ose. 0etapi
pertumbu!ann"a !an"a mencapi sedikit bagian dari kuadran II. Sedangakan pada
kuadran III dan IH suda! tidak ada lagi koloni besar maupun koloni kecil dari
bakteri .oli. al ini dapat disebabkan ole! beberapa faktor. %ertama* "aitu karena pembakaran ose* dimungkinkan saat pembakaran ose "ang kedua kalin"a saat ingin
melanutkan penggoresan ke kuadran II terdapat ban"ak bekteri .oli "ang mati
dan !an"a men"isakan sedikit sekali bakteri .oli. 0etapi seau! ini tidak ada
kontaminasi mikroba "ang lain. )arakteristik pertumbu!an kolonin"a memiliki
bentuk point 'titik(* memiliki enis ele#asi spindle* enis permukaann"a kasar* dan
memiliki margin "aitu lobate.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 16/23
. )esimpulan apaka! "ang dapat ditarik dari praktikum ini ?
Analisa Prosedr
Me!ode S!rea" Pla!e Goresan Kadran
Isolasi mikroba "aitu memisa!kan mikroba dari lingkungann"a di alam dan
menumbu!kann"a sebagai biakan murni pada medium buatan. <alam mempertumbu!an
mikroorganisme dapat menggunakan tiga macam enis media* "aitu medium agar
miring* medium agar tegak* dan medium brot!. Setiap medium memiliki peranann"a
sendiri-sendiri ter!adap pertumbu!an mikroba "ang ingin diamati. %ada medium agar
miring bakteri aerob seperti S.Aureus dan .oli dapat tumbu! dengan subur karena
mandapatkan oksigen "ang ban"ak* sedangakan pada medium agar tegak !an"a
mendapatkan sedikit sekali oksigen dan meng!asilkan koloni "ang dapat tumbu! !an"a
sedikit. %ada medium brot! kedua enis bakteri ini dapat tumbu! akan tetapi tidak
seban"ak dan seoptimal pada medium agar miring. $etode kedua "ang dilakukan pada
praktikum ini dalam menumbu!kan kultur dengan metode streak plate "ang
meng!asilkan pertumbu!an mikroba !an"a mencapai kuadran II saa. @ang disebabkan
ole! beberapa faktor seperti pembakaran ose.
%ada teknik isolasi*kulti#asi* dan preser#asi kultur semua prosedur !arus melalui
teknik aseptis dan sterilisasi agar tidak teradi kontaminasi pada mikroorganisme "ang
ditumbu!kan dan didapatkan kultur murni. Setela! peminda!an kultur* semua media
"ang suda! berisi kultur dilakukan pen"impanan dalam inkubator selama + !ari* setela!
itu baru dapat diketa!ui !asiln"a.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 17/23
%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan
antara lain 3 bunsen* 3 ose* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass +5,ml85,,ml* 3 tabung berisi
auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3 erlenme"er* tissue* kertas
label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan digunakan adala! kultur
bakteri S.Aureus. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis diri dan lingkungan.
$en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan kemudianmen"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Setela! itu* ambil
ca/an petri "ang suda! berisi media agar dan bagi menadi empat kuadran menggunakan
spidol !itam "ang ditulis pada bagian belakang ca/an petri. <an angan lupa memberi label
pada ca/an petri tersebut ba!/a digunakan untuk metode streak plate. %iarkan ose pada
bunsen !ingga kemera!an dan celupkan ke dalam alko!ol. Dlangi langka! tersebut seban"ak
tiga kali. %ada pemiaran ose terak!ir* masukkan ose ke dalam tabung reaksi "ang berisi kultur
bakteri S.Aureus secara aseptis "ang selalu berada di dekat api bunsen. Buka kapas penutup
tabung "ang berisi kultur dengan cari kelingking dan ari manis* kemudian masukkan ose
"ang suda! dipiarkan perla!an-la!an dan goreskan dari ba/a! !ingga atas untuk mengambil
bakteri S.Aureus. Setela! itu panaskan mulut tabung reaksi dan tutup kembali dengan kapas
penutup.
%anaskan pinggiran ca/an petri kemudian buka tutupn"a* goreskan ose "ang berisi
kultur pada kuadran I mengikuti pola ig-iag* tutup ca/an petri dan panaskan kembali
beserta osen"a* buka kembali tutup ca/an petri dan lanutkan penggoresan dari uung kuadran
I menuu kuadran II. Dlangi langka!-langka! tersebut !ingga ke kuadran IH. Jika suda!
selesai penggoresan !ingga kuadran IH* panaskan pinggiran ca/an petri dan ose. se "ang
suda! dipiarkan dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi alko!ol. )emudian bungkus
ca/an petri dengan kertas pa"ung dan lakukan inokulasi selama + !ari pada su!u 4, , .
Setela! + !ari baru bisa diketa!ui !asil pertumbu!an dari bakteri S.Aureus.
Pen#en$eran %&'% (in##a %&')
%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan
antara lain 3 bunsen* 3 ose* mikro pipet beserta tipn"a* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass
+5,ml85,,ml* 3 tabung berisi auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3
erlenme"er* tissue* kertas label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan
digunakan adala! kultur bakteri S.Aureus. Siapkan terlebi! da!ulu enam tabung reaksi dan
diberi label 3,-3 !ingga 3,-6. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis diri dan
lingkungan. $en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan kemudian
men"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Setela! itu semprot
mikropipet dengan alko!ol kemudian dilap dengan tissue. Ambil uung mikro tip perla!an-
la!an dalam beaker glass "ang berisi mikro tip. Jika mikro tip suda! terpasang secara benar*
tekan 0!umb )nob 'tekanan pertama(* angan ditekan terlalu dalam untuk mengambil kultur
seban"ak 3ml "ang berada dalam tabung rekasi secara aseptis berdada di dekat api. 0a!an
pipet dalam posisi #ertikal kemudian lepaskan tekanan dari t!umb knob secara perla!an-
la!an* maka cairan akan masuk kedalam tip. Siapkan tabung reaksi "ang suda! diberi label 3, -
3* tekan t!umb knob 'tekanan kedua( semaksimal secara perla!an !ingga semua cairan keluar
dari uung tip. Jika ingin melepas tip* tekan tombol "ang bearada disamping mikro pipet* tip
akan terdorong keluar dengan sendirin"a. %anaskan mulut tabung reaksi dan tutup kembali
dengan kapas penutup. omogenkan larutan dengan cara di#orte !igga tercampur sempurna.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 18/23
Dlangi langka!-langka! tersebut !ingga didapatkan tabung reaksi ke enam dengan label
pengenceran 3,-6.
Me!ode S*read Pla!e
%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan
antara lain 3 bunsen* 3 ose* mikro pipet beserta tipn"a* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass
+5,ml85,,ml* 3 tabung berisi auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3
erlenme"er* tissue* kertas label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan
digunakan adala! kultur bakteri S.Aureus. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis
diri dan lingkungan. $en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan
kemudian men"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Siapkan 4
ca/an petri "ang berisi agar dan diberi label 3, -9 sampai 3,-6. Siapkan mikro pipet* ambil
cairan "ang berisi pada tabung dengan label 3, -9 seban"ak ,*3ml. a/an petri pertama "ang
memiki label 3,-9 dipanaskan pinggirann"a dan dengan perla!an-la!an masukkan cairan "ang
ada pada mikro pipet ke dalamn"a. Eatakan cairan tersebut dengan spreader "ang suda!
dipanaskan terlebi! da!ulu* ketika spreader suda! tidak membara baru masukkan ke dalam
ca/an petri dan ratakan cairan ke seluru! bagiat atas agar. 0utup ca/an petri dan panaskan
kembali pinggirann"a. Dlangi langka!-langka! tersebut untuk ca/an petri dengan label 3, -5
dan 3,-6 dengan isi "ang disesuaikan pula dengan tabung reaksi dengan label "ang sama.
%elabelan ini didasarkan ole! pengenceran keempat*kelima dan keenam. Inokulasi ketiga
ca/an petri selama + !ari pada su!u 4,,.
Me!ode Por Pla!e
%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan
antara lain 3 bunsen* 3 ose* mikro pipet beserta tipn"a* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass+5,ml85,,ml* 3 tabung berisi auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3
erlenme"er* tissue* kertas label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan
digunakan adala! kultur bakteri S.Aureus. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis
diri dan lingkungan. $en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan
kemudian men"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Siapkan 4
ca/an petri kosong dan diberi label 3, -9 sampai 3,-6. Siapkan mikro pipet* ambil cairan "ang
berisi pada tabung dengan label 3,-9 seban"ak ,*3ml. a/an petri pertama "ang memiki label
3,-9 dipanaskan pinggirann"a dan dengan perla!an-la!an masukkan cairan "ang ada pada
mikro pipet ke dalamn"a. )emudian tuang agar "ang steril "ang suda! tidak panas ke dalam
ca/an petri perla!an-la!an !ingga menutupi seluru! bagian dari alas ca/an petri. 0utup
ca/an petri dan panaskan kembali pinggirann"a. %utar ca/an petri di atas mea mengikuti
pola angka : !ingga sekiran"a suda! tercampur rata. Dlangi langka!-langka! tersebut untuk
ca/an petri dengan label 3,-5 dan 3,-6 dengan isi "ang disesuaikan pula dengan tabung reaksi
dengan label "ang sama. %elabelan ini didasarkan ole! pengenceran keempat*kelima dan
keenam. Inokulasi ketiga ca/an petri selama + !ari pada su!u 4,,.
Trans+er Kl!r dari Ta,n# Rea"si "e Ta,n# Rea"si
a. Medi- A#ar Mirin# "e Medi- A#ar Mirin#
,. Medi- A#ar Mirin# "e Medi- A#ar Te#a" $. Medi- A#ar Mirin# "e Medi- Bro!(
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 19/23
PEMBAHASAN
Te"ni" Preserasi Krio#eni"
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 20/23
3. %ada teknik isolasi* apa perbedaan koloni mikroba "ang tumbu! pada masing-masing
kuadran ? $engapa demikian ? Jelaskan.
+. Apa "ang dimaksud dengan sele$!ie -edia ? $engapa media tersebut digunakan
dalam teknik isolasi ? Jelaskan. Sebutkan conto! sele$!ie -edia/ seban"ak +.
4. Apaka! koloni "ang terpisa! pada teknik isolasi merupakan pertumbu!an dari satu sel
mikroba ? Apaka! koloni tersebut dapat dikatakan sebagai kultur murni ? Jelaskan.
9. Apa keunggulan metode Streak Plate dan Spread Plate pada teknik isolasi mikroba?
Jelaskan pula tentang Loop Dilution.
%erbedaan pada masing masing kuadran '&andar*+,,6( 2
• )uadran I 2 0erdapat ban"ak sekali koloni "ang tampak. )oloni berumla!
ribuan atau lebi! "ang saling bertumpukan se!ingga sulit untuk dapat
di!itung dan sulit untuk dipisa!kan.• )uadran II 2 Jumla! koloni dari mikroba terli!at mulai berkurang 'tak
seban"ak di kuadran I(. Camun masi! terli!at koloni "ang bertumpukan dan
masi! sulit untuk dilakukan per!itungan.
• )uadran III 2Jumla! koloni mulai ban"ak berkurang dan suda! terli!at tidak
ban"ak "ang bertumpukan* se!ingga bisa dimulain"a per!itungan.
• )uadran IH 2 0erdapat Indi#idual sel "ang mulai terpisa!dari kolonin"a. <an
disinala! per!itungan bisa dilakukan ter!adap koloni tunggal.
%erbedaan umla! koloni pada masing-masing kuadran disebabkan ole!
adan"a goresan ose dan pembakaran ose "ang memungkinkan terbunu!n"asebagian mikroba se!ingga semakin ke kuadran III dan IH semakin ban"ak
koloni "ang berkurang dan didapatkann"a sel tunggal 'Sil#a* +,34(.
$edia selektif 2 adala! media untuk men"eleksi mikroba* se!ingga sala!
satu enis mikroba akan terbunu!* dan !an"a men"isakan mikroba "ang diinginkan
saa. 0erbunu!n"a sala! satu mikroba dikarenakan dalam media tersebut terdapat
suatu at kimia tertentu se!ingga dapat menekan pertumbu!an mikroba lain dan
merangsang pertumbu!an mikroba "ang diinginkan. onto!n"a 2 mannitol salt agar
atau disingkat $SA 'agar garam manitol ( untuk identifikasi stap!"lococcus aureus*
SSA* $BA dan HEBA '%elcar* +,,:(.
$edia selektif digunakan dalam teknik isolasi bertuuan untuk mengisolasi
mikroorganisme tertentu untuk mendapatkan mikroorganisme "ang diinginkan*
conto!n"a untuk mengisolasi S. Aureus.$edia "ang digunakan mengandung at-at
tertentu "ang dibutu!kan S.Aureus untuk tumbu! tetapi meng!ambat pertumbu!an
mikroorganisme "ang lainn"a 'Baird* +,3+(.
Bukan* koloni "ang terpisa! bukanla! merupakan pertumbu!an dari satu sel
mikroba. al ini dikarenakan kultur "ang terdapat di kuadran terak!ir atau kuadran
IH merupakan koloni* bukanla! sel tunggal dari mikroba. )oloni dapat dili!at
dengan mata telanang sedangkan satu sel tunggal tidak dapat dili!at dengan mata
telanang* diakibatkan ukurann"a "ang sangat kecil. Jika penggoresan atau teknik
isolasi dilakukan secara tepat dan aseptis* maka koloni tersebut merupakan kultur
murni karena terdiri dari kumpulan mikroba seenis 'ampbell* +,,7(.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 21/23
5. Apa kegunaan penamba!an gliserol pada proses preser#asi kultur? Jelaskan.
Kesi-*lan
• Streak %late 2 pembagian berdasakan goresan kuadran se!ingga akan
meng!asilkan koloni tunggal. )oloni "ang di!asilkan !an"a dari 3 enis
saa. )euntungan lainn"a adala! kontaminan "ang muda! dibedakan.
)arena dalam metode streak plate ose digoreskan dengan pola tertentu
seperti pola ig-ag* maka koloni "ang tumbu! diluar pola tersebut dapatdin"atakan sebagai kontaminan 'S!arma* +,,7(.
• Spread %late 2 dapat memisa!kan atau membedakan antara mikroba aerob
dengan mikroba anerob atau mikroba lainn"a. Selama inokulasi mikroba
akan tersebar pada permukaan agar dan akan tampak ba!/a "ang
diuntungkan adala! bakteri aerob "ang dapat tumbu! pada permukaan agar
'S!arma* +,,7(.
• 1oop <ilution 2 teknik isolasi dengan cara mengencerkan dan mengisolasi
mikroba. %engenceran bertuuan untuk meng!asilkan mikroba dengan
koloni tunggal "ang terpisa! dengan koloni-koloni lainn"a. %rinsipn"aadala! menggunakan satu seri tabung reaksi "ang diisi media cair dan
seumla! sel mikroba tertentu* enis mikroba "ang akan diamati dilepaskan
atau dilarutkan dari substratn"a ke dalam air. 0uuan dari teknik ini adala!
untuk meng!itung umla! sel mikroba 'ild* +,,5(.
%reser#asi kultur dilakukan untuk menga/etkan bakteri. Sala! satu
teknikn"a adala! pembekuan. Berbagai enis bakteri dapat dibekukan secara
langsung dalam media tumbu!n"a. %enamba!an gliserol berfungsi untuk
mengurangi dampak negatif dari pembekuan* seperti mencega! kerusakan dinding
sel dari kristalisasi saat preser#asi berlangsung '$ac!mud* +,,:(.
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 22/23
Isolasi mikroba "aitu memisa!kan mikroba dari lingkungann"a di alam dan
menumbu!kann"a sebagai biakan murni pada medium buatan. <alam mempertumbu!an
mikroorganisme dapat menggunakan tiga macam enis media* "aitu medium agar miring*
medium agar tegak* dan medium brot!. Setiap medium memiliki peranann"a sendiri-sendiri
ter!adap pertumbu!an mikroba "ang ingin diamati. %ada medium agar miring bakteri aerob
seperti S.Aureus dan .oli dapat tumbu! dengan subur karena mandapatkan oksigen "ang ban"ak* sedangakan pada medium agar tegak !an"a mendapatkan sedikit sekali oksigen dan
meng!asilkan koloni "ang dapat tumbu! !an"a sedikit. %ada medium brot! kedua enis
bakteri ini dapat tumbu! akan tetapi tidak seban"ak dan seoptimal pada medium agar miring.
$etode kedua "ang dilakukan pada praktikum ini dalam menumbu!kan kultur dengan metode
streak plate "ang meng!asilkan pertumbu!an mikroba !an"a mencapai kuadran II saa. @ang
disebabkan ole! beberapa faktor seperti pembakaran ose.
%ada teknik isolasi*kulti#asi* dan preser#asi kultur semua prosedur !arus melalui
teknik aseptis dan sterilisasi agar tidak teradi kontaminasi pada mikroorganisme "ang
ditumbu!kan dan didapatkan kultur murni. Setela! peminda!an kultur* semua media "ang
suda! berisi kultur dilakukan pen"impanan dalam inkubator selama + !ari* setela! itu baru
dapat diketa!ui !asiln"a.
Ko-*onen Penilaian LKP0
1enis Penilaian Nilai Nilai 2an#
7/17/2019 Laprak Di Print
http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 23/23
Ma"si-al di*erole(
%re lab dan <iagram Alir %&
1og Book %&
<ata asil %engamatan dan %emba!asan 3&
Akti#itas di laboratorium %&
TOTAL %&&
Ko-*e!ensi Ma(asis4a dan Nilai Ma"si-al Tia* Ko-*e!ensi
No Ko-*e!ensi Bisa Tida"
3. $ampu melakukan teknik isolasi pada media agar
ke brot! dan sebailkn"a secara aseptis dan benar 2
• Aseptis ose dan mulut tabung 8 ca/an
• $embuka sumbatan tabung 8 erlenme"er
secara aseptis dan benar
• $enggores agar dengan teknik "ang benar
+. $ampu melakukan transfer kultur dengan goresan
kuadran 2
• $enggambar kuadran pada ca/an
• Aseptis ose dan mulut tabung 8 ca/an
• $empiarkan ose setiap kali berpinda! kuadran
4. $ampu melakukan teknik preser#asi untuk
membuat stok kultur
• $eng!itung kebutu!an gliserol dan kultur
• $enggunakan &icrotube secara aseptis dan
benar
• $enggunakan pipet mikro secara aseptis dan
benar
• $enentukan kondisi pen"impanan kultur
dengan tepat
TOTAL %&